北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油體外抗氧化比較研究

陳城劍　于妮娜　耜華兵　楊湘浙　寧錫隆

北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油體外抗氧化比較研究

陳城劍于妮娜耜華兵楊湘浙寧錫隆

（吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院吉林吉林132109）

試驗(yàn)運(yùn)用古法炮制，通過(guò)炒黃、炒焦、蒸制、土炒、麩炒五種不同炮制方法對(duì)北蒼術(shù)進(jìn)行處理，利用DPPH法、鄰苯三酚法、水楊酸法對(duì)北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物的抗氧化能力進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果表明：北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物均具有一定的抗氧化能力，并隨著濃度不斷增大呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。其中，生品的抗氧化性要強(qiáng)于其他炮制品。由此可見，北蒼術(shù)揮發(fā)油提取物可以作為中藥抗氧化劑應(yīng)用于化妝品、食品等領(lǐng)域。

北蒼術(shù)；炮制品；揮發(fā)油；抗氧化

北蒼術(shù)［(DC.)Koidz］是一種菊科蒼術(shù)屬多年生草本植物，別名山刺草、槍頭菜，通常以干燥根莖入藥。北蒼術(shù)屬于化濕類藥物，其藥性辛、苦、溫，臨床研究發(fā)現(xiàn)該藥物具有燥濕健脾、祛風(fēng)除濕、發(fā)表、明目等一系列功效。作為常用藥之一的北蒼術(shù)，最早被記載于東漢時(shí)期的《神農(nóng)本草經(jīng)》中，該藥被列為上品?！侗静輦湟贰睹t(yī)別錄》《醫(yī)方集解》《普濟(jì)方》《炮炙大法》等著作中均有相關(guān)記載。北蒼術(shù)野生資源較多，主要產(chǎn)地有河北、吉林、內(nèi)蒙古等地。北蒼術(shù)揮發(fā)油主要含有蒼術(shù)多糖、β-桉葉醇、蒼術(shù)酮、倍半萜類物質(zhì)等化學(xué)成分[1]。近年來(lái)，藥理研究表明北蒼術(shù)揮發(fā)油有降血壓、利尿、抗菌、解痙、鎮(zhèn)痛、抗病毒等諸多優(yōu)點(diǎn)。北蒼術(shù)主要炮制手段有土炒蒼術(shù)、米泔水制蒼術(shù)、清炒蒼術(shù)、焦炒蒼術(shù)、炭炒蒼術(shù)、麩炒蒼術(shù)、鹽蒼術(shù)、醋蒼術(shù)、蒸制蒼術(shù)等多種方法。2020年版《中華人民共和國(guó)藥典》中主要收錄麩炒蒼術(shù)[2]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)蒼術(shù)麩炒制品研究較多，而其他炮制方法研究甚少，本試驗(yàn)選取五種炮制方法對(duì)北蒼術(shù)進(jìn)行炮制，并進(jìn)一步探索其揮發(fā)油在炮制前后抗氧化作用的變化，為開發(fā)北蒼術(shù)的相關(guān)產(chǎn)品提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

試驗(yàn)所用北蒼術(shù)采自吉林市左家鎮(zhèn)吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院藥植園；試劑包括1,1-二苯基-2-三硝基苯肼、無(wú)水乙醇、三羥甲基氨基甲烷、濃鹽酸、乙二胺四乙酸二鈉、鄰苯三酚、水楊酸、過(guò)氧化氫、硫酸亞鐵，均為符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的分析純?cè)噭?/p>

試驗(yàn)儀器包括新型密閉式粉碎機(jī)（西安寶正實(shí)業(yè)有限公司）、電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）、DZTW調(diào)溫電熱套（北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司）、超聲波清洗機(jī)（寧波新藝超聲設(shè)備有限公司）、紫外分光光度計(jì)（上海奧譜勒儀器有限公司）、二號(hào)篩（紹興市上虞華豐五金儀器有限公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 不同北蒼術(shù)炮制品的制備

稱取北蒼術(shù)樣品100 g，去除雜質(zhì)，清洗干凈，浸潤(rùn)透徹，切等厚片，干燥后得北蒼術(shù)片備用。

麩炒蒼術(shù)：按麩炒法規(guī)定進(jìn)行炮制。熱鍋中加入適量麥麩，麥麩起煙時(shí)投入北蒼術(shù)片，表面炒至深黃色，具有焦香氣味時(shí)取出，過(guò)篩，放涼備用。

焦蒼術(shù)：稱取適量北蒼術(shù)片放入炒鍋中，中火加熱炒至表面焦褐色，噴淋少許清水再文火炒干，過(guò)篩，放涼備用。

土炒蒼術(shù)：炒鍋中放置適量土粉，中火加熱投入北蒼術(shù)片，炒至表面呈黃褐色，取出過(guò)篩，晾涼備用。

炒黃蒼術(shù)：稱取適量北蒼術(shù)片放入炒鍋中，小火加熱炒至表面黃褐色，取出過(guò)篩，晾涼備用。

蒸制蒼術(shù)：取適量北蒼術(shù)片置于蒸制容器中蒸制20 min，取出晾涼備用[3-4]。

1.2.2 不同北蒼術(shù)炮制品揮發(fā)油的提取

精確稱量40 g經(jīng)過(guò)炮制的北蒼術(shù)樣品，置于500 mL圓底燒瓶中，加入300 mL蒸餾水后加入沸石振蕩搖勻。連接揮發(fā)油提取器，圓底燒瓶置于恒溫加熱套中加熱至微沸狀態(tài)，持續(xù)提取5 h至揮發(fā)油體積不變，進(jìn)行準(zhǔn)確讀數(shù)，之后放入避光、密閉、低溫環(huán)境保存。試驗(yàn)以北蒼術(shù)生品為對(duì)照，按前述方法同樣提取揮發(fā)油并保存。

1.3 體外抗氧化能力測(cè)定

1.3.1 DPPH自由基清除能力檢測(cè)

采用DPPH法測(cè)定不同北蒼術(shù)炮制品揮發(fā)油提取物清除DPPH自由基的能力[5]。

用無(wú)水乙醇配制濃度分別為7 mg/mL、14 mg/mL、21 mg/mL、28 mg/mL、35 mg/mL的北蒼術(shù)揮發(fā)油樣品溶液。各取2 mL樣品溶液，加入0.05 mg/mLDPPH乙醇溶液1 mL，混合均勻，在室溫（25 ℃）下避光放置20 min，充分反應(yīng)。于517 nm處測(cè)定其吸光度值，以VC為陽(yáng)性對(duì)照，無(wú)水乙醇為空白對(duì)照。DPPH自由基清除率按照式（1）計(jì)算。

清除率=（0－）/0×100% （1）

式（1）中，0為無(wú)水乙醇的吸光度；為樣品溶液吸光度。

1.3.2 超氧陰離子自由基清除能力檢測(cè)

采用鄰苯三酚法測(cè)定不同北蒼術(shù)炮制品揮發(fā)油提取物清除超氧陰離子自由基的能力[6]。

鄰苯三酚溶液：量取1.95 mLTris-HCl緩沖液，加入0.05 mL鄰苯三酚溶液，于325 nm處測(cè)定吸光度，每隔30 s讀數(shù)一次，直到300 s為止。此時(shí)的△為△0。

樣品溶液：配制濃度為5 mg/mL、10 mg/mL、15 mg/mL、20 mg/mL、25 mg/mL的北蒼術(shù)揮發(fā)油樣品溶液。取1 mL樣品溶液，依次加入1.95 mLTris-HCl緩沖液、0.05 mL鄰苯三酚溶液，于325 nm處測(cè)定吸光度，每隔30 s讀數(shù)一次，直到300 s為止。以VC為陽(yáng)性對(duì)照組。此時(shí)的△為△樣。超氧陰離子自由基清除率按照式（2）計(jì)算。

清除率=（△0－△樣）/△0×100% （2）

式（2）中，△0=0,325nm,300s－0,325nm,30s，△樣=樣,325nm,300s－樣,325nm,30s。

1.3.3 羥基自由基清除能力檢測(cè)

采用水楊酸法測(cè)定不同北蒼術(shù)炮制品揮發(fā)油提取物清除羥基自由基的能力[6]。

取樣品溶液mL（=0.05、0.1、0.15、0.2、0.25），加入（0.4－）mL無(wú)水乙醇，再加入0.2 mL乙醇-水楊酸緩沖液、0.2 mLFeSO4溶液、0.2 mLH2O2溶液，迅速混合均勻，于510 nm處測(cè)量吸光度，以VC為陽(yáng)性對(duì)照，無(wú)水乙醇為空白對(duì)照。羥基自由基清除率按照式（1）計(jì)算。

2 北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物抗氧化能力測(cè)定結(jié)果分析

2.1 北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力

北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)DPPH自由基的清除作用測(cè)定結(jié)果如圖1所示。

圖1　DPPH法不同炮制品揮發(fā)油提取物清除率的比較

由圖1可知，在7 mg/mL～35 mg/mL范圍內(nèi)，北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物的濃度與清除率呈良好的量效關(guān)系，當(dāng)濃度達(dá)到35 mg/mL時(shí)，不同炮制品展現(xiàn)的DPPH自由基清除率也差異明顯，生品清除率為72%，與VC清除率83%較接近。不同炮制品清除DPPH自由基的能力為：VC＞生品＞麩炒＞炒黃＞蒸制＞土炒＞炒焦。

2.2 北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力

北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除作用測(cè)定結(jié)果如圖2所示。

圖2　鄰苯三酚法不同炮制品揮發(fā)油提取物清除率的比較

由圖2可知，北蒼術(shù)的不同炮制品對(duì)超氧陰離子自由基均具有一定的清除能力，且其清除率在一定的濃度范圍內(nèi)（5 mg/mL～25 mg/mL）呈良好的量效關(guān)系，隨著北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油樣品液濃度的依次遞增，所展現(xiàn)的超氧陰離子自由基清除率也均是出現(xiàn)上升趨勢(shì)。不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力大小為：VC＞生品＞麩炒＞蒸制＞炒黃＞炒焦＞土炒。

2.3 北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)羥基自由基清除能力

北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)羥基自由基清除作用測(cè)定結(jié)果如圖3所示。

圖3　水楊酸法不同炮制品揮發(fā)油提取物清除率比較

由圖3可知，北蒼術(shù)的不同炮制品對(duì)羥基自由基均具有一定的清除能力，且其清除率在一定的濃度范圍內(nèi)（5 mg/mL～25 mg/mL）呈良好的量效關(guān)系，隨著北蒼術(shù)不同炮制品揮發(fā)油樣品液濃度的依次遞增，所展現(xiàn)的羥基自由基清除率也均是呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。且生品對(duì)羥基自由基的清除能力，隨著濃度的不斷升高，要優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照品VC。不同炮制品揮發(fā)油提取物對(duì)羥基自由基清除能力大小為：生品＞VC＞麩炒＞蒸制＞炒黃＞土炒＞炒焦。

3 結(jié)論

本文通過(guò)三種方法將北蒼術(shù)不同炮制品和生品的揮發(fā)油提取物與VC對(duì)自由基的清除效果進(jìn)行比較。試驗(yàn)結(jié)果表明：北蒼術(shù)揮發(fā)油提取物清除自由基所體現(xiàn)的抗氧化能力隨著其濃度的增大而不斷增強(qiáng)。DPPH法中，各炮制品和生品的揮發(fā)油提取物對(duì)DPPH自由基的清除能力不如VC，同時(shí)，生品對(duì)DPPH自由基的清除能力要強(qiáng)于炮制品，炒焦最弱。鄰苯三酚法中，北蒼術(shù)不同炮制品和生品的揮發(fā)油提取物對(duì)超氧陰離子自由基清除能力不如VC，其中生品最強(qiáng)，土炒最弱。在水楊酸法中，生品對(duì)羥基自由基的消除作用要強(qiáng)于VC，炒焦最弱。同時(shí)可以發(fā)現(xiàn)，北蒼術(shù)不同炮制品與生品比較下，生品抗氧化能力最優(yōu)。北蒼術(shù)中主要含有揮發(fā)油成分，炮制后其所含揮發(fā)油中的蒼術(shù)素、蒼術(shù)素醇的含量均有所降低，對(duì)其功效具有一定的影響，這可能是生品的抗氧化性強(qiáng)于炮制品的原因之一。綜上所述，研究北蒼術(shù)的抗氧化作用宜優(yōu)先選用生品。

[1]李涵,金香環(huán),趙百慧,等.北蒼術(shù)的化學(xué)成分及藥理活性的研究進(jìn)展[J].吉林農(nóng)業(yè),2019(3):72-73.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2020年版一部[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2020.

[3]趙娟,王科,楊帆.不同炮制方法對(duì)蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量及蒼術(shù)特征圖譜的影響[J].中南藥學(xué),2021,19(4):719-723.

[4]樊志強(qiáng).不同炮制方法對(duì)蒼術(shù)中有效成分的影響[J].農(nóng)業(yè)科技與裝備,2021(2):59-60.

[5]范琳,王苗,馬馨桐,等.葛根抗氧化活性有效部位的篩選研究[J].食品研究與開發(fā),2021,42(6):119-123.

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10.3969/j.issn.2095-1205.2023.08.02

R284.1

A

2095-1205(2023)08-05-03

吉林省高等學(xué)校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目（SJ2022078）

陳城劍（2002—），男，漢族，浙江臺(tái)州人，本科在讀，研究方向?yàn)橹兴幏治觥?/p>

于妮娜（1984—），女，漢族，吉林長(zhǎng)春人，碩士研究生，講師，研究方向?yàn)橹兴幏治觥?/p>