小麥中嘔吐毒素熒光定量免疫層析快速檢測產品評價

唐亞娥，王 壇，米 山

（銅川市糧油產品質量監督檢驗站，陜西銅川 727000）

小麥是我國的主要糧食作物之一，我國2022年小麥產量13 772萬t，占全國糧食總產量的20.06%。陜西省作為小麥的主產省之一，總產量約占全國小麥總產量的9%。真菌毒素是由真菌產生的小分子次級代謝產物，具有致癌、致畸和肝毒性的危害，可經過生物積累進入食物鏈。嘔吐毒素是真菌毒素的一種，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（Deoxynivalenol，DON），因其可以使動物產生嘔吐癥狀而被稱為嘔吐毒素，是麥類中最常見的真菌毒素之一[1-2]。陜西人民飲食習慣以面食為主，因此小麥的質量安全顯得尤為重要。

我國《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》（GB 2761—2017）規定小麥、小麥粉中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇限量為1 000 μg·kg-1。小麥中嘔吐毒素的檢測方法有液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜法、酶聯免疫吸附法、時間分辨熒光免疫定量法、膠體金快速定量法和膠體金定性法等[3-4]。液相色譜-串聯質譜、高效液相色譜等儀器檢測方法具有準確度高、穩定性好、靈敏度高的優點，但儀器設備相對昂貴，對檢測人員的要求高，需要在專業的實驗室操作，不適合在小麥收儲期間使用；免疫層析試紙條法因其快速、簡便、成本低的特點而適合小麥收儲現場[5]。《糧食質量安全監管辦法》第二十七條中明確規定，糧食經營者收購驗質檢驗以及縣級以上糧食行政管理部門依法開展的糧食質量安全風險監測與抽查檢驗，可采用國家糧食行政管理部門認可的快速檢驗方法，快速檢驗結果可作為收購驗質依據和質量安全風險監測與抽檢篩查的依據。采用快速檢驗方法進行監測和抽查檢驗，發現測定結果為國家標準臨界值時，應當按照國家標準規定的檢驗方法進行復核檢驗[6]。

目前，小麥中嘔吐毒素快速檢驗方法的應用在實際糧食收購中已初具規模，主要為膠體金免疫層析方法，隨著《糧油檢驗 谷物中黃曲霉毒素B1的測定時間分辨熒光免疫層析定量法》（LS/T 6143—2023）標準的發布，熒光免疫層析試紙條也開始進入市場，由于產品新進入市場且食品安全快速檢測試劑生產廠家受到的監管與食品生產以及醫療器械生產均不同，導致各個廠家產品質量差異較大[7]，影響小麥質量安全的判斷，甚至會造成一些嚴重的經濟糾紛和損失。

為在基層檢測中更加準確地檢出小麥中的嘔吐毒素，給予收儲單位和貿易商有效的參考，本評價選取了在陜西市場知名度相對高的A、B、C、D共4家產品。評價了不同廠家產品在小麥基質上對于嘔吐毒素的檢測能力。這對于幫助用戶了解現有快速檢測產品質量并進行合適的選擇、推動快速檢測產品生產廠家改進產品質量具有非常重要的現實意義。

1 材料與方法

1.1 材料

小麥、小麥粉常規樣品，來源于各收儲單位日常送檢；小麥粉有證標準物質，GBW(E)100382，證書編號TOXIN-JTBW1。

1.2 儀器與試劑

天平（RC-XY110-2C，北京睿誠永創科技有限公司），振蕩器（HMG-WX，北京美正生物科技有限公司），離心機（Timi-10k，上海泰坦科技股份有限公司），4個廠家嘔吐毒素熒光定量檢測卡/試紙條及對應的熒光定量讀數儀。

1.3 評價方法

1.3.1 評價樣品的選擇

根據小麥中DON的國家限量（1 000 μg·kg-1），使用低、中、高3個濃度水平的樣品進行評價，樣品均通過《食品安全國家標準 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的測定》（GB 5009.111—2016）中第二法免疫親和層析凈化高效液相色譜法進行測定，且滿足能力驗證均勻性和穩定性要求，評價用樣品中嘔吐毒素含量如表1所示。

表1 樣品中嘔吐毒素含量

1.3.2 準確度評價

對上述小麥及小麥粉樣品中DON含量進行檢測，整個檢測過程按照各個廠家說明書分別進行操作，每個樣品分別平行測定兩次取平均值進行結果統計。用每個樣品的檢測回收率來評價該廠家產品的準確度，回收率計算公式為

1.3.3 精密度評價

選取DON含量低、中、高3個濃度的小麥樣品進行6平行檢測，用每個樣品的檢測結果的相對標準偏差來評價該廠家產品的精密度，相對標準偏差計算公式為

1.3.4 其他指標評價

快速檢測產品因具有操作便捷、檢測效率高和檢測成本低等特點，適合在基層使用。本評價也對各廠家嘔吐毒素熒光定量檢測卡/試紙條的操作便捷性、檢測效率、檢測成本進行比較。

2 結果與分析

2.1 準確度

4個廠家DON熒光定量檢測卡/試紙條檢測小麥及小麥粉樣品中DON回收率結果如表2所示。A廠家產品對小麥和小麥粉基質中DON低濃度水平的回收率為66%～152%，中、高濃度水平的回收率為83%～103%，有證標準物質回收率為73%。B廠家產品對小麥和小麥粉基質中DON低濃度水平的回收率為71%～116%，中濃度水平的回收率為76%～102%，高濃度水平的回收率為85%～90%，有證標準物質回收率為92%。C廠家產品對小麥和小麥粉基質中DON低濃度水平的回收率為62%～104%，中濃度水平的回收率為83%～86%，高濃度水平的回收率為86%～119%，有證標準物質回收率為97%。D廠家產品對小麥和小麥粉基質中DON低濃度水平的回收率為84%～134%，中濃度水平的回收率為95%～117%，高濃度水平的回收率為98%～111%，有證標準物質回收率為118%。

表2 小麥及小麥粉樣品中DON檢測結果

2.2 精密度

4個廠家DON熒光定量檢測卡/試紙條檢測小麥中DON相對標準偏差結果如圖1所示。A廠家產品檢測小麥中DON僅有高濃度水平的相對標準偏差超過15%，中低濃度水平的相對標準偏差均小于15%。B、C、D廠家產品檢測小麥中DON低中高濃度水平的相對標準偏差均小于15%，其中C廠家和D廠家低中高濃度水平的相對標準偏差均小于10%。

圖1 不同廠家產品小麥中DON檢測結果相對標準偏差

2.3 其他指標評價

由表3可知，對比4家免疫層析試紙條形式為一步法或者兩步法，且提取液為去離子水或50%乙醇-水溶液操作和獲取均較為便捷、環保，單個樣本檢測時間均能控制在10 min以內，檢測成本均在25～36元。從這些指標上看均能滿足現場快速檢測的需求。

表3 不同廠家產品其他指標對比

3 結論

從基本指標對比來看，4個廠家的嘔吐毒素熒光定量條的產品設計均能滿足糧食收儲現場快速檢測的需求。不同廠家均有回收率超出80%～120%的結果。結合檢測結果的精密度，A廠家高濃度水平檢測結果相對標準偏差超出15%，偏差較大不符合糧食收儲要求；B、C、D廠家檢測結果精密度較好，但存在整體偏低或偏高的風險，整體偏低容易引起假陰性造成收儲糧食的不安全性，而整體偏高容易引起假陽性，容易造成送糧商家的損失。本評價從使用者的角度對市場上知名度較高的熒光免疫層析產品性能進行了初步評價，僅涉及準確度、精密度兩個主要性能指標，但是對檢測限、定量限，特異性及基質效應未能進行進一步評價，具有一定的局限性。但本評價對于幫助用戶了解現有快速檢測產品質量并做出合適的選擇、推動快速檢測產品生產廠家改進產品質量具有非常重要的現實意義。