格列齊特片（Ⅱ）溶出曲線考察與有關物質測定*

劉延娟，楊國寧，蔡 偉，趙蕊蕊，李鵬戰

（山東省菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東菏澤 274000）

格列齊特屬磺酰脲類降糖藥，可選擇性地作用于胰島β 細胞，促進胰島素分泌，并提高進食葡萄糖后的胰島素釋放，適用于單用飲食控制療效欠佳的輕、中度2 型糖尿病的治療。有研究發現，格列齊特可通過抑制哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路對高糖誘導的足細胞損傷起防護作用［1］，輔助治療高脂血癥并2型糖尿病療效較好［2-4］，較其他口服降糖藥有更好的控糖作用，臨床應用廣泛。本研究中收集了國內8 家企業生產并在山東省內流通的58 批格列齊特片（Ⅱ），考察其性狀、鑒別、檢查及含量測定項目，并對樣品進行了溶出曲線分析和雜質分析，為生產企業進一步提升藥品內在質量和藥品監管提供參考［5-6］。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1260 型高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；XS105 型電子分析天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；RC12AD 型自動溶出試驗儀（天津市天大天發科技有限公司）；SYSTEM 860DL 型自動溶出儀（美國Logan公司）。

1.2 試藥

格列齊特對照品（批號為100269 - 202107，含量≥99.7%），格列齊特雜質Ⅰ對照品（批號為101191- 201602，含量99.8%），對甲苯磺酰胺對照品（批號為100131 - 202205，含量99.8%），雜質B 對照品（批號為101447 - 201901），均購自中國食品藥品檢定研究院；對甲苯磺酰脲對照品（山東潤森化工有限公司，批號為BH2111005，含量99.5%）；格列齊特片（Ⅱ）樣品58 批次，規格均為每片80 mg，樣品信息見表1。分別抽取自生產企業（12批、20.69%）、經營企業（38批、65.52%）和醫療機構（8批、13.79%）。

表1 樣品信息（n=58）Tab.1 Information of samples（n=58）

2 方法與結果

2.1 溶出曲線考察

方法：根據藥物溶出曲線測定和相似性比較技術指導原則方法，考察格列齊特的溶出情況，在適宜的時間點取樣，按紫外-可見分光光度法，在226 nm 波長處測定吸光度。繪制溶出曲線；通過相似因子（f2）法［7］進行溶出曲線比較。

溶液制備：采用溶出試驗儀，以pH 8.6 磷酸鹽緩沖液作溶出介質，在15，30，45，60，90，120，150，180，210，240 min 時自動取樣，每次取10 mL，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。取格列齊特對照品20 mg，精密稱定，置250 mL 容量瓶中，加溶出介質適量，置溫水浴中使溶解，放冷，加溶出介質定容，搖勻，即得對照品溶液。

結果分析：以H 企業（為原研藥技術轉移企業）樣品為參比制劑，比較各企業樣品溶出情況，結果見表2和圖1。結果C企業樣品和參比制劑最相似，其次是E企業，其余各企業樣品和參比制劑比較，f2均大于50。

2.2 有關物質考察

2.2.1 格列齊特雜質B 含量測定

色譜條件：色譜柱為Agilent Eclipse XDB - C8柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈- 水- 三乙胺- 三氟醋酸（40∶60∶0.1∶0.1，V/V/V/ V）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為235 nm；柱溫為30 ℃；進樣量為20 μL。

溶液制備：取格列齊特雜質B 對照品適量，精密稱定，用25%二甲基亞砜乙腈溶液溶解并制成每1 mL 含16 μg 的溶液；精密量取1 mL，置50 mL 容量瓶中，加25%二甲基亞砜乙腈溶液定容，搖勻，作為對照品溶液。取樣品細粉（約相當于格列齊特0.4 g）適量，精密稱定，置10 mL 容量瓶中，加25%二甲基亞砜乙腈溶液溶解并定容，搖勻，5 000 r/min 離心10 min，取上清液，濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

方法學考察：按相關要求進行方法學考察，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液相同保留時間處有相應色譜峰，詳見圖2；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均小于2.0%，表明儀器精密度良好，供試品溶液在室溫放置12 h內基本穩定，方法重復性良好。

1. 雜質BA. 對照品溶液 B. 供試品溶液圖2 雜質B的高效液相色譜圖1.Impurity BA.Reference solution B.Test solutionFig.2 HPLC chromatograms of impurity B

樣品含量測定：取樣品適量，按擬訂方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結果表明，各生產企業樣品均有雜質B檢出，其中G 企業樣品雜質B 的含量較其他企業高。部分樣品含量測定結果見表3。

表3 不同企業部分樣品雜質B含量測定結果（%，n=3）Tab.3 Results of content determination of impurity B in partial samples from different manufacturing enterprises（%，n=3）

2.2.2 雜質譜檔案建立

通過分析合成工藝與可能的降解途徑，采用高效液相色譜（HPLC）法，取各批樣品及經過破壞性試驗（酸、堿、高溫和光照降解）的樣品適量，按2.2.1項下方法制備供試品溶液，再按2.2.1 項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。雜質來源分析見表4（其中，+表示含有雜質，+ + 表示雜質增加顯著；鹽酸、氫氧化鈉濃度均為1 mol/L），格列齊特片（Ⅱ）雜質譜見圖3。格列齊特片（Ⅱ）主要存在6 種雜質。通過HPLC 法對照品定位，確認其中4種成分。結果見表5。

圖3 格列齊特片（Ⅱ）雜質的高效液相色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of impurities in Gliclazide Tablets（Ⅱ）

表4 雜質來源分析Tab.4 Analysis of impurity sources

表5 格列齊特片（Ⅱ）雜質信息Tab.5 Information of impurities in Gliclazide Tablets（Ⅱ）

樣品雜質檢測：54批樣品檢出對甲苯磺酰脲，58批樣品檢出對甲苯磺酰胺，42 批樣品在相對保留時間0.39處有雜質檢出，55批樣品檢出雜質Ⅰ，50批樣品在相對保留時間1.26 處有雜質檢出，檢出率分別為93.10%，100%，72.41%，94.83%，86.21%。

3 討論

58 批樣品的單個雜質檢出含量在0.010%～0.086%之間，雜質總量在0.032%～0.22%之間，樣品含量在97.6%～103.4%之間，均符合2020 年版《中國藥典（二部）》規定。

本研究結果顯示，山東省內生產流通的格列齊特片（Ⅱ）體外溶出情況與參比制劑比較相似性良好，部分企業樣品在特定時間點溶出有所差異，主要是因為處方工藝差異造成的，建議相關企業改善生產工藝，進一步提高藥品有效性。通過對各企業樣品的雜質分析，發現部分企業樣品雜質含量與第十版歐洲藥典中對格列齊特原料藥中雜質B的限定要求比較，接近或超出原料藥限度（0.000 2%）。

山東省內市場上流通的格列齊特片（Ⅱ）質量較好。現行檢驗標準基本能全面反映本藥品質量。從探索性研究發現，部分企業雜質含量偏高，仍存在質量風險。從用藥安全考慮，建議檢驗標準增加有關物質雜質B的定量檢查及其他雜質的限量控制，從生產源頭進一步控制和提高藥品質量。