1例犬子宮蓄膿的診治及病原菌的耐藥性分析

王超，劉正偉，高鋒，王心竹，郝春暉，劉琪，趙福慶

（ 遼寧農業職業技術學院，遼寧 營口 115009 ）

寵物犬子宮蓄膿是臨床中發病率較高的疾病之一，年齡越大發病率越高[1]。子宮蓄膿是由于子宮膿液聚集以及條件性致病菌感染加重為特征的疾病[2]。研究表明，該病發病原因復雜，與機體內生殖激素、致病菌的毒力以及犬的年齡和品種有關[3]。子宮蓄膿分為兩種類型：一種為開放型子宮蓄膿，主要表現為陰門處流出膿性分泌物；另一種為閉合型子宮蓄膿，陰門潔凈，無分泌物流出[4]。臨床中，兩種類型發病嚴重時常表現為功能紊亂伴發的嘔吐、腹瀉、電解質失衡等情況，嚴重時可發生休克、黃疸及膿毒血癥[5]。在整個疾病發展過程中，致病菌起到主要作用，因此，明確致病菌種類以及找到治療效果良好的抗生素是治療本病的關鍵。本文對1例犬子宮蓄膿的病例進行了細菌分離鑒定，并對分離細菌進行藥敏試驗研究，以期為該病的診斷、治療及預防提供參考。

1 病例資料

患犬雌性，7歲，體重8.6 kg，免疫齊全，未交配。主訴近1 w患犬陰道口流出黏性棕色分泌物，有腥臭味；食欲減退，飲水量少，精神萎靡，呼吸較從前急促，無其他病史。

2 檢查結果

2.1 患犬臨床檢查結果

患犬有舔舐生殖器現象，體溫升高（39.7 ℃），呼吸急促（37 次/min），收縮壓108 mmHg，舒張壓58 mmHg，心率110 次/min，黏膜潮紅，皮膚輕度脫水。觸診腹部膨大，陰門處有分泌物流出。建議進行實驗室檢查和影像學檢查。

2.2 患犬實驗室檢查結果

2.2.1 患犬陰道分泌物檢查結果

無菌棉簽蘸取患犬陰道分泌物，涂片染色，鏡檢觀察。結果發現，鏡檢可見分泌物中有大量的桿狀細菌和炎性細胞，未發現霉菌和滴蟲感染。

2.2.2 患犬血常規檢查結果（見表1）

表1 患犬血常規檢測結果Tab.1 Routine blood test results of sick dog

患犬外側小隱靜脈采血約0.5 mL，放入含有EDTA試管中混勻，利用愛德氏血液分析儀進行檢測。

由表1可知，患犬白細胞數為59.15×109/L，中性粒細胞數為51.62×109/L，單核細胞數為4.56×109/L，數值偏高。血小板數為73×109/L，數值偏低。結果提示，患犬體內存在嚴重感染。

2.2.3 患犬血清生化檢查結果（見表2）

表2 患犬血清生化檢查結果Tab.2 Serum biochemical test results of sick dog

患犬外側小隱靜脈采血約1 mL，放入無抗凝劑的試管中，利用血液生化分析儀進行檢測。由表2可知，患犬血液球蛋白含量為51 g/L，C反應蛋白含量為97.5 mg/L，提示患犬體內存在顯著的全身炎癥。

2.3 患犬影像學檢查結果

2.3.1 患犬X射線檢查結果（見圖1、圖2）

圖1 患犬X射線檢查結果（腹背位）Fig.1 X-ray results of sick dog (ventral dorsal position)

圖2 患犬X射線檢查結果（右側位）Fig.2 X-ray results of sick dog (right lateral position)

由圖1、圖2可知，患犬腹腔子宮部位出現密度均勻的液體成像，提示患犬子宮內可能存在積液或蓄膿。

2.3.2 患犬B超檢查結果

患犬保定，對腹部超聲部位剃毛，涂抹耦合劑，利用探頭在患犬恥骨前端先縱向掃查，再橫向掃查以確定膀胱位置，再利用探頭從患犬子宮頸向上掃查，子宮超聲掃查結果見圖3。

圖3 患犬B超檢查結果Fig.3 Result of B-ultrasonic examination of sick dog

由圖3可知，患犬子宮壁增厚，伴有積液，提示患犬患有子宮蓄膿、子宮內膜炎、子宮壁囊腫。

2.4 患犬診斷結果

根據臨床癥狀及實驗室檢查、影像學檢查結果，患犬確診為子宮蓄膿。經與寵主溝通后決定進行子宮摘除術。

3 治療

3.1 術前準備

患犬禁食12 h，禁水4 h，術前補液以糾正機體電解質平衡。手術器械包消毒烘干。麻醉前患犬注射止血敏（酚磺乙胺）、美洛昔康注射液，仰臥保定后進行術部剃毛，丙泊酚誘導麻醉，氣管插管連接呼吸麻醉機，異氟烷維持術中麻醉。術部碘伏消毒，鋪設創巾。

3.2 手術過程

患犬臍后方3 cm處切開約5 cm的切口，剪除多余的脂肪組織以防止術后結節產生。子宮鉤進入患犬腹腔將腸管拉到一側，暴露子宮后將子宮角緩慢拉出，找到卵巢和輸卵管，并鈍性分離出卵巢，利用三鉗法分別結扎兩側卵巢血管。分離周圍的子宮韌帶，將兩邊的動、靜脈結扎完全，利用三鉗法將子宮體夾緊貫穿結扎，切斷子宮體。患犬摘除的子宮和卵巢見圖4。

圖4 患犬摘除的子宮和卵巢Fig.4 Uterus and ovaries removed from sick dog

荷包縫合患犬子宮殘端，先用溫熱的0.9%生理鹽水沖洗，再使用溫熱的甲硝唑沖洗腹腔，縫合腹壁肌肉層、皮下組織，最后常規結節縫合患犬皮膚，腹部傷口消毒上藥、貼敷料貼。患犬蘇醒后佩戴伊麗莎白圈，防止舔咬傷口。

3.3 術后護理

術后患犬精神沉郁，沒有食欲、不愿意活動，8 h后少量喂食喂水，觀察患犬無異常后再少量喂食高能量易消化食物。觀察患犬狀態，無異常后再慢慢過渡到正常的飲食結構。整個護理過程中，應保證環境安靜整潔。

3.4 病原菌的分離與鑒定

手術取出子宮后，2 mL無菌注射器抽取約1 mL子宮內液體，放入1.5 mL無菌離心管中，置于4 ℃溫箱保存后將樣品轉送至實驗室進行病原菌分離鑒定。

3.4.1 病原菌培養及染色鏡檢結果

樣本經劃線法涂布接種于培養皿，37 ℃培養12 h后，可觀察到培養基上的菌落形態單一，呈灰白色、圓形、光滑、濕潤、不透明、菌落較大，無嗜血現象。

挑取單個菌落進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀察細菌形態單一，呈短桿狀，為革蘭氏陰性菌（紅色），菌株編號命名為W201101。革蘭氏染色鏡檢結果見圖5。

圖5 革蘭氏染色鏡檢結果Fig.5 Results of microscopic examination with Gram staining

3.4.2 病原菌PCR鑒定結果

挑取單個菌落加入1 mL滅菌水中制成菌液，100 ℃水浴加熱10 min，8 000 r/min離心3 min。取1 μL離心后的菌液作為PCR擴增模板，利用16S rDNA通用引物27F、1492R作為引物，擴增片段長度為1 500 bp。

PCR反應體系（20 μL）：2×Taq PCR MasterMix 10 μL、上下游引物各1 μL、DNA模板1 μL、滅菌水7 μL。

PCR反應條件：95 ℃預變性5 min；94 ℃變性30 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸2 min，共30個循環；72 ℃延伸7 min，4 ℃保溫。

PCR產物經1.0%瓊脂糖凝膠電泳驗證后，由蘇州泓迅生物科技有限公司進行測序，測序結果在NCBI核酸數據庫中進行BLASTN搜索。病原菌16S rDNA基因檢測結果見圖6，病原菌16S rDNA序列同源性比對結果見表3。

圖6 病原菌16S rDNA基因檢測結果Fig.6 16S rDNA gene results of isolated bacteria

表3 病原菌16S rDNA序列同源性比對結果Tab.3 Homology comparison results of bacterial 16S rDNA sequences

3.5 病原菌藥敏試驗結果（見表4）

表4 病原菌藥敏試驗結果Tab.4 Drug sensitivity test results of pathogenic bacteria

采用K-B瓊脂擴散法進行藥敏試驗，游標卡尺量取抑菌圈直徑。

由表4可知，病原菌對慶大霉素、頭孢曲松、頭孢噻肟、阿米卡星、頭孢吡肟、左氟沙星、環丙沙星、氧氟沙星、氨曲南、復方新諾明、多黏菌素B敏感，對紅霉素、頭孢呋辛、頭孢唑啉耐藥，對頭孢他啶中介。

3.6 治療用藥方案

術后前5 d每天對患犬靜脈輸注營養液、消炎等對癥治療，輸液方案為：靜脈滴注0.9%氯化鈉注射液150 mL+頭孢曲松鈉200 mg，5%葡萄糖注射液150 mL+代謝強10 mL，0.9%氯化鈉注射液150 mL+谷胱甘肽540 mg，替硝唑注射液50 mL；皮下注射美昔注射液0.9 mL。

住院1 w后患犬出院，術后10 d復查，傷口愈合良好，遂拆線。拆線后佩戴伊麗莎白圈，3 d線道完全愈合，摘下伊麗莎白圈。

4 討論

犬子宮蓄膿是一種常見的子宮內膜疾病。研究發現，犬子宮蓄膿在各個年齡段均可發生，最小發生子宮蓄膿的犬為6月齡，10歲前的母犬發病率在19%，未妊娠的母犬發病率相對較高[6-7]。發生這一現象的原因除垂體卵巢功能下降之外，還與免疫系統功能下降有關[8]。子宮蓄膿也與雌激素、孕酮的水平有關，雌激素水平較高可以提高外周血液中自然殺傷細胞的吞噬能力，而孕酮水平升高時，犬子宮內膜組織出現異位性增生，子宮平滑肌的收縮能力降低，導致子宮腺體毒素積累和異常排泄。母犬發情期和發情后期，雌激素水平下降，孕酮水平升高，導致非特異性的免疫效率降低，發情期和發情早期Toll樣受體（TLR）的表達降低，使胚胎定植和發育。在此階段，致病菌進入子宮內并附著于子宮內膜，刺激免疫反應發生，促進Toll樣受體2（TLR2）和Toll樣受體4（TLR4）的表達增加，從而刺激細胞因子、環氧合酶-2（COX-2）和前列腺素E2和F2α的分泌，引起炎癥反應[9]。

本病例中，患犬未受孕，年齡較大，表現生殖道流出膿性分泌物、體溫升高、精神萎靡、輕度脫水、腹部膨大等較明顯且典型的癥狀，因此初步判定為開放型子宮蓄膿。血常規檢查發現，患犬白細胞數、中性粒細胞數、單核細胞數等指標的數值均偏高，生化檢查球蛋白和C反應蛋白數值偏高，表明患犬存在嚴重感染。超聲檢查顯示子宮增粗1.93 cm，子宮壁增厚，超聲和X射線檢查均顯示子宮內有液體成像。上述檢查可以確診該犬患開放性子宮蓄膿。

子宮蓄膿除了影響犬生殖系統外，還會導致其他臟器發生病變[10]，分泌物及化膿菌滯留在子宮內，產生的毒素被吸收至血液會引起肝腎損傷，導致肝腎功能下降[11]。本病例中，患犬肌酐、尿素以及轉氨酶等指標均在參考范圍內，表明肝腎未受到損傷。研究表明，與閉鎖型子宮蓄膿相比，開放型子宮蓄膿是中度炎癥。閉鎖型子宮蓄膿患犬外陰部沒有分泌物，通常難以得到及時治療，大量分泌物在子宮內積聚使子宮腔擴張；若病程在晚期，可使子宮內膜萎縮，嚴重時可引發敗血癥，導致患犬死亡[12]。

犬子宮蓄膿常用的治療方案分為保守治療和手術治療。對于開放型子宮蓄膿，保守治療可采用注射前列腺素、孕酮拮抗劑阿來司酮、抗生素等藥物進行治療，在發病早期治療效果較好；對于閉鎖型子宮蓄膿，保守治療存在一定的風險，因而通常采用手術治療[8,13]。本病例中，患犬年齡較大，不作為育種犬，與寵主溝通后決定采取手術治療。術前穩定體液平衡糾正電解質紊亂，術中注意麻醉風險，術后給予抗生素防止感染發生；為減少術后疼痛帶來的應激反應，應給予鎮痛藥[14]。手術取出子宮后，利用無菌注射器抽取子宮內液體，進行病原菌分離，通過細菌培養、革蘭氏染色、16S rDNA測序最終確定該病原菌為大腸桿菌。為提高治療效率、節省治療費用以及預防病原菌傳播，對分離出的病原菌進行藥物敏感性試驗。選取15種常見抗生素進行試驗，結果顯示，該病原菌對除紅霉素、頭孢呋辛、頭孢唑啉外的其他12種抗生素均敏感。根據藥敏試驗結果，患犬術后選用頭孢曲松鈉治療，效果良好。

手術治療犬子宮蓄膿效果良好，但降低了育種價值，且子宮、卵巢摘除后，發生癌癥、骨科疾病、肥胖癥和尿失禁等疾病的風險大大增加[15]。此外，與成年犬相比，老年犬的手術風險較高，選擇治療方案時更應慎重。本研究結果為犬子宮蓄膿的治療和預防提供了一定的理論依據。

5 結論

犬子宮蓄膿常發生于年齡較大且未妊娠的母犬中，犬的發病率大于貓，發病與激素水平、病原菌感染以及相關疾病的繼發感染相關。目前，臨床診斷子宮蓄膿的檢查方式以血常規、血液生化檢查、C反應蛋白檢查、X射線檢查及超聲檢查為主。手術治療犬子宮蓄膿具有良好效果，但也存在增加其他疾病風險的弊端，因此建議采用早期保守治療配合抗生素使用的治療方法。