PAI-1、VEGF 及其受體flk-1 與IgAN 患者腎小管間質(zhì)損害程度相關(guān)性分析

張儷緣

（南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院高新醫(yī)院檢驗科，江西 南昌330000 ）

IgA 腎病（IgAN）是最為常見的一種原發(fā)性腎小球疾病，以腎小球系膜區(qū)以IgA 或IgA 沉積為特點[1]。腎小管間質(zhì)損害（Tubulointerstitial lesions，TIL）為間質(zhì)性腎炎，研究表明，TIL 程度已成為決定腎臟疾病的預(yù)后的重要指標(biāo)[2]。早期判斷TIL 程度尤為重要，可以避免不必要的或過度的治療。近年來國內(nèi)分子診斷技術(shù)飛速發(fā)展，纖溶酶原激活物抑制物-1（Plasminogen activator Inhibitor-1，PAI-1）是組織型纖溶酶原激活物和尿激酶型纖溶酶原激活物的主要抑制劑，可抑制組織和血漿纖維蛋白溶解[3]。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（Vascular endothelium growth factor，VEGF）是一種對血管生長有強誘導(dǎo)作用并且能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增生、遷移的生長因子[4]。本研究就PAI-1、VEGF 及其受體VEGF-R2（flk-1）與IgAN 患者TIL 程度相關(guān)性進(jìn)行分析，旨在為臨床診治提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年8 月至2021 年9 月我院收治的IgAN 患者86 例，作為IgAN 組。其中男48 例，女38 例，年齡為38～64 歲，平均年齡（51.28±5.67）歲；根據(jù)Katafuchi 半定量積分[5]評估TIL 損傷程度，輕度損傷者31 例，中度損傷者25例，重度損傷者30 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：滿足IgAN 診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；入組前未接受規(guī)范性治療；臨床資料完整無缺失。排除標(biāo)準(zhǔn)：伴有缺血性腎損傷；合并急性或慢性感染者；合并糖尿病、冠心病或（和）惡性腫瘤疾病者；繼發(fā)性IgAN 者。

同時以同期于我院疑似腎臟惡性腫瘤而進(jìn)行病理活檢且結(jié)果正常的85 例對象作為對照組，男46 例，女39 例，年齡為36～63 歲，平均年齡（52.87±5.43）歲。IgAN 組與健康對照組性別、年齡比較無差異，具有可比性（P＞0.05）。

1.2 方法 采用免疫組化染色法檢測兩組VEGF及其受體flk-1 的表達(dá)情況。詳細(xì)步驟為：取腎活檢組織制成的石蠟，按2 μm 切片、脫蠟。蒸餾水沖洗，PBS 浸泡5 分鐘。5%～10%正常山羊血清封閉，孵育。傾去血清后滴加稀釋的兔抗人VEGF 多抗（購自北京義翹神州科技股份有限公司）、鼠抗人flk-1 單抗（購自杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司），37 ℃孵育1 h 或4 ℃過夜。PBS 沖洗，加稀釋的生物素標(biāo)記二抗，37 ℃孵育30 mim；或滴加第二代生物素標(biāo)記二抗工作液，37℃或室溫孵育30分鐘。PBS 沖洗，滴加適當(dāng)比例稀釋的辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，37 ℃孵育30 min。PBS 沖洗，顯色劑顯色，沖洗、復(fù)染、封片。于400 倍視野下每例隨機選取10 個腎小球，分別計算VEGF、flk-1 陽性面積占腎小球面積的百分比，取其均值為最終表達(dá)量。

PAI-1：抽取所有研究對象肘靜脈血5 mL，離心提取血漿，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）測定，人ELISA PAI-1 試劑盒購自北京義翹神州科技股份有限公司(Sino Biological Inc.)，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)均采用SPSS 18.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計量資料采用（）描述，兩組間比較行t 檢驗，多組間比較行F 檢驗；相關(guān)性采用Pearson 相關(guān)性分析；P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的對比IgAN 患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)均高于對照組，比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同組別PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的對比

2.2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)的比較 在IgAN 患者中，以重度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最高，輕度TIL 損傷組PAI-1、VEGF 及flk-1 最低，各組間PAI-1、VEGF 及flk-1表達(dá)比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同TIL 損傷患者PAI-1、VEGF 及flk-1 表達(dá)對比

2.3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析 PAI-1、VEGF 及flk-1 均與腎小管間質(zhì)損害程度呈正相關(guān)性（P＜0.05），見表3、圖1-3。

圖1 PAI-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點圖

圖2 VEGF 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點圖

圖3 flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析散點圖

表3 PAI-1、VEGF 及flk-1 與腎小管間質(zhì)損害程度的相關(guān)性分析

3 討論

IgAN 常伴無癥狀性血尿及不同程度蛋白尿，隨著病情的發(fā)展最終可誘發(fā)終末期腎病（Endstage renal disease，ESRD）[7]。腎小管間質(zhì)病變程度與IgAN 患者腎功能密切相關(guān)，是影響預(yù)后的病理組織學(xué)改變的因素之一。因此，準(zhǔn)確判斷腎小管間質(zhì)損傷程度有利于了解臨床診治療效及預(yù)測疾病發(fā)展。

PAI-1 即內(nèi)皮細(xì)胞型纖溶酶原激活物抑制因子，屬于絲氨酸蛋白酶抑制物。腎小管間質(zhì)損害與細(xì)胞外基質(zhì)降解受到抑制有關(guān)，而在這一過程中，PAI-1 則其重要作用[8]。馬燕等[9]研究發(fā)現(xiàn)，血清PAI-1 水平在原發(fā)性IgA 腎病患者中隨病情程度加劇持續(xù)增高，血清PAI-1 水平有利于評估原發(fā)性IgA 腎病病情程度。本研究結(jié)果顯示，IgAN 患者PAI-1 表達(dá)高于對照組，隨著腎小管間質(zhì)損害程度的加重，PAI-1 水平明顯升高。其原因是PAI-1 在高水平狀態(tài)下不僅可導(dǎo)致腎內(nèi)腎小球血管硬化，同時還可促進(jìn)腎小管間質(zhì)纖維化，加速病變發(fā)展[10]。

VEGF 是一種選擇性的內(nèi)皮有絲分裂原，其受體則屬于絡(luò)氨酸激酶c-fms 中的一種。本研究結(jié)果顯示，VEGF 及flk-1 均與腎小管間質(zhì)損害程度呈正相關(guān)性，表明VEGF 及其受體參與IgAN 患者腎小管間質(zhì)損害的進(jìn)展。進(jìn)一步分析其原因，VEGF對腎小球功能的影響基于刺激新生血管生成、刺激內(nèi)皮細(xì)胞增殖與轉(zhuǎn)移以及免疫抑制作用等生物學(xué)功能[11]。此外，安麗麗等[12]研究指出，VEGF 與受體flk-1 結(jié)合后可促使下游炎性介質(zhì)聚集，誘發(fā)炎性反應(yīng)綜合征；而炎癥反應(yīng)的爆發(fā)繼而可破壞腎小管上皮細(xì)胞完整性，刺激系膜細(xì)胞增生，改變細(xì)胞外基質(zhì)。基于上述研究，我們認(rèn)為PAI-1、VEGF及其受體flk-1 在IgAN 腎損傷發(fā)生發(fā)展中扮演重要角色，臨床可單獨或聯(lián)合檢測三者水平變化，及時評估臨床診治的進(jìn)展。

綜上所述，PAI-1、VEGF 及其受體flk-1 與IgAN 患者腎小管間質(zhì)損害程度顯著相關(guān)，監(jiān)測各指標(biāo)水平有利于判斷腎小管病理損害程度。