老年類風濕關節炎患者免疫球蛋白、類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3水平及意義

張婷婷 王靜 張茂全 王雅楠

(青島大學附屬青島市海慈醫院(青島市中醫醫院) 1風濕免疫科,山東 青島 266034;2骨關節與創傷外科中心;3藥劑科)

類風濕關節炎多發于小關節,以對稱性分布為主,能夠引發關節畸形、腫脹、脫位,并累及其他組織臟器,促進心血管疾病、惡性腫瘤等疾病的發生與發展〔1〕。類風濕關節炎以關節軟組織及骨組織破壞為主要病理改變,免疫功能異常和炎癥因子大量釋放破壞骨關節是主要發病機制〔2〕。由于年齡對免疫系統和性激素分泌的影響,老年類風濕關節炎患者發病急,活動性較高,癥狀多樣、不典型,大關節受累比例較高〔3〕。臨床研究發現,老年類風濕關節炎患者關節外表現較多,患病2年內骨侵蝕的發生率較高〔4〕;因此探索評估該類患者治療預后的血清學指標對治療方案的選擇和療效監測具有重要意義。本研究探討老年類風濕關節炎患者免疫球蛋白(Ig)G、IgM、IgA、類風濕因子、甘露糖凝集素(MBL)、長鏈非編碼RNA(LncRNA)MEG3水平變化及意義。

1 對象與方法

1.1研究對象 選取2020年3月至2022年2月間青島大學附屬青島市海慈醫院收治的老年類風濕關節炎患者54例為類風濕關節炎組。納入標準：①符合2018年中華內科雜志發表的中國類風濕關節炎診治指南中的診斷標準;②年齡≥60歲,近3個月無激素、免疫調節藥治療史;③理解、溝通能力正常,自愿配合本研究。排除標準：①合并嚴重感染性疾病,內分泌系統疾病的患者;②有關節嚴重外傷史的患者。其中男21例,女33例;年齡61～76歲,平均(66.47±4.25)歲。病程0.6～4.2年,平均(2.63±0.81)年;首發癥狀：小關節腫痛28例,負重關節腫痛26例。收集同期志愿者36例為健康對照組,均無重要系統、臟器慢性病,男14例,女22例,年齡60～70例,平均(65.60±4.18)歲。兩組性別、年齡差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。本研究經醫院倫理委員會審核批準,受試者均簽署知情同意書。

1.2主要試劑 IgG、IgM、IgA免疫比濁檢測試劑盒購于上海科華生物工程有限公司;類風濕因子乳膠凝集檢測試劑盒購于康知(杭州)生物科技有限公司;酶聯免疫檢測試劑盒購于深圳生科源生物有限公司;Trizol提取試劑盒、逆轉錄cDNA合成試劑盒購于研卉(上海)生物科技有限公司;聚合酶鏈反應(PCR)擴增試劑盒購于上海海方生物有限公司。

1.3血清IgG、IgM、IgA、類風濕因子、MBL水平檢測 采集老年類風濕關節炎患者和健康志愿者空腹外周靜脈血5 ml,4 ℃恒溫離心10 min,收集血清,-20 ℃保存待測。免疫比濁法檢測血清IgG、IgM、IgA水平。乳膠凝集法檢測血清類風濕因子表達水平,根據試劑盒說明書將類風濕因子濃度>20 IU/ml判斷為陽性。酶聯免疫吸附試驗檢測血清MBL水平。

1.4實時熒光(RT)-PCR檢測血清LncRNA MEG3表達水平 采集老年類風濕關節炎患者和健康志愿者空腹外周靜脈血3 ml,4 ℃恒溫離心10 min,收集血清,Trizol法從血清中提取總RNA,逆轉錄得到cDNA,按照PCR擴增試劑盒說明書進行擴增。LncRNA MEG3上游引物5′-GTCATCGTACGAGTAAAGGGTCTTCGCT-3′,下游5′-CTACCGGGATGCACCCCGTTTCCTGCACG-3′,擴增產物片段131 bp。內參GAPDH上游引物5′-TGGCGGCTTAGCCTTGGCGACTCAC-3′,下游5′-CACAATCCTTTCGGACTCCGTCGG-3′,擴增產物片段176 bp;引物設計由上海捷瑞生物工程有限公司完成。PCR條件：95 ℃變性30 s,62 ℃ 變性40 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,循環40次。以GAPDH為內參計算LncRNA MEG3相對表達量。

1.5標準化治療后療效判定 老年類風濕關節炎患者均給予標準化治療,包括：非甾體抗炎藥、免疫抑制劑等個體化藥物治療方案,功能鍛煉,患者教育等。治療后使用28個關節疾病活動度評分(DAS28)判定老年類風濕關節炎患者的療效,關節包括雙側手腕、肩部、肘、膝關節,雙手指近端骨關節,手掌指關節。參照PREVOO的計算方法計算28個關節的壓痛數、腫脹數,根據治療預后分為：活動期組(DAS28>2.6分),緩解期組(DAS28≤2.6分)。

1.6統計學分析 采用SPSS25.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、Logistic回歸分析,免疫球蛋白、類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3對老年類風濕關節炎患者預后的評估價值進行受試者工作特征(ROC)曲線分析。

2 結 果

2.1兩組IgG、IgM、IgA水平比較 類風濕關節炎組血清IgG、IgM、IgA水平明顯高于健康對照組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組IgG、IgM、IgA水平、類風濕因子陽性率及MBL、LncRNA MEG3表達水平比較

2.2兩組類風濕因子陽性率及MBL、LncRNA MEG3表達水平比較 類風濕關節炎組類風濕因子陽性率明顯高于健康對照組,血清MBL、LncRNA MEG3水平明顯低于健康對照組(P<0.01)。見表1。

2.3治療后不同療效的老年類風濕關節炎患者IgG、IgM、IgA水平比較 老年類風濕關節炎患者治療后活動期組血清IgG、IgM、IgA水平明顯高于緩解期組(P<0.01)。見表2。

表2 治療后不同療效的老年類風濕關節炎患者IgG、IgM、IgA、類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3水平比較

2.4治療后不同療效的老年類風濕關節炎患者類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3水平比較 老年類風濕關節炎患者治療后活動期組類風濕因子陽性率明顯高于緩解期組,血清MBL、LncRNA MEG3水平明顯低于緩解期組(P<0.01)。見表2。

2.5老年類風濕關節炎患者預后影響因素的多因素Logistic回歸分析 將老年類風濕關節炎患者治療預后情況作為因變量(0=緩解期,1=活動期),將IgG、IgM、IgA及類風濕因子陽性率、MBL、LncRNA MEG3表達水平作為自變量,具體賦值情況為：類風濕因子表達為分類變量(1=陽性,0=陰性),其余各自變量為連續變量。經多因素Logistic回歸性分析顯示,IgG、IgM、IgA及類風濕因子陽性率、MBL、LncRNA MEG3表達水平是老年類風濕關節炎患者預后的獨立影響因素。見表3。

表3 老年類風濕關節炎患者預后影響因素的多因素Logistic回歸分析

2.6IgG、IgM、IgA、類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3對老年類風濕關節炎患者預后的評估價值 ROC曲線結果顯示,IgG、IgM、IgA及類風濕因子陽性率、MBL、LncRNA MEG3表達水平對老年類風濕關節炎患者預后均具有較高的評估價值(P<0.01)。將IgG、IgM、IgA及類風濕因子陽性率、MBL、LncRNA MEG3納入Logistic回歸模型,得出各指標聯合的數值計算公式,結果顯示各指標聯合檢測的評估價值最高〔曲線下面積(AUC)=0.940〕,敏感度、陽性預測值均明顯高于各指標單獨檢測。見表4、圖1。

圖1 IgG、IgM、IgA、類風濕因子、MBL、LncRNA MEG3對老年類風濕關節炎患者預后評估價值的ROC曲線

3 討 論

類風濕關節炎發病率存在地理區域上有較大差異,全球發病率為0.50%～1.00%,中國發病率為0.46%〔5〕。目前我國關于老年類風濕關節炎患者發病率的相關數據較少;國外研究顯示,過去10年期間,日本在快速老齡化趨勢下類風濕關節炎的發病年齡明顯增加〔6〕;美國近15年期間類風濕關節炎發病率在65～75歲人群中最高,類風濕關節炎累積風險在60歲左右快速上升〔7〕。受年齡、合并基礎病較多、免疫功能下降等因素影響,老年類風濕關節炎患者起病急,癥狀多樣且偏重,預后不良發生率高〔8〕;因此探尋能夠準確評估患者治療預后的血清學指標,對治療方案的合理選擇和療效監測具有重要意義。IgG是人體血清Ig的主要成分,占70%～75%,以單體形式存在,是初級免疫應答最持久的抗體〔9〕。抗原刺激誘導體液免疫過程中IgM是最先生成的Ig,參與人體的早期防御〔10〕。IgA分為血清型、分泌型,其中血清型IgA能夠介導細胞毒性作用,分泌型IgA參與構成人體黏膜防御系統〔11〕。本研究結果提示,老年類風濕關節炎患者IgG、IgM、IgA高表達,且經有效治療后其表達水平明顯下降。

類風濕因子是一種抗人、抗動物IgG分子片段抗原決定簇抗體,在類風濕關節炎、系統性紅斑狼瘡等自身免疫性疾病中高表達,可作為診斷指標之一〔12〕;但類風濕因子在部分慢性感染性疾病、惡性腫瘤患者中表達水平也升高,因此單獨檢測的診斷特異性不理想,應聯合其他指標〔13〕。MBL是肝臟合成并分泌的急性時相期蛋白,可通過與病原微生物表面糖基配體結合,調節吞噬作用〔14〕;還可經凝集素途徑激活補體系統,參與天然免疫防御〔15〕。LncRNA MEG3在多種人體腫瘤組織中通過調控基因缺失、啟動子超甲基化等發揮抑癌作用〔16〕。研究發現,類風濕關節炎中LncRNA MEG3低表達,通過白細胞介素-1β上調LncRNA MEG3表達后能夠促進軟骨細胞增殖,抑制軟骨細胞凋亡和胞外基質降解〔17〕。本研究結果提示,老年類風濕關節炎患者類風濕因子高表達,血清MBL、LncRNA MEG3低表達,經有效治療后能降低類風濕因子表達,升高血清MBL、LncRNA MEG3表達。

綜上,IgG、IgM、IgA及類風濕因子陽性率、MBL、LncRNA MEG3表達水平是老年類風濕關節炎患者預后的獨立影響因素,且上述指標對老年類風濕關節炎患者預后均具有較高的評估價值,各指標聯合檢測的評估價值最高,可用于老年類風濕關節炎的臨床診治。