基于“藥性變化論”的訶子煨后固腸止瀉炮制原理研究

劉婧,王巍,王一帆,王月南,鄭舒意,張強

(遼寧中醫藥大學藥學院,遼寧 大連 116600)

訶子為使君子科植物訶子(TerminaliachebulaRetz.)或絨毛訶子(T.chebulaRetz. var.tomentellaKur.)的干燥成熟果實。其性平味苦酸澀,歸肺、大腸經;具有澀腸止瀉、斂肺止咳和降火利咽的功效[1];臨床常用于治療久瀉久痢、便血脫肛、肺虛咳喘、久咳不止和咽痛音啞等[2]。當用于澀腸止瀉時常“煨熟”使用。明李中梓在《本草通玄》中首次將訶子的使用方法歸納為“生用則能清金行氣,煨熟則能溫胃固腸”[3]。目前,藥性研究已成為中藥領域的熱點。機體組織細胞內兩種環核苷酸(環磷酸腺苷cAMP與環磷酸鳥苷cGMP)被認為是祖國醫學陰陽學說的物質基礎,其在機體內通過相互拮抗作用維持著一定的平衡狀態,在調節人體生物功能方面發揮重要的作用,因此將中藥對內臟組織中環核苷酸水平的選擇性調節作用看作中藥歸經的物質基礎;升降沉浮常常表現出與病位相同的趨勢,而與病勢表現相反的趨勢,研究者常常以胃排空及小腸推進為指標評價升降沉浮的改變[4-7]。

基于以上分析,本研究將從炮制影響訶子的歸經和升降浮沉屬性入手,以cAMP和cGMP在肺與大腸組織的含量變化分析訶子炮制對歸經的影響;以胃排空和小腸推進率來考察炮制對訶子升降浮沉的影響。從藥性變化的角度來探討訶子煨后固腸止瀉作用增強的原理,為臨床合理用藥提供理論依據。

1 材料

1.1 試藥訶子[產地:云南,經遼寧中醫藥大學翟延君教授鑒定,為使君子科植物訶子(TerminaliachebulaRetz.)的干燥成熟果實];番瀉葉(天津智匯康杰醫藥科技有限公司,批號:170901,經遼寧中醫藥大學中藥鑒定教研室翟延君教授鑒定,為豆科植物狹葉番瀉(CassiaangustifoliaVahl)的干燥小葉;蒙脫石散(杭州康恩貝制藥有限公司,批號:03201102)。cAMP試劑盒(BPE20860)及cGMP試劑盒(BPE20448)均購自上海朗頓生物科技有限公司。

1.2 動物SPF級昆明小鼠,雄性[遼寧長生生物技術有限公司,動物許可證號為:SCXK(遼)2020-0001],體質量(20±2)g。全部動物實驗經遼寧中醫藥大學動物倫理委員會批準(許可證號:2020059),符合要求。

1.3 儀器Multiskan-MK3型酶標儀(美國賽默飛世爾科技有限公司);Z 300K型Fresco臺式高速冷凍離心機(德國Heraeus公司);FA1004B型分析天平(上海精密科學儀器有限公司)。

2 方法與結果

2.1 訶子炮制品的制備取凈訶子,投入預熱至260 ℃的干凈河砂中,不斷翻動,炒制約6 min,取出,篩去河砂,放涼備用[8]。

2.2 給藥液制備取訶子生品及炮制品適量,粉碎,過200目篩,加適量水制成濃度為0.065 g·mL-1的混懸液,備用;取番瀉葉適量,分別加5倍量、4倍量水回流提取兩次,每次1 h,合并濾液,濃縮至濃度1 g·mL-1,備用[9];取蒙脫石散適量,加適量水制成濃度為0.06 g·mL-1的混懸液,備用[10]。所有給藥液給藥前均搖勻。

2.3 動物分組、造模與給藥按隨機對照原則將小鼠分為5組,即空白組、模型組、蒙脫石散組、訶子生品組及炮制品組,每組10只。除空白組外,其余4組每天灌胃番瀉葉水提液0.4 mL/20 g,空白組灌胃同等劑量蒸餾水,連續造模8 d。每天造模12 h后,訶子生品組灌胃訶子生品混懸液0.4 mL/20 g,訶子制品組灌胃訶子炮制品混懸液0.4 mL/20 g,蒙脫石散組灌胃蒙脫石散混懸液0.4 mL/20 g,模型組和空白組灌胃同等劑量蒸餾水,連續給藥7 d。

2.4 指標測定

2.4.1 DAI評分每天觀察并記錄各組小鼠體重及腹瀉情況的變化,記錄并進行疾病活動指數(disease activity index,DAI)評分,評分標準見表1。DAI評分=體重變化情況×50%+腹瀉程度×50%[11]。

表1 DAI評分標準

2.4.2 胃排空率及小腸推進率的測定各組小鼠末次給藥后禁食不禁水12 h,進行末次造模給藥,再于4 h后灌胃半固體狀物(5%羧甲基纖維素鈉,5%碳粉),0.8 mL/只,15 min后處死,剝離肺、胃、大腸及小腸,生理鹽水沖洗干凈后,稱重,大腸和肺加10倍量生理鹽水勻漿,3 500 r·min-1離心15 min,取上清-20 ℃保存,備用。胃稱重后洗去殘留碳粉,稱量胃凈重,計算胃殘留率。小腸測量碳粉推進率。

2.4.3 肺腸組織中cAMP及cGMP表達水平的測定取肺和大腸組織勻漿上清,按cAMP、cGMP ELISA試劑盒說明操作,測定cAMP、cGMP表達水平,并計算cAMP/cGMP值。

2.6 結果

2.6.1 DAI評分結果各組小鼠實驗前體重無顯著性差異,均無腹瀉情況。造模后,除空白組外各組小鼠體重顯著下降,并出現毛色晦暗伴有炸毛、聚堆現象,腹瀉明顯。給藥后,各給藥組體重顯著升高,聚堆、炸毛及腹瀉現象好轉。對各組小鼠實驗最后一天的DAI評分見表2。

表2 各組小鼠DAI評分、胃殘留率及小腸推進率結果

2.6.2 胃殘留率及小腸推進率結果與空白組比較,模型組小鼠胃殘留率顯著下降(P<0.01),小腸推進率顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組均有改善,且訶子制品組優于訶子生品組,結果見表2。

2.6.3 cAMP及cGMP表達水平結果與空白組比較,模型組小鼠肺與大腸cAMP均顯著升高(P<0.01),cGMP則顯著下降(P<0.01),cAMP/cGMP值顯著升高(P<0.01);與模型組比較,各給藥組均有改善,同時,訶子生品組肺cAMP/cGMP值低于大腸,訶子制品組則相反,結果見表3～4。

表3 各組小鼠肺及大腸cAMP、cGMP含量

表4 各組小鼠肺及大腸cAMP/cGMP值

3 討論

3.1 炮制對藥性的影響炮制可以增強藥物作用,減輕毒性,還能改變成分、功效、藥性等屬性。藥性始于神農,炮制盛于雷斅。藥性者寒熱溫涼,苦酸甘辛咸,歸經,補瀉,有毒無毒是也。藥以治病,因性為能。寒不及則無以清熱,熱不足則無以祛寒。酸不足無以收斂固澀,苦不及無以燥濕清泄,辛不足無以發散行氣,甘不及無以補虛和中,咸不足無以軟堅散結[10]。不同炮制方法對中藥藥性有很大的影響,適宜的炮制可以使中藥的某一個或某些藥性占主導地位,從而發揮其特殊治療功效。在傳統炮制理論中有生升熟降,是說有些藥物生品使用其作用趨勢趨上,而制熟之后其作用趨勢趨下。訶子“生用清金行氣,煨熟溫胃固腸”就是生升熟降的表現。

3.2 炮制對訶子升降浮沉的影響升降浮沉是中藥特點之一,與人體機體內的不同趨向性有關。味辛甘,性溫熱的中藥主要具有升浮功效,味苦酸咸,性寒涼的中藥則主要具有沉降功效。但是在通過一定的炮制后,其升降功效也會出現變化[13]。本研究中訶子生品及炮制品對小鼠腹瀉情況均有改善,其中炮制品組DAI評分、小腸推進率及胃內殘留率優于生品組,說明訶子制熟之后,其止瀉作用增強,作用趨勢變為趨下,降氣澀腸。

3.3 炮制對訶子歸經的影響中藥在經過炮制后歸經會發生變化,藥效也會隨之改變。同時對于一種中藥而言,其歸經往往并不是單一的,而是會分為幾種,而經過炮制之后,能夠增強其中某一種歸經的效果,讓其對該部位疾病的療效更加確切[13]。根據本實驗cAMP/cGMP值的變化可以推斷出炮制影響了訶子的歸經偏性,原本訶子歸肺與大腸經,制熟之后偏于歸大腸經而止瀉。

4 結論

訶子煨后固腸止瀉作用增強,根據本實驗結果,其炮制原理從藥性變化角度看是訶子炮制后作用趨勢趨下,偏于歸大腸經。但具體機理還需從分子生物層面深入研究以解析訶子的炮制原理。