基于氣相/液相-三重四極桿質譜法的20種生物農藥中化學農藥成分篩查

吳 霜，陳 磊，羅云米，褚能明,2，余 鷹

[1.重慶市農業科學院，重慶 401329；2.農業農村部農產品質量安全風險評估實驗室（重慶），重慶 401329]

隨著中國經濟的快速發展，人民生活水平不斷提高，人們對美好生活的向往更加強烈，對生態環境、農產品質量安全、農業生產安全等問題高度關注。農業生產中長期大量使用化學農藥帶來的負面影響日益凸顯，迫使科研工作者積極研究和開發各種新型生物農藥。生物農藥是以自然界生物來源物質作為有效成分的有害生物防治產品，如微生物源、植物源和動物源農藥等，具有高效、安全、對環境友好等特點。近年來，生物農藥的研發與應用得到了各方大力支持，但與此同時，許多生產者為了提高藥效，爭奪市場，在產品上弄虛作假，生物農藥產品的質量問題也被頻頻報道，包括有效成分含量不足或缺失、違規添加隱性成分等。其中，在生物農藥中添加隱性成分的情況尤為突出[1-4]。因此，抓好生物農藥檢測檢驗是保障農藥產品質量、農業生產安全和農產品質量安全的重要基礎。

目前，化學農藥的定性定量檢測方法主要有比色法、液相色譜法、氣相色譜法、液相色譜串聯質譜法和氣相色譜串聯質譜法。基于被測樣品理化性質的不同，樣品處理方法也有所差異[5-9]。本研究采用前期建立的QuEChERS 凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯質譜法[10-14]，對20 個市售生物農藥進行了化學農藥成分篩查，以期為生物農藥產品的質量檢驗提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

三重四極桿型氣相色譜質譜聯用儀GCMSTQ8050 NX（日本島津公司）；Waters Xevo-TQ-XS 高效液相色譜串聯質譜儀（美國Waters 公司）；WH-600超聲波清洗機（濟寧萬和超聲電子設備有限公司）；臺式高速冷凍離心機H1850R（湖南湘儀離心機儀器有限公司）；Elix5 超純水系統（美國Millipore 公司）；T18-B-S25 勻漿儀（德國IKA 公司）；SK-1 快速混勻器（浙江省金壇市科析儀器有限公司）；TTL-DCII 型多功能氮吹儀（北京同泰聯科技發展有限公司）；TP-402 天平（美國Denver 公司）；微量加樣器（德國Eppendorf公司）。

72 種化學農藥標準品：α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氯氰菊酯、甲氰菊酯、五氯硝基苯、腐霉利、氟胺氰菊酯、醚菊酯、甲拌磷、甲拌磷亞砜、甲拌磷砜、氟蟲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚、氰戊菊酯、聯苯菊酯、氟氰戊菊酯、三唑酮、乙烯菌核利、氯氟氰菊酯、三氯殺螨醇、溴氰菊酯、氯菊酯、異菌脲、百菌清、二甲戊靈、氟氯氰菊酯、水胺硫磷、三唑磷、馬拉硫磷、甲霜靈、對硫磷、甲基異柳磷、氧樂果、殺螟硫磷、二嗪磷、嘧霉胺、毒死蜱、敵敵畏、丙溴磷、伏殺硫磷、溴蟲腈、氟甲腈、涕滅威、涕滅威亞砜、涕滅威砜、辛硫磷、霜霉威、蟲酰肼、甲萘威、吡蟲啉、阿維菌素、甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽、噻蟲嗪、氯吡脲、除蟲脲、啶蟲脒、氟啶脲、嘧菌酯、多效唑、吡唑醚菌酯、克百威、3-羥基克百威、滅多威、滅幼脲、噠螨靈、多菌靈、烯酰嗎啉、氯蟲苯甲酰胺、咪酰胺等農藥標樣購自農業農村部環境質量監督檢驗測試中心（天津），濃度為1 000 mg·L-1。

乙腈、甲醇：色譜純；水：超純水；氯化鈉：分析純；針式過濾器（含150 mg MgSO4和50 mg PSA），天津阿爾塔科技有限公司。

樣品均為市售生物農藥。

1.2 測定方法

市售生物農藥中72 種化學農藥的檢測參照NY/T 761—2008[15]、GB/T 20769—2008[16]、GB 23200.113—2018[17]，以及實驗室前期建立的方法[10-14]進行樣品前處理及儀器分析。

2 結果與分析

2.1 檢測方法的驗證

加標回收試驗結果顯示，72 種化學農藥標準品的平均回收率為70%～120%，相對標準偏差（RSD）在20%以內，定量限在0.01～0.05 mg·kg-1之間，符合農藥殘留檢測要求[18]。

2.2 質譜檢測條件的確定

通過對檢測條件的優化，確定72種化學農藥的質譜檢測參數（45 種化學農藥的GC-MS/MS 檢測參數，27 種化學農藥的UPLC-MS/MS 檢測參數），各化學農藥的保留時間、定量離子對等參數詳見表1、表2。

表2 27種化學農藥的UPLC-MS/MS檢測參數

2.3 實際樣品的檢測

選取市售植物源和微生物源殺蟲殺菌劑共20個樣品，對其化學農藥成分分別進行GC-MS/MS 和UPLCMS/MS 檢測。結果顯示，市售生物農藥中未檢出靶標化學農藥的有蘇云金桿菌、小檗堿、大蒜油、乙蒜素、桉油精、金龜子綠僵菌1#、金龜子綠僵菌2#、枯草芽孢桿菌1#、枯草芽孢桿菌2#、短穩桿菌和春雷霉素。檢出化學農藥成分的生物農藥產品占比為45%，各產品含化學農藥成分種類數量分別為苦參堿9 種、蛇床子素3種、香芹酚1種、球孢白僵菌4種、多殺霉素4種、多抗霉素2種、中生菌素4種、多粘類芽孢桿菌6 種、D-檸檬烯1 種。并且，其中檢測出克百威、氰戊菊酯等禁限用化學農藥，各成分含量見表3。

表3 20個生物農藥中化學農藥成分檢測結果

3 結論

本研究綜合運用QuEChERS 凈化法和氣相/液相-三重四極桿串聯質譜法，對20個市售生物農藥樣品進行了化學農藥成分篩查，結果表明，購買的20個生物農藥樣品中共檢出21種化學農藥成分，檢出化學農藥成分的生物農藥產品占比為45%。這不僅驗證了前期建立的72種禁限用和高頻檢出化學農藥質譜檢測方法的可行性，而且為農產品生產環境安全評價、農產品安全認證等級劃分、農作物農藥藥害分析鑒定、病蟲害抗藥性分析，以及為進一步規范生物農藥生產和生物農藥產品質量監督檢驗提供參考。