Ki-67聯合p16檢測對HPV持續高危陽性患者子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的診斷價值*

陳園 李忠敏 矯靜

子宮頸鱗癌是全球范圍內第二高發婦科腫瘤，發病率僅次于乳腺癌，全球每年有9%左右女性癌癥人群死于該病[1-2]。從子宮頸癌前病變發展到子宮頸鱗癌需10～20 年時間，高危型人乳頭狀瘤病毒（HR-HPV）長期持續感染可導致癌前病變，進而惡化為子宮頸鱗癌[3]。因此早期準確診斷子宮頸鱗癌及癌前病變，早日開展對癥治療措施對改善子宮頸病變患者預后意義重大。目前臨床診斷子宮頸病變的方法主要有HR-HPV 測定、液基薄層細胞學檢測，此類診斷手段對設備、技術要求頗高，臨床普及有限[4-5]。細胞周期蛋白激酶的抑制因子16（p16）為細胞周期蛋白激酶的抑制因子，其水平表達與子宮頸腫瘤的發生有關。原癌基因細胞增殖核抗原（Ki-67）有利于維持細胞增殖活性[4-6]。為了進一步探討、驗證高危型HPV 感染與細胞周期蛋白表達的關系，本研究選取新余市人民醫院2017 年12 月—2020 年11 月收治的慢性子宮頸炎患者開展對照試驗，詳情如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

納入標準：（1）均為慢性子宮頸炎[7]；（2）年齡＞18 歲；（3）術前未接受任何形式治療；（4）臨床資料完整。排除標準：（1）伴有其他部位惡性腫瘤、陰道炎；（2）重要臟器功能不全；（3）伴有免疫缺陷性疾病、傳染性疾病、性?。唬?）哺乳期或妊娠期。回顧性選取新余市人民醫院2017 年12 月—2020 年11 月收治的慢性子宮頸炎患者134 例、子宮頸低級別鱗狀上皮內病變131 例、子宮頸高級別鱗狀上皮內病變129 例、HPV 持續高危陽性患者118 例，分別記為對照1 組、對照2 組、對照3 組、研究組。研究經過醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法

檢測方法：一般情況下TCT 檢查結果提示子宮頸高級別鱗狀上皮內病變時，檢查陰道鏡活檢。

Ki-67 與p16 測定方法：采取免疫組化法檢測四組患者組織中Ki-67、p16 表達情況，子宮頸組織標本石蠟包埋、切片，滅活、微波抗原修復、洗滌，添加鼠抗人Ki-67 單克隆抗體、p16 抗體（美國Abcam 公司），復染、脫水、封片。染色程度為無色（0 分）、淡黃色（1 分）、黃色（2 分）、棕黃色（3 分），分別記為0、1、2、3 分，計算染色程度與染色范圍評分（0 分：無染色或非常弱的染色，即標記物沒有在組織中出現；1 分：弱染色，在組織中僅有輕微的標記物染色；2 分：中等染色，標記物呈現中等程度的強度和范圍；3 分：強染色，標記物呈現較強的染色強度且范圍廣泛）的乘積，將結果為0 分者記為陰性（-）表達，否則記為陽性（+）表達（1～4 分記為+，5～8 分記為++，＞8 分記為+++）。

1.3 觀察指標

（1）四組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達情況及陽性率比較。（2）采用列聯表法分析各組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達的關系。（3）Ki-67 聯合p16 檢測對HPV 持續高危陽性患者子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的診斷價值。

1.4 統計學處理

采用SPSS 23.0 軟件進行統計學分析。計數資料以率（%）表示，比較采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗；正態分布且方差齊的計量資料表示以（±s），兩組間比較采用t 檢驗，多組間采用方差分析；采用列聯表法分析在各組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達的關系。采用受試者操作特征（ROC）曲線判定Ki-67聯合p16 檢測對HPV 持續高危陽性患者子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的診斷效能。P＜0.05 為差異有統計學意義。計數資料兩兩比較需調整檢驗標準為α'，其中α'=α/k×（k-1）/2，α=0.05，k=4。

2 結果

2.1 四組一般資料比較

對照1 組年齡21～71 歲，平均（42.11±4.55）歲，病程3 個月～8 年，平均（3.12±0.41）年；對照2 組年齡21～72 歲，平均（43.58±5.58）歲，30 例行子宮全切術，48 例單純行LEEP 子宮頸錐形切除術；對照3 組年齡20～75 歲，平均（43.85±5.55）歲，51 例行子宮全切術，78 例單純行子宮頸錐形切除術；研究組年齡25～71 歲，平均（42.31±4.59）歲。四組年齡差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

2.2 四組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達情況及陽性率比較

四組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達分布比較差異均有統計學意義（Z=29.852，P＜0.001；Z=25.856，P＜0.001），研究組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達陽性率均高于其余三組（P＜0.01），且對照2 組、對照3 組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達陽性率均高于對照1 組（P＜0.01）。見表1、2。

表1 四組病灶組織Ki-67、p16蛋白表達情況對比[例（%）]

表2 四組病灶組織Ki-67、p16蛋白陽性表達率[例（%）]

2.3 子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達的關系

研究組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變106 例，子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16蛋白表達均呈正相關（C=0.745、0.641，P＜0.01），見表3、4。

表3 四組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67蛋白表達的關系（例）

表4 四組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織p16蛋白表達的關系（例）

2.4 Ki-67、p16 診斷子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的價值

HPV 持續高危陽性患者Ki-67、p16 及聯合診斷子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的敏感度分別為65.40%、69.20%、78.90%，特異度分別為71.70%、73.60%、73.60%，AUC 分別為0.718、0.729、0.816，聯合診斷的AUC 值高于Ki-67、p16 單一診斷（Z=6.854，P=0.000；Z=6.741，P=0.000），見表5、圖1。

圖1 HPV持續高危陽性患者組織標本中Ki-67、p16診斷子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的ROC曲線

表5 HPV持續高危陽性患者組織標本中Ki-67、p16診斷子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的價值

3 討論

不同分型的HPV 往往對子宮頸組織細胞的影響是不同的，發展成HPV 持續高危陽性患者的概率也不同。子宮頸鱗狀細胞癌致病因素較多且發病機制復雜[8]。目前臨床治療中通過子宮切除等雖可有效治愈部分患者，但由于對子宮頸鱗狀細胞癌的臨床診斷多以病理組織活組織檢查為金標準，部分患者隨著病情遷延，早期確診及治療積極性較低，病死率仍居較高水平[9-10]。因此尋找子宮頸鱗狀細胞癌診斷的指標，有利于提高臨床檢出率，降低病理組織活檢對患者機體造成的損傷。

本研究發現，四組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達分布比較差異均有統計學意義，研究組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達陽性率均高于其余三組，且對照2 組、對照3 組病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達陽性率均高于對照1 組，提示在HPV 持續高危陽性患者中病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達陽性率表達偏高。Ki-67 將pRb 磷酸化，從而進一步解除p16 的抑制效應，啟動DNA 復制，促進細胞的增殖[11]。p16 作為轉錄調節因子細胞[12]。有研究證實，在人類的HPV 持續高危陽性患者中均存在Ki-67、p16 的異常表達[13]。

本研究還發現，研究組子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達均呈正相關，ROC 曲線分析結果顯示，HPV 持續高危陽性患者Ki-67、p16 及聯合診斷子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的敏感度分別為65.40%、69.20%、78.90%，特異度分別為71.70%、73.60%、73.60%，AUC 分別為0.718、0.729、0.816，聯合診斷的AUC 值高于Ki-67、p16 單一診斷，提示子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達均呈正相關，Ki-67 聯合p16 檢測對HPV 持續高危陽性患者子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的診斷價值較高。Ki-67 是目前已知的增殖抗原中最具增殖能力代表性，且是應用廣泛的細胞增殖標記。有研究指出，高水平的p16 蛋白能增加HPV 持續高危陽性患者轉移概率，其機制可能與誘導AP-1 活性的正反饋循環有關[14-15]。本研究與上述相關報道相符，且二者均可表明p16 可發揮促癌或抑癌活性的作用，其異常表達與子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的發病及進展存在一定關聯。

綜上所述，子宮頸高級別鱗狀上皮內病變與HPV 持續高危陽性患者病灶組織Ki-67、p16 蛋白表達均呈正相關，Ki-67 聯合p16 檢測對HPV 持續高危陽性患者子宮頸高級別鱗狀上皮內病變的診斷價值較高。