鈣蛋白酶2通過(guò)誘導(dǎo)三陰乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化抵抗紫杉醇的機(jī)制探討

陳聰，吳元肇，鄭克思，應(yīng)文兵，胡逸人

三陰性乳腺癌是具有較強(qiáng)侵襲性表型的乳腺癌亞型，易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，且無(wú)法進(jìn)行內(nèi)分泌治療和人表皮生長(zhǎng)因子受體2 靶向治療［1-2］。化學(xué)治療仍然是三陰性乳腺癌的重要治療手段，但隨著治療的推進(jìn)，腫瘤細(xì)胞逐漸出現(xiàn)藥物抵抗而產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥，最終導(dǎo)致治療失敗［3］。因此，如何解決藥物抵抗具有重要臨床意義。鈣蛋白酶-2（Calpain-2）是廣泛表達(dá)于人體的鈣蛋白酶家族成員，其主要通過(guò)蛋白水解活性發(fā)揮其生物學(xué)作用［4］。研究顯示，Calpain-2在腎細(xì)胞癌［5］、乳腺癌［6］、胰腺癌［7］等多種惡性腫瘤中發(fā)揮作用，參與調(diào)控細(xì)胞侵襲、遷移及轉(zhuǎn)移。此外，Calpain-2 還在肺癌［8］和結(jié)直腸癌［9］化療抵抗中發(fā)揮重要作用。但在三陰性乳腺癌中，Calpain-2與藥物抵抗的關(guān)系及相關(guān)機(jī)制還不清楚。本研究通過(guò)外源性過(guò)表達(dá)Calpain-2，觀察其在三陰性乳腺癌細(xì)胞抵抗紫杉醇（PTX）中的作用及機(jī)制，為臨床治療提供基礎(chǔ)理論支持。

1 材料與方法

1.1 主要材料 人三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞購(gòu)自南京科佰生物科技有限公司；Calpain-2過(guò)表達(dá)質(zhì)粒和空載質(zhì)粒購(gòu)自上海和元生物技術(shù)有限公司；脂質(zhì)體2000 購(gòu)自上海Invitrogen 公司；DMEM 高糖培養(yǎng)基、青-鏈霉素混合液、噻唑藍(lán)（MTT）購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司。Calpain-2 抗體、E-鈣黏蛋白（E-cadherin）抗體、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）抗體、波形蛋白（Vimentin）抗體、yes 相關(guān)蛋白（YAP）抗體和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）抗體購(gòu)自武漢云克隆科技股份有限公司；小鼠抗人大腫瘤抑制基因1（LATS1）抗體、p-LATS1抗體、p-YAP抗體、山羊抗小鼠IgG抗體及山羊抗小鼠IgG（H+L）Alexa Fluor 488 二抗購(gòu)自上海愛(ài)必信生物科技有限公司；……