GC法測定托伐普坦起始物料中3種有機溶劑殘留

周旭，蘭公劍，廖娟

GC法測定托伐普坦起始物料中3種有機溶劑殘留

周旭，蘭公劍，廖娟

（南京正大天晴制藥有限公司，江蘇 南京 210046）

建立了以毛細管氣相色譜法測定托伐普坦起始物料中殘留溶劑的方法。采用Agilent DB-WAX（60 m×0.32 mm，0.5 μm）毛細管柱，載氣為氮氣，采用氫火焰離子化檢測器（FID）。結果表明：3種溶劑分離效果良好；在限度濃度10%～200%范圍內線性關系良好，≥0.999；回收率均值分別為105.3%、106.0%、105.2%，均小于10.0%（=9）。該方法準確可靠，可用于托伐普坦起始物料殘留溶劑的測定。

托伐普坦起始物料；毛細管氣相色譜法；質量控制；殘留溶劑

托伐普坦片，商品名為蘇麥卡，是由日本大冢制藥株式會社研發的血管升壓素V2受體拮抗劑藥物[1-2]。托伐普坦片在臨床上用于治療正常容量或高容量低鈉血癥，特別適用于心衰合并低鈉血癥水腫的患者[3-5]。由于其為全球首個血管加壓素受體拮抗劑藥物，且為口服，不良反應輕，應用前景廣闊[6-8]。

在托伐普坦合成過程中，苯并七元環的構建是一個難點[9-11]，參考人用藥品注冊技術國際協調會議（ICH）Q7與Q11的相關要求，選擇7-氯-1,2,3, 4-四氫苯并[b]氮雜卓-5-酮作為托伐普坦的起始物料之一。其合成過程使用了吡啶、,-二甲基甲酰胺（DMF）和醋酸，可能殘留至托伐普坦原料藥中。因此在起始物料中對上述殘留溶劑進行控制，有助于提高原料藥的質量和藥品安全。根據中國藥典通則要求，建立了該起始物料殘留溶劑的分析方法。

1 實驗部分

1.1 儀器

GC-2010型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID），LabSolution工作站，日本島津公司；Agilent 7890A型氣相色譜儀，氫火焰離子化檢測器（FID），Ezchrom工作站，美國安捷倫公司；梅特勒托利多XP205DR型十萬分之一電子天平；賽多利斯MSU225P型十萬分之一電子天平。

1.2 試藥

甲醇、DMF，色譜級，美國TEDIA試劑公司；吡啶，ACS級，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；醋酸，色譜級，美國ROE試劑公司；起始物料（某公司），批號：TF05K1707002、TF05K180401、TF05-180604t、TF05-1807002。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：以聚乙二醇為固定液（DB-WAX，60 m×0.32 mm，0.5 μm）的毛細管柱為色譜柱。

起始柱溫為40 ℃，維持4 min，以每分鐘20 ℃升溫至140 ℃，維持6 min，再以每分鐘20 ℃升溫至210 ℃，維持5 min。

進樣口溫度為200 ℃，檢測器溫度為250 ℃，進樣量為1 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品貯備液的制備

分別取吡啶、DMF、醋酸各適量，精密稱定，用甲醇定量稀釋制成每1 mL中約含吡啶0.1 mg、DMF 0.44 mg、醋酸2.5 mg的混合溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密量取對照品貯備液適量，用甲醇定量稀釋制成每1 mL中約含吡啶10 μg、DMF 44 μg、醋酸250 μg的混合溶液。

2.2.3 定位溶液的制備

分別取吡啶、DMF、醋酸各適量，用甲醇稀釋制成每1 mL中約含吡啶10 μg、DMF 44 μg、醋酸250 μg的溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備

取本品適量，精密稱定，加甲醇溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含25 mg的溶液。

2.2.5 加標供試品溶液的制備

取供試品約500 mg，精密稱定，置20 mL量瓶，加適量甲醇使溶解，精密量取并加入對照品貯備液1 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 專屬性

精密量取空白溶劑、定位溶液、對照品溶液、供試品溶液與加標供試品溶液各1 μL，分別進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，甲醇對檢測無干擾，供試品溶液中無未知雜質干擾檢測；吡啶、DMF與醋酸間分離度均符合要求，該方法專屬性良好。

2.4 線性與范圍

精密量取對照品貯備液適量，用甲醇稀釋制成相當于限度質量濃度20%～200%的線性系列溶液。精密量取各線性溶液1 μL，進樣分析，記錄色譜圖，以質量濃度為橫坐標，被測峰面積為縱坐標，對待測組分進行線性回歸處理。試驗結果見表1。結果表明，各溶劑峰面積與質量濃度之間成良好的線性關系。

表1 線性范圍及回歸方程

2.5 定量限與檢測限

分別取吡啶、DMF、醋酸各適量，精密稱定，用甲醇逐級稀釋至/＞10時，作為定量限溶液；稀釋至/＞3時，作為檢測限溶液。分別精密量取待測溶液各1 μL，進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，吡啶、DMF、醋酸定量限質量濃度分別為0.454、1.157、3.994 μg·mL-1；峰面積值（=6）分別為9.2%、8.3%、19.4%，均小于20.0%；保留時間值（=6）均為0.1%，均小于1.0%；/值均在10.5～21.1范圍內；檢測限質量濃度分別為0.136、0.347、1.198 μg·mL-1；/值均在3.4～5.1。該方法靈敏度良好。

2.6 準確度

對照品與供試品溶液：照“2.2溶液的制備”項下配制。

回收率溶液：分別稱取起始物料樣品約 500 mg，精密稱定，置20 mL量瓶，加適量甲醇溶解，分別精密量取并加入“2.2溶液的制備”項下對照品貯備液1、2、3 mL，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，各質量濃度平行配制3份。

分別精密量取上述待測溶液1 μL，進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，吡啶、DMF、醋酸回收率均值分別為105.3%、106.0%、105.2%；各溶劑回收率均在80.0%～120.0%范圍內；回收率值（=9）分別為2.1%、2.1%、3.6%，均小于10.0%。該方法準確度良好。

2.7 精密度

2.7.1 儀器精密度

取“2.4線性與范圍”項下L-100%溶液作為檢測溶液，按“2.1色譜條件”項下方法進行分析，記錄色譜圖。結果表明，吡啶、DMF、醋酸峰面積值（=6）分別為1.4%、1.4%、1.6%，均小于5.0%；保留時間值（=6）均為0.1%，均小于1.0%。儀器進樣精密度良好。

2.7.2 重復性

對照品與加標供試品溶液按照“2.2溶液的制備”項下配制。按“2.1色譜條件”項下方法進行分析，記錄色譜圖。結果表明，吡啶、DMF、醋酸殘留量均值分別為0.02%、0.091%、0.5%；值（=6）分別為1.0%、1.3%、1.2%，均小于10.0%。該方法重復性良好。

2.7.3 中間精密度

不同日期不同分析人員，重新配制6份加標供試品溶液，使用不同儀器進行重復性試驗。按“2.1色譜條件”項下方法進行分析，并記錄色譜圖。 12份樣品檢測結果表明，吡啶、DMF、醋酸殘留量均值分別為0.02%、0.093%、0.5%；值（=12）分別為7.2%、2.5%、2.9%，均小于15.0%。該方法中間精密度良好。

2.8 溶液穩定性

對照品與供試品溶液氨氮照“2.2溶液的配制”項下配制。室溫條件下，分別在放置0、2、4、8、12、16、24 h后測定，考察供試品溶液中各溶劑含量和對照品溶液中各溶劑峰面積的變化情況。按“2.1色譜條件”項下方法進行分析，記錄色譜圖。結果表明，對照品溶液：吡啶、DMF、醋酸峰面積與0 h比值范圍分別為96.0%～101.3%、95.3%～100.3%、93.9%～99.9%，均在90.0%～110.0%以內，說明對照品溶液在室溫條件下放置24 h內穩定；供試品溶液：不同時間點吡啶、DMF、醋酸均未檢出，說明供試品溶液在室溫條件下放置24 h內穩定。

2.9 耐用性

適當調整色譜條件（流速±0.3 mL·min-1、進樣口溫度±10 ℃、檢測器溫度±10 ℃、起始柱溫±5 ℃、分流比±2），取“2.2溶液的配制”項下配制的對照品與加標供試品溶液各1 μL，進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，對照品溶液中各溶劑之間的分離度均符合要求，加標供試品溶液中各溶劑的檢測結果無顯著差別。該方法耐用性良好。

2.10 樣品的測定

取不同批次供試品，照“2.2溶液的配制”項下配制對照品與供試品溶液，分別取1 μL，進樣分析，記錄色譜圖。結果表明，各批次吡啶、DMF、醋酸均未檢測，符合中國藥典2020年版四部通則中對殘留溶劑的限度要求。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

根據供試品與待測溶劑的理化性質，分別考察供試品在水、二甲基亞砜和甲醇中的溶解性。結果表明，供試品在二甲基亞砜和甲醇溶解性良好。分別以上述兩種溶劑配制樣品并檢測，發現二甲基亞砜中存在未知峰干擾DMF的檢測，故選用甲醇作為溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

由于醋酸在氣相色譜柱中通常峰形差、保留弱，因此對不同極性色譜柱進行篩選，分別考察DB-1、DB-624和DB-WAX等色譜柱。結果表明，醋酸在極性色譜柱（DB-WAX）中峰形較好，保留適宜，各溶劑均能完全分離，故選用DB-WAX色譜柱。

3.3 進樣方式的選擇

由于吡啶的限度濃度較低，為了保證檢測的靈敏度，分別考察直接進樣與頂空進樣。結果表明，兩種進樣方式的靈敏度均符合要求，樣品檢測結果一致，因直接進樣檢測效率更高，故選擇直接進樣。

4 結 論

本文建立的方法具有專屬性好、準確度高與耐用性好等優點，能夠快速準確的完成檢測要求，適用于托伐普坦起始物料的殘留溶劑檢測，為其提供了有效的質控方法。

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[11] 胡國宜，胡錦平，高永清，等.高純度托伐普坦的制備方法：CN107663171A[P]. 2018-02-06．

Determination of Residual Organic Solvents in Tolvaptan Starting Material by GC

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（Nanjing Chia-Tai Tianqing Pharmaceutical Company, Nanjing Jiangsu 210046, China）

A capillary GC method for the determination of residual organic solvents including pyridine,,- dimethylformamide (DMF) and acetic acid in tolvaptan starting material was established. The column was DB-WAX column(60m×0.32mm,0.5μm), using N2as carrier gas. FID was used as detector. The 3 residual organic solvents were completely separated, and the linear relationship was good (≥0.999). The average recoveries (=9) of these 3 solvents were 105.3%,106.0%,105.2%, respectively (≤10.0%,=9). This method has good precision and high accuracy, which can be used for the determination of the residual organic solvents in tolvaptan starting material.

Tolvaptan starting material; GC; Quality control; Residual organic solvents

O657.7

A

1004-0935（2023）09-1396-03

2022-08-30

周 旭（1991-），男，江蘇省南京市人，工程師，碩士，2017年畢業于中國藥科大學生藥學專業，研究方向：藥物分析。

蘭公劍（1981-），男，工程師，碩士，研究方向：藥物分析。