尿核基質蛋白22 和非典型細胞參數在膀胱癌診斷中的臨床價值

王月妹 李 磊

（上海市靜安區市北醫院檢驗科，上海 200435）

膀胱尿路上皮癌（簡稱膀胱癌）在男性中的發病率較高[1]。尿核基質蛋白22（nuclear matrix protein 22，NMP22）是目前臨床應用較廣的膀胱癌腫瘤標志物之一[2]，但其特異性較低。其他膀胱癌的腫瘤標志物也存在著一定的不足，目前尚無標志物能同時保證高敏感性和高特異性[3]。因此，膀胱癌診斷目前仍以膀胱鏡和尿脫落細胞學檢查為主，前者為侵入性檢查，后者由病理科完成，耗時較長[4]。早期診斷膀胱癌有助于提高患者生存率、延長患者生存時間[5]。UF-5000尿有形成分分析儀可基于流式細胞術和熒光染色技術對尿液中的有形成分進行定量分析，其中非典型細胞（atypical cell，Atyp.C）參數可代表尿液中的非典型細胞或惡性上皮細胞[6-7]。目前，關于NMP22和Atyp.C參數聯合檢查用于膀胱癌診斷的研究較少。為此，本研究擬探討NMP22和Atyp.C參數聯合檢測診斷膀胱癌的效能，為早期診斷膀胱癌提供參考。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2021年10月—2022年9月上海市靜安區市北醫院行NMP22檢測和尿有形成分分析的患者3 288例，其中膀胱癌患者97例（膀胱癌組，均為男性，年齡55～84歲）、其他泌尿系統疾病患者3 191例（總對照組，其中男1 212例、女1 979例，年齡19～93歲）；將1 212例男性泌尿系統疾病患者作為男性對照組。膀胱癌依據膀胱鏡和術后病理組織學檢查確診，根據美國癌癥聯合委員會2017年發布的TNM分期標準[11]將膀胱癌分為Ⅰ期（42例）、Ⅱ期（30例）、Ⅲ期（25例）、Ⅳ期（0例）。對照組疾病類型包括膀胱炎（647例）、泌尿道感染（1 277例）、尿路結石（1 135例）、尿路狹窄（86例）、前列腺癌（46例）。排除標準：年齡<18歲，尿液樣本采集前2周內行泌尿系統相關的侵入性檢查或有手術史，進行過放療、化療或免疫治療等。本研究經上海市靜安區市北醫院倫理委員會批準（YL-20210702-10）。

1.2 方法

收集所有患者行膀胱鏡檢查前或術前的尿液樣本。采用Alere NMP22 BladderChek（膠體金法，美國雅培公司）定性檢測尿液NMP22。嚴格按試劑盒說明書進行操作。采用UF-5000尿有形成分分析儀（日本Sysmex公司）檢測尿液有形成分，得出Atyp.C熒光強度，Atyp.C參數的參考區間為0[12]。

1.3 統計學方法

采用SPSS 26.0進行統計分析。呈正態分布的計量資料以±s表示，2個組之間比較采用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。呈非正態分布的計量資料以中位數（M）[四分位數（P25～P75）]表示，組間比較采用非參數U檢驗，多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗。計數資料以例或率表示，組間比較采用χ2檢驗。采用Logistic回歸分析建立NMP22和Atyp.C熒光強度的聯合檢測方程，采用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線評價各項指標單項和聯合檢測診斷膀胱癌的效能。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 膀胱癌組和對照組各項指標比較

膀胱癌組年齡顯著低于男性對照組和總對照組（P<0.001）。膀胱癌組NMP22陽性率和Atyp.C熒光強度顯著高于男性對照組和總對照組（P<0.001）。見表1。

表1 膀胱癌組和對照組各項指標比較

2.2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22陽性率與Apty.C熒光強度比較

NMP22陽性率（P=0.001）和Apty.C熒光強度（P<0.001）隨TNM分期的增高而升高。見表2。

表2 不同TNM分期膀胱癌患者NMP22陽性率及Apty.C熒光強度比較

2.3 NMP22、Atyp.C單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的效能

聯合檢測方程為Logit（P）=2.329+2.634×NMP22（陽性=1，陰性=0）- 0.580×Atyp.C熒光強度。ROC曲線分析結果顯示，以男性對照組為參考，NMP22、Atyp.C熒光強度單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的曲線下面積（area under curve，AUC）分別為0.794、0.757、0.867。以總對照組為參考，NMP22、Atyp.C熒光強度單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的AUC分別為0.787、0.752、0.861。見表3、表4、圖1。

圖1 NMP22和Atyp.C單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的ROC曲線

表3 以男性對照組為參考時NMP22、Atyp.C熒光強度單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的效能

表4 以總對照組為參考時NMP22、Atyp.C熒光強度單項檢測和聯合檢測診斷膀胱癌的效能

3 討論

NMP22是從凋亡的尿路上皮細胞中釋放出的核有絲分裂器蛋白，膀胱癌患者尿液NMP22水平顯著升高[3]。NMP22水平受多種因素，如炎癥、感染、年齡、其他泌尿系統疾病的影響，因此特異性較低[8-9]。鑒于NMP22有較高的假陽性率，應慎重解釋NMP22陽性結果。無創的尿液脫落細胞學檢查因具有非侵入性和高特異性的優點而被廣泛使用，但該檢查需要連續3 d留取尿液樣本，且需人工鏡檢，因此干擾因素較多，重復性較差[10]。

UF-5000尿有形成份分析儀可通過熒光信號區域的不同來識別細胞中不同的核酸含量，對尿液樣本的要求較低，可以識別未染色、未離心的尿液樣本[7]。因此，相對于尿液脫落細胞學檢查，采用UF-5000尿有形成分分析儀檢測Atyp.C參數更加快速、簡單，重復性更好。有研究結果顯示，Atyp.C參數在高危尿路上皮癌患者中有較高的敏感性和特異性，且與尿液脫落細胞學檢查的結果高度一致[11]。根據世界衛生組織聯合國際泌尿外科疾病咨詢委員會發布的專家共識，Atyp.C參數符合作為膀胱癌生物標志物的標準[12]。REN等[11]以Atyp.C熒光強度≥0.10作為Atyp.C陽性的標準，其診斷膀胱癌的敏感性為59.0%、特異性為82.1%。但對于本研究人群，無論是否聯合NMP22，以0.10為Atyp.C的臨界值雖具有極高的特異性，但敏感度較低。由于本研究納入的膀胱癌患者均為男性，因此為了減小偏差，除總對照組外，本研究還設置了僅含男性的對照組。本研究結果顯示，分別以男性對照組和總對照組作為參考，以0.59作為臨界值，Atyp.C熒光強度診斷膀胱癌的特異性分別為97.6%、97.0%，聯合檢測NMP22和Atyp.C熒光強度可顯著提高對膀胱癌的診斷效能。目前，大部分研究報道的分子標志物僅在健康人群中具有良好的特異性，而對于除膀胱癌外的其他泌尿系統疾病患者的特異性普遍較低[12]。本研究結果顯示，Atyp.C參數可以較好地識別NMP22的假陽性結果，可避免非必要的膀胱鏡等侵入性檢查。

本研究尚有一些不足之處：首先，本研究為單中心研究，納入的膀胱癌患者僅97例，樣本量較小，且均為男性，無女性膀胱癌患者。這與膀胱癌主要發生在男性人群中有關。有統計數據顯示，男性膀胱癌的發病率是女性的4倍[13]。由于總對照組中女性患者所占比例（62%）更大，整體年齡高于膀胱癌組，且總對照組人群還包括多種其他泌尿系統疾病的患者，這可能對腫瘤標志物的敏感性、特異性產生了一定的影響[14]。為避免選擇性偏差，本研究還設置了僅含男性的對照組進行分析。其次，由于本研究屬于回顧性研究，不是所有患者都進行了尿液細胞脫落學檢查，因此無法比較NMP22、Atyp.C參數與尿液細胞脫落學檢查之間的一致性。再次，因本研究未檢測其他腫瘤標志物，因此無法將NMP22、Atyp.C參數與其他腫瘤標志物進行比較。最后，尚無規范的標準操作程序來指導Atyp.C檢測前的尿液樣本預處理，國內外對于Atyp.C參數的臨床價值也未達成共識。未來需要更大樣本量的前瞻性、多中心研究分析NMP22和Atyp.C參數檢測在膀胱癌中的應用價值。

綜上所述，NMP22在膀胱癌診斷中表現出高敏感性，而Atyp.C參數則表現出較高的特異性，二者聯用可顯著提高對膀胱癌的診斷效能，為膀胱癌的早期篩查和臨床決策提供指導。