血小板抗體產生的影響因素及臨床輸注效果的分析

柴華香，羅梓瑜，段愛志，李德應，董偉群

（昆明醫科大學第一附屬醫院輸血科，云南 昆明 650032）

隨著當代醫療技術的發展和臨床疾病的復雜多樣，輸血治療已經成為臨床治療的重要手段，成分輸血已成為當代輸血技術的趨勢。血小板主要參與機體生理止血，目前廣泛運用于治療和預防出血。然而不是所有患者輸注血小板都能取得滿意療效，一些非免疫性因素以及免疫性因素都會對血小板的輸注效果產生影響，其中免疫因素的影響最大，輸血、妊娠等免疫刺激，可使血小板抗體在患者體內產生[1]，而血小板抗體的存在則容易發生血小板的輸注無效、非溶血性發熱反應[2]等不良反應。因此血小板抗體檢測對于安全輸血及提高輸血療效都具有重要意義。本文通過分析統計937 例患者標本血小板抗體檢測結果，并分析抗體產生的影響因素及對輸注效果的影響，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2019 年6 月至2021 年4 月期間，從在昆明醫科大學第一附屬醫院申請備血或者輸血的住院患者中，隨機收集937 例患者的配血標本進行血小板抗體檢測，其中男性473 例，女性464 例，平均年齡（49.55±8.27）歲，內科705 人，外科232 人。分析血小板抗體陽性率與輸血次數，性別，科室分布的相關性。937 例患者中，共有43例患者發生非溶血性發熱性輸血不良反應，對其中抗體檢測陽性的再進行抗體分類鑒定。血液內科輸注過血小板的患者中，抗體檢測陽性組與陰性組進行年齡、性別、病種以及骨髓增生情況，化療的次數、化療藥物使用、既往輸注血小板的次數的對比。從血液科血小板抗體陽性的53 例患者中，按順序抽奇數隨機抽取了24 例進行了血小板交叉配合后輸注，觀察配合輸注和隨機輸注的效果。503 例輸過血小板的病例分成輸注有效組和無效組對住院天數，血小板抗體陽性率等進行分析。用LIS 系統以及電子病歷系統對患者的一般臨床資料進行收集。

1.2 儀器與試劑

L4-8F 臺式低速離心機（湖南可成），孵育器（長春博訊）；血小板抗體檢測血小板交叉配血：血小板抗體檢測試劑盒（荷蘭Sanquin），PBS 溶液（上海博古生物），MAS PAT 指示紅細胞（荷蘭Sanquin），血小板抗體的鑒定：Lifecodes PAKPLIS試劑盒，二磷酸氯喹溶液。

1.3 標本處理

EDTA 抗凝全血實驗前按3000RCF 離心15min 獲得血漿樣本。若不能馬上進行檢測，血漿與紅細胞分離，3 d 之內檢測血漿樣本應保存在 ＜-18℃，保存超過3 d 的血漿樣本應保存在-80℃，不能及時分析的保存樣本，實驗前需要重復離心。

1.4 檢測方法

血小板抗體的檢測以及交叉配型：固相凝集法，血小板抗體的鑒定：ELISA 法，嚴格按操作說明書操作。

1.5 統計學處理

用SPSS 25.0 統計軟件包進行統計學分析，以例數及百分比來表示計數資料，以均數加減標準差異來表示正態分布計量資料，正態分布計量資料組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，計數資料組間比較采用χ2檢驗，P＜ 0.05 表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 血小板抗體的產生和輸血次數的關系

研究中，937 例受檢樣本，血小板抗體陽性總例數為124 例，總陽性率為13.23%。

輸血成分包括血小板、血漿、懸浮紅細胞、冷沉淀，以輸血次數計算，按輸血0 次，輸血1～3 次，輸血4～6 次，輸血7～9 次，輸血 ＞ 9次分為5 組進行血小板抗體檢測，結果顯示輸血次數越多，越容易產生血小板抗體，見表1。

表1 血小板抗體的產生和輸血次數的關系[n（%）]Tab.1 The relationship between the production of platelet antibodies and the number of blood transfusions[n（%）]

2.2 男性和女性產生血小板抗體的差異

本研究中，血小板抗體檢測陽性率女性高于男性（15.95% VS.10.57%，P＜ 0.05），見表2。

表2 男性和女性產生血小板抗體的差異[n（%）]Tab.2 Differences in platelet antibody production between men and women [n（%）]

經χ2檢驗：男性和女性產生血小板抗體的差異有統計學意義（P＜ 0.05）。

2.3 內科患者和外科患者對血小板抗體陽性率的影響

血小板抗體檢測陽性率內科患者高于外科患者（16.31% VS.3.88%），差異有統計意義（P＜0.05），見表3。

表3 內科患者和外科患者對血小板抗體陽性率的影響[n（%）]Tab.3 The impact of medical patients and surgical patients on the positive rate of platelet antibodies[n（%）]

經χ2檢驗，內科患者和外科患者對血小板抗體陽性的影響，差異有統計意義（P＜ 0.05）。

2.4 內科患者標本的來源及不同科室血小板抗體檢出情況

內科患者血小板抗體檢測陽性率排前3 的科室分別是血液科、急診科、ICU（19.07% VS.18.42% VS.16.95%），見表4。

表4 內科患者標本的來源及不同科室血小板抗體檢出情況[n（%）]Tab.4 Sources of specimens from medical patients and detection of platelet antibodies in different departments [n（%）]

2.5 外科患者標本的來源及不同科室血小板抗體檢出情況

本研究中，外科患者標本的來源分布和血小板抗體檢出情況排前3 的科室分別是移植科、骨科、血管外科（14.29% VS.10.00% VS.9.09%），見表5。

表5 外科患者標本的來源及不同科室血小板抗體檢出情況[n（%）]Tab.5 Sources of surgical patient specimens and detection of platelet antibodies in different departments[n（%）]

2.6 血小板抗體檢測在血液內科患者中的應用價值分析

血液內科患者中輸注過血小板的有357 例，血小板抗體檢測陽性組53 例，檢測陰性組304 例。2 組間年齡、性別、病種以及骨髓增生情況差異無統計學意義（P＞ 0.05）。而化療的次數、聯合使用2 類以上化療藥物、既往輸注血小板的次數與血小板抗體的檢出率顯著相關（P＜ 0.05）。化療6次以上、聯合使用2 類以上化療藥物以及既往輸血次數越多，越容易產生血小板抗體，見表6。

表6 血液內科患者特征表及血小板抗體檢測情況[n（%）]Tab.6 Characteristics of patients in the department of hematology and the detection of platelet antibodies [n（%）]

在血小板抗體陽性的53 例患者中，按順序抽奇數隨機抽取了24 例進行了血小板交叉配合后輸注血小板，其余的29 例仍然僅行ABO、Rh 同型輸注。結果顯示，29 例抗體陽性患者未進行交叉配合僅有3 例輸注有效（10.34%），24 例抗體陽性患者配合后輸注有9 例（37.50%）輸注有效（P＜0.05）。說明配合性輸注血小板，能有效地減少血小板的輸注無效，見表6。

2.7 血小板抗體檢測用于評價血小板輸注效果的應用價值分析

503 例輸過血小板的病例，162 例患者輸注血小板有效，341 例患者輸注血小板無效。在本研究中，血小板抗體檢出率輸注有效組（5.56%）遠低于輸注無效組29.91%，（P＜ 0.05）。2 組間性別、年齡的差異在統計學上無意義（P＞ 0.05），但輸注無效組平均住院日更長，這說明血小板輸注無效的患者可能預后更差。血小板輸注有效組曾輸血小板的平均次數為（2±4）次，輸注無效組的曾輸血小板平均次數為（8±9）次，（P＜ 0.05），這說明血小板輸注次數越多，越容易產生血小板抗體，后續治療中血小板輸注無效的可能性更大，見表7。

表7 血小板輸注有效組和無效組的抗體檢出情況及特征值比較（）/n（%）Tab.7 Comparison of antibody detection and characteristic values between the platelet transfusion effective group and the ineffective group（）/n（%）

表7 血小板輸注有效組和無效組的抗體檢出情況及特征值比較（）/n（%）Tab.7 Comparison of antibody detection and characteristic values between the platelet transfusion effective group and the ineffective group（）/n（%）

*P ＜ 0.05。

2.8 血小板抗體檢測在非溶血性發熱性輸血反應調查中的應用

在937 例患者中，共有43 例患者發生非溶血性發熱性輸血不良反應，對其中抗體檢測陽性的再進行抗體分類鑒定。FNHTR 患者中血小板抗體檢測陽性率高達65.12%，FNHTR 患者HLA 抗體檢出率高達67.86%（19/28）。顯示FNHTR 主要由HLA 抗體引起，見表8。

表8 FNHTR 患者血小板抗體檢測情況[n（%）]Tab.8 Platelet antibody detection status of FNHTR patients [n（%）]

3 討論

本研究中，共檢測樣本937 例，血小板抗體陽性124 例，總陽性率13.23%。較劉科益等[3]所報道的結果高，分析原因可能與不同醫院科室結構不同以及病種分布不同等因素相關。

研究顯示，抗體檢出率隨輸血次數的增多而升高。這與先前的報道[4-7]結果相符。分析原因為：血小板的表面不僅表達血小板同種抗原（human platelet alloantigens，HPA），而且含有人類白細胞抗原（human leucocyte antigen，HLA）。HLA 抗原除了在血小板上表達外，在白細胞上表達更豐富。如果供者和受者HLA 或HPA 抗原有差異，輸血后，供者的HLA 或HPA 抗原均可刺激受者機體產生相應抗體[8]。本研究中輸血0 次的194 例病人中，血小板抗體檢測陽性2 例，2例抗體檢測陽性病人均為血液科病人，男性，MDS 患者。這2 例MDS 患者在前期研究的住院期間沒有輸血，但可能既往在外院有輸血史，已經產生了同種免疫，導致此次血小板抗體檢測陽性。有文獻報道[9]: 血小板相關抗體包括3 種成分：真正的血小板抗體，循環中的免疫復合物，非特異性吸附在血小板表面的免疫球蛋白，這2 例患者血小板抗體陽性，可能是免疫復合物及免疫球蛋白的非特異性吸附造成結果假陽性。此外據王涓冬等[10]研究，部分MDS 患者抗血小板膜糖蛋白自身抗體陽性，而抗血小板膜糖蛋白自身抗體的陽性會不會引起血小板同種抗體檢測出現陽性，有待進一步研究。

血小板抗體檢測陽性率女性高于男性，這與陸樂等[2]、袁慧銘等[4]的報道結果一致。分析原因是與女性妊娠有關，這與謝仁偉等[11]報道的結論相符。原因是由于胎兒和母體血小板抗原不同引起。即胎兒血小板的表面有來自父親的抗原，這些抗原通過胎盤進入母親體內，產生免疫刺激，從而在母體體內產生相應的血小板抗體[12]。所以對于女性，即使沒有輸血史，因為有妊娠史，也會增加血小板抗體產生的概率。

研究中，血小板抗體檢測陽性率內科高于外科，是因為內科患者相對于外科患者需要反復多次輸血，輸血次數越多，越容易產生血小板抗體[13]。不同科室間，血小板抗體的陽性率差異較大。血液科，急診科，ICU 3 個科室的患者血小板抗體陽性率位居前3，且明顯高于其他科室。這與臨床科室疾病構成有關。經統計，血液科以急性白血病和MDS 患者居多，貧血、出血、感染是血液科疾病主要的臨床癥狀，而急診科和ICU患者都有病種復雜多樣，病情危重的特點。基于這些科室疾病的特殊性和復雜性，反復多次輸血進行支持治療已經成為這些臨床科室必不可少的治療手段。輸注的血小板或其他血液制品因含有同種異體的HPA 或HLA 抗原，可刺激機體產生HPA 或HLA 抗體。

357 例輸注過血小板的血液內科患者，304 例血小板抗體檢測陰性，53 例血小板抗體檢測陽性。2 組間年齡的差異無統計學意義，但血小板抗體檢測陰性組平均年齡略大于陽性組，分析原因為年齡大的患者機體免疫力下降，其免疫系統對外來抗原的刺激不敏感，不能有效地引起免疫應答。化療次數增多和聯合使用化療藥物2 類以上造成血小板抗體的陽性率更高，可能是由于化療藥物使用過多，使骨髓和巨核系細胞受到抑制，從而使血小板減少，臨床上通常會進行治療和預防性的血小板輸注有關，輸血時同種異體的血小板抗原進入機體，刺激機體發生免疫反應，產生相應的抗體，因此血小板抗體就有更高的檢出率。在本次研究中，既往輸注過越多的血小板，其抗體的檢出率就越高。這與李志靜[14]對多次輸注血小板的血液病患者的輸血療效研究結果一致。血小板抗體的存在使輸入的含有相應抗原的血小板被破壞，從而發生血小板輸注無效（platelet transfusion refractoriness，PTR）。相對于隨機輸注，配合后輸注能降低血小板的輸注無效，提示血小板抗體篩查和配合性輸注能使血小板輸注更有效。

血小板抗體在輸注無效組中檢出率更高，表明血小板輸注的效果與血小板抗體有關，與其他報道類似[15-16]。原因是因為多次輸血，機體受血小板同種異體抗原的刺激產生相應抗體，其Fab片段激活補體系統等，破壞血小板；此外，若患者再次進行血小板輸注，輸入的血小板能與體內相應的血小板抗體反應，進而被破壞。提示既往輸血次數越多，越容易發生血小板輸注無效。上述研究肯定了血小板抗體檢測在輸注血小板患者的輸血療效評估及輸注無效時的輔助診斷等方面的運用價值。

研究中43 例FNHTR 患者血小板抗體檢測陽性率高達65.1%，抗體類型主要為 HLA 抗體，檢出率高達67.8%（19/28）。顯示FNHTR 主要由HLA 抗體引起。HLA 抗原比較敏感，所以更容易發生免疫反應。在臨床通常選擇輸注去白懸浮紅細胞來減少輸血過程中的白細胞輸入，但是對于血漿制品和血小板在常規操作下就很難做到去白細胞處理。因此，血小板抗體檢測可運用于輸血不良反應的調查。血小板抗體導致的非溶血性發熱性輸血反應可通過檢測血小板抗體進行診斷。

總之，血小板輸注次數，女性妊娠史，化療患者化療次數、化療藥物使用情況都是血小板抗體產生的影響因素。血小板抗體的陽性率與輸血次數呈正相關。血小板抗體檢測在血小板輸注無效的調查研究，血液系統疾病及化療患者輸血療效評估、輸血策略制定、非溶血性發熱性輸血不良反應的診斷方面都具有良好的運用價值。

臨床醫務工作者應該加強輸血相關知識的培訓和學習，充分認識到輸血的重要性和風險性，嚴格把握輸血適應癥，選擇正確的血液成分和劑量，做到合理精準輸血，盡量減少輸血次數，從而降低血小板抗體陽性率。另外，應重視對患者血小板抗體的檢測，應將血小板抗體檢測納入血小板輸注前的常規篩查項目，特別對于有輸血史的患者，在輸血前，應進行血小板抗體檢測，對于抗體檢測陽性者，應配合性輸注血小板，輸注紅細胞成分應去白，從而降低PTR 的發生。確保臨床血液輸注更安全、更有效。