枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能和糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響

宗文麗，郭亮，鄧露芳，辛娜，王冬冬

（北京三元種業(yè)科技股份有限公司飼料分公司，北京 101105）

北極狐（Alopex lagopus）屬于食肉目（Carnivoraes）犬科（Canidae）動(dòng)物，產(chǎn)于亞歐北部、北美北部和南美洲南部，20 世紀(jì)50 年代從蘇聯(lián)引種至我國[1]。目前我國養(yǎng)殖區(qū)主要分布在黑龍江、內(nèi)蒙古、遼寧、吉林、山東及河北等地區(qū)。益生菌和植物提取物具有天然無毒副作用、無耐藥性、無殘留和無環(huán)境污染等特點(diǎn)[2,3]，一直是飼料領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。自2013 年國家批準(zhǔn)35 種益生菌，12 種植物提取物進(jìn)入飼料添加劑目錄，枯草芽孢桿菌和牛至提取物——牛至香酚也在其中?？莶菅挎邨U菌和牛至提取物可以抑制畜禽腸道中的大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌等常見的有害菌，增加乳酸菌數(shù)量[4-6]。Ma 等[7]研究表明枯草芽孢桿菌能顯著提高肉雞的平均體重、平均日采食量和平均日增重。黃其春等[8]研究發(fā)現(xiàn)日糧中添加500 mg/kg 牛至提取物可提高生長育肥豬生長性能，改善肉品質(zhì)和風(fēng)味。但目前，北極狐日糧中枯草芽孢桿菌和牛至提取物聯(lián)合使用，對(duì)其生產(chǎn)性能影響的研究少見報(bào)道。本試驗(yàn)在北極狐日糧中添加不同水平的枯草芽孢桿菌和牛至提取物組合，研究其對(duì)北極狐生長性能和糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響，以期獲得適宜的添加量，可為其在實(shí)踐生產(chǎn)中應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）≥2.0×1010CFU/g，為山東蔚藍(lán)生物科技有限公司生產(chǎn)；牛至提取物：牛至香酚≥10%，山東魯西獸藥股份有限公司生產(chǎn)；金霉素≥10%，為內(nèi)蒙古金河動(dòng)物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 基礎(chǔ)日糧

北極狐試驗(yàn)用基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分含量，見表1。

表1 北極狐試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)成分含量Table 1 Compsition and nutrient content of the basal diet for arctic fox

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在河北省秦皇島市撫寧區(qū)某狐貉養(yǎng)殖場進(jìn)行，試驗(yàn)采用雙因素3×3 隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選取60 日齡體重相近，精神狀態(tài)良好，健康的北極狐240 只，隨機(jī)分成10 個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只，公母比例1:1。試驗(yàn)從7 月5 日開始，預(yù)試期5 d，正試期25 d。試驗(yàn)組添加劑含量，見表2。

表2 試驗(yàn)組添加劑添加量Table 2 Amount of additives added in the test groups

1.4 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)管理按養(yǎng)殖場日常管理進(jìn)行，試驗(yàn)北極狐飼喂干粉狀配合飼料，飼喂前用4 倍水浸泡10 min，攪拌均勻后飼喂，每天飼喂3 次，自由飲水。每天清理糞便1 次，食盒每天清洗1 次，每周用0.08%高錳酸鉀溶液消毒2 次。

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 生長性能的測定－試驗(yàn)開始和結(jié)束，空腹稱重，記錄始末體重；按重復(fù)記錄采食量和腹瀉只數(shù)；記錄北極狐試驗(yàn)始末時(shí)間。計(jì)算平均日采食量、平均日增重、料重比和腹瀉率等。

1.5.2 糞便中細(xì)菌的測定－在試驗(yàn)結(jié)束前3d，每天早晨每個(gè)處理隨機(jī)取5 只北極狐新鮮糞便樣品，混合均勻，80℃保存。大腸桿菌用膽鹽硫乳瓊脂培養(yǎng)基在有氧條件下培養(yǎng)，乳酸桿菌用瓊脂培養(yǎng)基在厭氧條件下培養(yǎng)，結(jié)果以每克糞便中含有微生物數(shù)量的對(duì)數(shù)值［lg(CFU/g)］表示。

1.6 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 2013 進(jìn)行初步整理后，利用SPSS 26.0 軟件一般線性模型（GLM）進(jìn)行方差分析，Duncan氏法進(jìn)行多重比較。試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）”表示，P ＜0.05 表示差異顯著，P ＜0.01 表示差異極顯著，P ＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能的影響

試驗(yàn)中枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能影響的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，見表3。

表3 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能的影響Table 3 Effect of and extracts on the growth performance of arctic fox

表3 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能的影響Table 3 Effect of and extracts on the growth performance of arctic fox

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同小寫字母表示差異不顯著（P ＞0.05），不同小寫字母表示差異顯著（P ＜0.05），不同大寫字母表示差異極顯著（P ＜0.01），下表同。Note:The same lowercase letters in the same column data indicate there was no significant difference (P ＞0.05),different lowercase letters indicate there was significant difference(P ＜0.05),and different upercase letters indicate there was very significant difference(P ＜0.01).The following table is the same.

各試驗(yàn)組初始體重相近。對(duì)于末體重，枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著，牛至提取物影響差異顯著；試驗(yàn)組Ⅴ、Ⅶ分別比對(duì)照組高2.24%、1.55%（P ＜0.01），試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ與對(duì)照組比差異不顯著。對(duì)于平均日增重，牛至提取物影響差異顯著，枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅴ、Ⅶ分別比對(duì)照組高4.43%、3.53%（P ＜0.05）；試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅷ與對(duì)照組比差異不顯著。對(duì)于平均日采食量，枯草芽孢桿菌、牛至提取物及枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異不顯著，試驗(yàn)各組與對(duì)照組比差異不顯著。對(duì)于料重比，枯草芽孢桿菌影響差異不顯著，牛至提取物及枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅴ與對(duì)照組比差異顯著，試驗(yàn)組Ⅴ比對(duì)照組低4.01%；試驗(yàn)組Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ和Ⅶ與對(duì)照組差異不顯著。對(duì)于腹瀉率，枯草芽孢桿菌和牛至提取物影響差異不顯著，枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅲ、Ⅴ和Ⅶ分別比對(duì)照組低6.38%、6.49%和6.60%（P ＜0.01）。

2.2 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響

試驗(yàn)中枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐糞便中細(xì)菌數(shù)量影響的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，見表4。

表4 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響Table 4 Effect of and extracts on numbers of bacteria in the feces of arctic fox [lg]

表4 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響Table 4 Effect of and extracts on numbers of bacteria in the feces of arctic fox [lg]

對(duì)于糞便中細(xì)菌總數(shù)，枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異不顯著，牛至提取物影響差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ與對(duì)照組比差異不顯著。對(duì)于乳酸菌數(shù)量，枯草芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異不顯著，但枯草芽孢桿菌有先增后降的趨勢(shì)；試驗(yàn)組Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅷ與對(duì)照組比差異不顯著；試驗(yàn)組Ⅱ比對(duì)照組高7.35%，實(shí)驗(yàn)組Ⅵ比對(duì)照組低7.69%（P＜0.05）；試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅸ分別比對(duì)照組高8.63%、10.30%（P ＜0.01）。對(duì)于糞便中大腸桿菌數(shù)量，枯草芽孢桿菌、牛至提取物及枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著，試驗(yàn)組Ⅴ、Ⅵ與對(duì)照組比差異不顯著，其他試驗(yàn)組均高于對(duì)照組（P ＜0.01）。對(duì)于糞便中乳酸菌與大腸桿菌比值，枯草芽孢桿菌影響差異顯著，牛至提取物、枯草芽孢桿菌和牛至提取物交互作用影響差異極顯著；試驗(yàn)組Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ與對(duì)照組比差異不顯著；試驗(yàn)組Ⅳ比對(duì)照組低43.01%（P ＜0.05）；其他試驗(yàn)組均比對(duì)照組低（P ＜0.01）。

3 討論

3.1 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐生長性能的影響

飼用益生芽孢桿菌能夠分泌多種胞外消化酶，包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、糖化酶、纖維素酶、木聚糖酶和肌醇六磷酸酶等，能顯著改善動(dòng)物腸道消化內(nèi)環(huán)境，提升飼料利用率，促進(jìn)生長性能[9]?？莶菅挎邨U菌屬于飼用益生芽孢桿菌。植物提取物的抗菌作用機(jī)制包括破壞/降解細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)、破壞細(xì)胞膜蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、破壞細(xì)胞質(zhì)膜、使細(xì)胞內(nèi)容物外泄、凝聚細(xì)胞質(zhì)及減弱質(zhì)子運(yùn)動(dòng)力等[10]。牛至提取物中香芹酚和百里香酚主要作用模式是膜穿孔和膜黏合，細(xì)胞膜通透性改變和胞內(nèi)物質(zhì)外泄，導(dǎo)致重要的酶系統(tǒng)受到損害，從而引起微生物死亡[11]。

本試驗(yàn)中，末體重試驗(yàn)組Ⅴ比對(duì)照組高2.24%，平均日增重試驗(yàn)組Ⅴ和Ⅶ分別比對(duì)照組高4.43%和3.53%，平均日采食量試驗(yàn)各組與對(duì)照組比差異不顯著，料重比試驗(yàn)組Ⅴ比對(duì)照組低4.01%，腹瀉率試驗(yàn)組Ⅲ、Ⅴ和Ⅶ分別比對(duì)照組低6.38%、6.49%和6.60%。聶利芳[12]在AA 肉雞日糧中添加牛至油可提高1～21日齡AA 肉雞日增重和采食量，降低料重比；但對(duì)22～42 日齡AA 肉雞采食量影響差異不顯著。丁浩等[13]飼糧添加500g/t 枯草芽孢桿菌DSM32315 制劑可改善保育豬的機(jī)體氮利用和糖脂代謝相關(guān)的血漿生化參數(shù)，降低腹瀉率，進(jìn)而提高生長性能。蒲俊寧[14]在斷奶仔豬日糧中添加苯甲酸、凝結(jié)芽孢桿菌和牛至油組合可提高仔豬的生長性能，降低腹瀉率41.71%。在北極狐仔狐日糧中添加枯草芽孢桿菌和牛至提取物能夠提高北極狐仔狐末體重和平均日增重，改善平均日采食量和料重比，降低腹瀉率，與上述在豬雞上的研究有相似的效果。

3.2 枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐糞便中細(xì)菌數(shù)量的影響

腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)受到多個(gè)因素的影響，宿主的遺傳背景和環(huán)境共同決定著動(dòng)物腸道微生物的種類和數(shù)量。環(huán)境因素尤其是飲食是腸道微生物菌群結(jié)構(gòu)差異的主要影響因素[15]。本試驗(yàn)中，細(xì)菌總數(shù)試驗(yàn)組Ⅴ與對(duì)照組相比差異不顯著，試驗(yàn)組Ⅸ糞便中乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量最高，乳酸菌和大腸桿菌的比值也最低，試驗(yàn)組Ⅴ乳酸菌和大腸桿菌的比值最高，同時(shí)大腸桿菌數(shù)量最低。田躍等[16]育肥豬日糧添加100 mg/kg 和200 mg/kg 枯草芽孢桿菌可以顯著降低6 周和15 周育肥豬糞便中氨氣濃度和大腸桿菌數(shù)量，提高育肥豬糞便中乳酸桿菌數(shù)量。韓慶功等[17]在仔豬日糧中添加牛至油后糞便中細(xì)菌總數(shù)顯著增加，但牛至油組、抗生素組之間差異不顯著；大腸桿菌數(shù)量降低，乳酸桿菌、雙歧桿菌的數(shù)量增加，減少斷奶仔豬發(fā)生腹瀉的概率。鄧雨英等[18]研究發(fā)現(xiàn)在雪峰烏骨雞日糧中，添加枯草芽孢桿菌和植物精油復(fù)合制劑糞便大腸桿菌數(shù)量無顯著差異。韓麗等[19]在圍產(chǎn)母豬日糧中添加枯草芽孢桿菌，母豬糞便中的乳酸桿菌/大腸桿菌呈增加趨勢(shì)。本試驗(yàn)中，枯草芽孢桿菌和牛至提取物對(duì)北極狐仔狐糞便中細(xì)菌數(shù)量也有不同程度的影響。動(dòng)物糞便菌群組成存在差異性，與動(dòng)物品種、健康狀態(tài)和日糧的結(jié)構(gòu)等因素有關(guān)[20-22]。試驗(yàn)組Ⅸ糞便中乳酸菌和大腸桿菌數(shù)量同時(shí)增加，具體是由哪種原因引起的還需要進(jìn)一步研究探討。

4 結(jié)論

綜上所述，試驗(yàn)組V 末體重、平均日增重及乳酸菌和大腸桿菌的比值最高，腹瀉率比金霉素組低，糞便中大腸桿菌數(shù)最低，與腹瀉率最低的試驗(yàn)組Ⅶ比無顯著差異。由此可見，在本試驗(yàn)條件下北極狐日糧中牛至提取物添加量為250 mg/kg和枯草芽孢桿菌添加量為300 mg/kg 組合時(shí)，生產(chǎn)性能效果最好，并且優(yōu)于金霉素組。