分散微固相萃取技術(shù)在茶飲料農(nóng)藥殘留量檢測中的應用

王 丹，李 琳，徐 斌，王守彬

（1.濰坊市疾病預防控制中心理檢科，山東濰坊 261061；2.濰坊海關(guān)，山東濰坊 262702）

氨基甲酸酯類農(nóng)藥是茶葉種植中常用的殺蟲劑。茶葉富含茶多酚、生物堿、氨基酸等多種活性物質(zhì)，在質(zhì)譜檢測分析中容易對農(nóng)藥殘留產(chǎn)生基質(zhì)效應干擾，因此對樣品的有效凈化至關(guān)重要[1-3]。目前，茶葉中農(nóng)藥殘留的樣品前處理方法主要有分散固相萃取法（Dispersed Micro Solid Phase Extraction，DSPE）和固相萃取法（Solid Phase Extraction，SPE）。DSPE法被用于吸附茶葉提取液中的干擾物質(zhì)，但尋找合適的吸附劑很困難。十八烷基硅烷鍵合硅膠、TPT和HLB等類型的SPE柱提取純化水、牛奶、水果和蔬菜等樣品中農(nóng)藥殘留效果很好，但在茶葉等復雜基質(zhì)中的提取效果不太理想[4]。分散微固相萃取（Dispersed Micro Solid Phase Extraction，DMSPE）基于DSPE和SPE技術(shù)，將固體吸附劑分散在提取液中用于吸附目標分析物，然后進行洗脫，從而提高了復雜基質(zhì)樣品的凈化效果[5-6]。本研究使用DMSPE技術(shù)對茶飲料樣品進行前處理，通過優(yōu)化吸附劑和前處理條件，結(jié)合超高效液相色譜-三重四極桿技術(shù)，成功建立了測定茶飲料中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設備

安捷倫超高效液相-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（1290-6460）；離心機（ST16R，Thermo）；氮氣濃縮儀（美國NEVAP）；安捷倫C18柱（RRHD Eclipse plus）。

1.2 材料與試劑

茶飲料樣品為市售產(chǎn)品。

乙腈、乙酸（默克）；醋酸銨、無水硫酸鈉、C18、PSA和PVPP粉末（Aglient）；10種氨基甲酸酯類農(nóng)殘標準品（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）；實驗用水（屈臣氏蒸餾水）。

1.3 方法

1.3.1 標準溶液制備

各取1.0 μg·mL-1標準溶液配制成混合使用液（1 000 μg·L-1），吸取適量，放入10 mL容量瓶中，加入1∶1的乙腈和含0.1%乙酸的醋酸銨溶液（20 mmol·L-1），配制成一套標準溶液，濃度分別為10 μg·L-1、20 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1、500 μg·L-1。

1.3.2 樣品制備

在15 mL BD管中量取5.0 mL茶飲料樣品，靜置20 min。加入2 mL水，混合30 s，加入8 mL乙腈混合后，超聲波提取18 min。在8 000 r·min-1下離心4 min后，用裝有吸附填料（15 mg PSA和35 mg GCB）的2 mL BD管移取1.0 mL上清液，混合40 s，使目標物被填料吸附，后用2.0 mL乙腈（0.1%甲酸水）溶液進行洗脫，以10 000 r·min-1冷凍離心洗脫液4 min后，過0.22 μm濾膜后上機。

1.4 儀器分析條件

（1）液相色譜條件。分析柱：安捷倫RRHD Eclipse plus-C1（83.0 mm×100 mm，1.8 μm）；流動相：B為乙腈，A為0.1%乙酸和20 mmol·L-1醋酸銨水溶液；柱溫：40 ℃；流速：0.25 mL·min-1。沖洗梯度：95% A，0～10 min；60% A，10～11 min；5% A，11～12 min；95% A，12～13 min，95% A，12～15 min。

（2）質(zhì)譜條件。多反應監(jiān)測正離子模式；干燥氣溫度：300 ℃；干燥氣流速：6 L·min-1；毛細管電壓：3 500 V；噴嘴電壓：250 V。霧化器壓力：30 psi；鞘氣溫度：300 ℃，鞘氣流速：11 L·min-1；毛細管電壓：4 000 V；10種氨基甲酸酯類農(nóng)殘的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 10種氨基甲酸酯類農(nóng)殘的質(zhì)譜相關(guān)參數(shù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 標準工作曲線

根據(jù)1.4條件測定混合化合物標準系列，以目標組分峰面積為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。如表2所示，目標化合物標準曲線回歸方程的相關(guān)系數(shù)為0.990 0～0.998 2，表明氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留在10～500 μg·L-1具有良好的線性關(guān)系。

表2 10種氨基甲酸酯加標回收率、相對標準偏差及相關(guān)系數(shù)

2.2 加標回收率

在空白基質(zhì)中以20.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1、500.0 μg·L-1濃度水平添加標準物質(zhì)，平行測定3次。10種氨基甲酸酯類的總離子流圖見圖1，加標回收率測量結(jié)果見表2。樣品加標回收率為56.6%～111.7%，RSD為0%～13.10%，均符合方法要求。

圖1 10種氨基甲酸酯類TIC圖

2.3 方法的檢出限和定量限

在空白樣本中添加特定濃度化合物上機檢測，以3倍信噪比（S/N）對應的被測化合物的含量為檢出限，以10倍信噪比對應的被測化合物的含量為定量限，結(jié)果見表3。檢測限為0.13～4.72 μg·kg-1，定限為0.39～14.20 μg·kg-1，符合國標要求。

表3 10種化合物的檢出限和定量限

2.4 樣品重復性實驗

如表4所示，對已知濃度的樣品連續(xù)進樣6次，測得RSD為0.52%～9.45%，方法重現(xiàn)性好。

表4 茶飲料中10種氨基甲酸酯的重復性實驗結(jié)果

3 結(jié)論

采用分散微固相萃取前處理技術(shù)可以快速、有效地凈化樣品，高效提取目標成分，操作過程簡單，大大減少了試劑和時間成本。同時，方法的穩(wěn)定性、精密度等指標也完全符合相關(guān)標準要求，因此分散微固相萃取結(jié)合UPLC-MS/MS可用于檢測茶飲料中的10種氨基甲酸酯殘留。