河南省第七輪結核病分子診斷技術能力驗證結果分析

蘇茹月，常文靜，王少華，朱巖昆，鄭丹薇，孫國清

（河南省疾病預防控制中心,河南 鄭州 450016）

《2020 年世界衛生組織結核病報告》[1]顯示2019年新發結核病患者996 萬，140 萬人死于結核病，結核病依然是嚴危害人民群眾健康的全球頭號傳染病殺手之一。為進一步提高肺結核病原學陽性率，發現更多的結核病患者，除了提升傳統的實驗室結核病檢測技術，還需要不斷研發新的肺結核診斷技術和檢測方法。近年來我省及省外專家評估和應用了多種結核病和耐藥結核病的分子檢測方法[2-7]，為規范各種新型結核病檢測技術，國家結核病參比實驗室組織開展第七輪全國分子診斷技術能力驗證，河南省疾控中心結核病參比實驗室根據要求組織省內各級結核病實驗室開展分子診斷技術能力驗證。現將全省第七輪結核病分子診斷技術能力驗證進行分析，有助了解河南省結核病分子診斷能力情況。

1 材料和方法

1.1 受試實驗室范圍 河南省各級疾控機構、結核病專科醫院、定點醫療機構和其他開展分子檢測機構共130 家單位參與本次能力驗證測試工作。

1.2 測試項目 主要包括基因芯片、熔解曲線技術、半巢式實時熒光定量核酸擴增（GeneXpert）和實時熒光核酸恒溫擴增、交叉引物法、實時熒光定量PCR 等方法。

1.3 測試樣品 每套測試樣品含10 份人工痰樣本（經過滅活處理），每個實驗室根據實際情況使用一套或多套測試樣品。測試樣品由國家結核病參比實驗室下發到河南省疾控中心結核病參比實驗室，再由河南省結核病參比實驗室下發到各市縣開展分子生物學檢測技術的實驗室。

1.4 統計分析 各測試單位將測試結果錄入EXCLE 數據庫，并將錄入數據和原始記錄報送到河南省結核病參比實驗室，省參比實驗室將數據匯總，核對后進行分析。

2 結果

2.1 參加單位級別和類型 根據參加單位級別分為省級單位4 家，市級單位21 家，縣級結核病實驗室105 家；根據參加單位類型分為疾控中心98家，獨立結防所13 家，專科醫院7 家，定點醫院11 家，綜合醫院1 家。

2.2 技術使用情況 共使用GeneXpert、熔解曲線、實時恒溫熒光擴增、交叉引物法、實時熒光定量PCR、基因芯片6 種方法。開展1 種檢測技術的為125 家單位，其中105 家為縣級單位；二種檢測技術的為4 家市級單位；三種檢測技術的為1 家省級單位。

2.3 河南省第七輪分子能力驗證整體合格率情況全省共130 家單位參加第七輪分子檢測能力驗證，完成1 360 份質控品測試，并上報測試結果，能力驗證合格率為92%（119/130），見表1。

表1 河南省第七輪分子診斷統計分析

2.4 省級和市級檢測情況 4 家省級單位，共檢測60 份樣品；21 家市級單位共檢測230 份樣品。所有檢測項目均通過測試，樣品檢測錯誤率為0，見表2。

表2 河南省第七輪分子診斷市級檢測情況分析

2.5 縣級檢測情況 縣級105 家實驗室進行了能力驗證工作，見表3。

表3 河南省第七輪分子診斷縣級檢測情況分析

2.6 失控原因分析 11 個未通過測試的全為縣級單位實驗室，失控項目主要集中在恒溫熒光擴增方法，見表4。

表4 河南省第七輪分子診斷失控分析

3 討論

結核病分子診斷技術檢測在提高病原學陽性率，發現更多的結核病患者上具有很明顯的優勢。河南省第七輪分子診斷能力驗證市級單位實驗室全部通過測試，其中市級使用GeneXpert 和熔解曲線方法最多。GeneXpert 是集核酸提取、擴增、檢測一體化的同時并能檢測MTB 基因及利福平常見耐藥決定區域，檢測過程生物安全性較高，不易污染、操作簡單、檢測時長只需2 h，可用于除血液以外的各種臨床標本的檢測[8-9]。熔解曲線法可以對利福平、異煙肼、鏈霉素、乙胺丁醇和氟喹諾酮常見耐藥決定區域的檢測，并輔助診斷MDR-TB 和XDR-TB[10-11]。交叉引物法和實時熒光定量PCR 法僅能用于診斷結核病，不能用于耐藥結核病的診斷。通過本輪數據分析對我省結核病分子診斷技術質量控制工作具有重要指導和改進意義，有效促進我省結核病防治工作開展[13]。

本次能力驗證縣級使用恒溫熒光擴增和GeneXpert 最多，其次是交叉引物法，實時恒溫熒光擴增錯誤率較GeneXpert 高。雖然WHO 推薦使用GeneXpert，但由于GeneXpert 儀器昂貴、試劑成本和維護費用較高在基層的使用受限，而恒溫熒光擴增也是一種結核分枝桿菌快速分子診斷技術方法，并且有研究表明恒溫熒光法的檢測敏感度顯著高于痰涂片和羅氏培養法[12]，檢測結果與羅氏培養法具有中等程度的一致性，因此恒溫熒光擴增法陽性率高、操作簡單、耗時短、準確性好，適用于在基層實驗室推廣使用，對早期結核病的發現具有診斷價值，但是此方法不能用于耐藥結核病的診斷。

截止2020 年底，據河南省結核病參比實驗室數據統計核查，全省具備分子檢測診斷能力的地市級達到100%，縣級達到88%。但從本次分子診斷技術能力驗證來看，仍有一些問題亟須解決，如對于縣級儀器設備相對單一，分子檢測項目開展相對較少，對非結核分枝桿菌以及耐藥結核病的診斷比較困難以及縣級單位實驗室分子質控存在不合格現象，因此縣級單位實驗室需進一步加強自身能力和硬件建設，同時市級也要加大對縣級技術指導頻次，全省加強對各級結核病實驗室分子診斷能力的培訓和質量控制，以提高結核病病原學診斷的陽性率和正確診斷率。2021 年是“十四五”開局之年，為終結結核病的流行，分子檢測需要不斷的更新觀念和方法[14]，采取更加符合各地實際情況，更加適宜的技術進行實驗室診斷。