血細胞比對時校準系數調整的方法研究

汪秀紅,譚啟友

廣西壯族自治區柳州市柳城縣婦幼保健院檢驗科,廣西柳州 545299

目前本院實驗室有2臺不同品牌的血細胞分析儀(希森美康500I、邁瑞5390),盡管儀器的參考區間相同[1-2],由于不同血細胞分析儀的檢驗原理和方法不盡相同,導致同一標本在不同儀器上分析可能出現測定值的偏差,給評估和結果解釋及臨床動態監測帶來困難。為保證不同血細胞分析儀檢驗結果的準確性及可靠性,應對本實驗室的不同血細胞分析儀檢驗結果進行比對[3],以評價檢驗參數——白細胞計數(WBC)、紅細胞計數(RBC)、血紅蛋白(Hb)、紅細胞平均體積(MCV)、血小板計數(PLT)的準確性[4]和一致性[5]。參照美國臨床實驗室改進修正案(CLIA′88)[6]能力比對檢驗質量的要求,以其標準的1/2作為可接受誤差來判斷2臺或2臺以上血細胞分析儀檢驗結果的可比性[7]。本研究對血細胞比對時校準系數調整的方法進行了探索,現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 采用5份前來就診患者的新鮮EDTA-K2抗凝全血。標本1是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT低值要求的標本(低值標本),標本2是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT高值要求的標本(高值標本),標本3、4、5是滿足WBC、RBC、Hb、MCV、PLT中值要求的標本(中值標本)。高、中、低值的劃分如下:WBC,<4×109/L為低值,(4～10)×109/L為中值,>10×109/L為高值;RBC,<3.5×1012/L為低值,(3.5～5.5)×1012/L為中值,>5.5×1012/L為高值;Hb,<110 g/L為低值,110～160 g/L為中值,>160 g/L為高值;PLT,<100×109/L為低值,(100～300)×109/L為中值,>300×109/L為高值;MCV,<80 fL為低值,80～100 fL為中值,>100 fL為高值。

1.2儀器及試劑 血細胞分析儀邁瑞5390、希森美康500I,均使用配套試劑。

1.3方法 采用全自動進樣模式進行血常規檢測,以參加廣西臨檢中心成績合格的血細胞分析儀(希森美康血細胞分析儀500I)作為基準儀器(靶機)進行血常規各項參數比對,比對標準按CLIA′88標準進行。每份標本在每臺儀器檢測兩次,取兩次檢查結果的均值進行比對。比對結果超出范圍的項目需要進行人工校準[8],則需要計算出與目標值的相對偏差(偏倚度),計算出儀器新的校準系數,錄入新校準系數后重新檢測比對,當測定結果與靶值的偏差在1%～2%時可以將此標本進行5～10次檢測,計算均值,用均值來調整校準系數,以獲得偏差最小的系數為最佳調整系數。相對偏差=(需比對儀器測定值-基準儀器測定值)/基準儀器測定值,新校準系數=舊系數±相對偏差%,儀器的舊校準系數可以在儀器人工校準界面讀取,邁瑞5390系數調整的允許范圍是75%～125%。

2 結 果

2.12臺儀器5份標本WBC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結果比對 WBC在5份標本的偏差絕對值均>7.5,結論為不合格;RBC在5份標本的偏差絕對值均>3.0,結論為不合格;PLT在標本1、2、4的偏差絕對值均>12.5,結論為不合格;MCV在5份標本的偏差絕對值均<3.0,結論為合格。WBC、RBC、PLT檢測結果超出允許誤差,需要進行人工校準。見表1。

表1 2臺儀器5份標本WBC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結果比對

2.2失控項目的第一次新校準系數 以標本1(低值標本)、標本2(高值標本)、標本5(中值標本)進行調整,計算失控的WBC、RBC、PLT的第一次新校準系數。見表2。

2.3根據第一次新校準系數重新檢測比對

2.3.1WBC參數 從表3中可以看出,用標本2(高值標本)計算的第一次WBC新校準系數錄入后5份標本結果偏差絕對值均>7.5,結論為不合格。從表4中可以看出,用標本5(中值標本)計算的第一次WBC新校準系數錄入后5份標本結果偏差絕對值均>7.5,結論為不合格。從表5中可以看出,用標本1(低值標本)計算的第一次WBC新校準系數錄入后,標本1、4、5測定結果的偏差絕對值>7.5,標本2、3測定結果的偏差絕對值<7.5,結論為不合格。WBC在用標本1(低值標本)計算的新校準系數錄入后檢測的結果更靠近靶值。WBC還需繼續進行人工校準。

表3 以標本2(高值標本)計算的第一次新校準系數調整后2臺儀器5份標本WBC、RBC、PLT檢測結果的比對

表4 以標本5(中值標本)計算的第一次新校準系數調整后2臺儀器5份標本WBC、RBC、PLT檢測結果的比對

表5 以標本1(低值標本)計算的第一次新校準系數調整后2臺儀器5份標本WBC、RBC、PLT檢測結果的比對

2.3.2RBC參數 從表3中可以看出,用標本2(高值標本)計算的第一次RBC新校準系數錄入后,5份標本結果偏差絕對值均>3.0,結論為不合格。從表4中可以看出,用標本5(中值標本)計算的第一次RBC新校準系數錄入后,有5份標本結果偏差絕對值>3.0,結論為不合格。從表5中可以看出,用標本1(低值標本)計算的第一次RBC新校準系數錄入后,標本1～5測得的結果偏差為-4.50%、-3.58%、-7.40%、-4.36%、-2.96%,絕對值均接近3.0,結論為不合格。RBC用標本5(中值標本)計算出的新校準系數錄入后檢測的結果總體更靠近靶值。RBC還需繼續進行人工校準。

2.3.3PLT參數 從表3中可以看出,用標本2(高值標本)計算的第一次PLT新校準系數錄入后,有2份標本結果偏差絕對值<12.5,3份標本結果偏差絕對值>12.5,結論為不合格。從表4中可以看出,用標本5(中值標本)計算的第一次PLT新校準系數錄入后,標本1～5測定結果的偏差絕對值<12.5,結論為合格。從表5中可以看出,用標本1(低值標本)計算的第一次PLT新校準系數錄入后,標本1、2測定結果的偏差絕對值>12.5,標本3、4、5測定結果的偏差絕對值<12.5,結論為不合格。PLT用標本5(中值標本)計算出的新校準系數錄入后檢測的結果更靠近靶值,結果在控,保留此校準參數。PLT不需繼續進行人工校準。

2.4多次校準系數調整后2臺儀器5份標本WBC、RBC、Hb、MCV、PLT重新檢測的結果比對 在第一次新校準系數的基礎上進行測試后,以偏離最遠的那個濃度的標本再次進行相應校準系數調整。經過反復調整,當WBC的校準系數調整到104.40、RBC的校準系數調整到100.20、PLT的校準系數調整到103.03時進行5份標本檢測。結果顯示:WBC測定結果的偏差絕對值均≤7.5,結論合格;RBC測定結果的偏差絕對值均≤3.0,結論為合格;Hb的測定結果的偏差絕對值均≤3.5,結論為合格;MCV測定結果的偏差絕對值均≤3.0,結論為合格;PLT測定結果的偏差絕對值均<12.5,結論為合格。見表6。

表6 多次校準系數調整后2臺儀器5份標本WBC、RBC、Hb、MCV、PLT檢測結果的比對

3 討 論

大部分血細胞分析儀檢測WBC的原理多采用電阻抗法、化學染色法、熒光染色法,但不同血細胞分析儀的檢驗原理和方法不盡相同,其檢驗結果存在一定偏差。本實驗室有2種不同品牌的血細胞分析儀,由于品牌和型號的不同將會導致同一標本在不同儀器上分析可能出現測定值的偏差,給評估和結果解釋及臨床動態監測帶來困難。為保證不同血細胞分析儀檢驗結果的準確性及可靠性,應對同一實驗室的不同血細胞分析儀檢驗結果進行比對,以評價檢驗項目WBC、RBC、Hb、HCT、PLT的準確性和一致性。參照CLIA′88的要求對本實驗室邁瑞5390及希森美康500I兩種不同品牌的血細胞分析儀進行比對,用5份有不同的高、低、中值標本進行2臺儀器測試,確定在控的項目,已經在控的項目不需要進行系數校準,對不在控的項目要計算出相對偏倚度(偏差),通過偏倚度(偏差)來進行儀器校準[9]。本試驗5份標本比對后Hb、MCV均在控,WBC、Hb、PLT不在控,計算出WBC、Hb、PLT不同水平的偏倚度及新校準系數,錄入儀器后重新檢測。以標本2(高值標本)計算的新系數后錄入儀器后重新測定得到的結果,WBC、Hb、PLT的偏倚度均超出CLIA′88的允許總誤差,因此不能接受用高值標本計算的校準系數;以標本5(中值標本)計算偏差進行調整儀器系數后重新檢測標本,PLT的偏倚度在控,可以接受此次PLT的校準系數;WBC、RBC的結果靠近靶值但仍然失控因此不能完全接受由中值標本計算的校準系數;以標本1(低值標本)計算的新系數后錄入儀器后重新測定得到WBC、RBC的結果靠近靶值,但仍然失控因此不能接受由低值標本計算的校準系數。通過觀察3組數據中標本1(低值標本)計算出的校準系數,WBC檢測結果更靠近靶值,因此暫時接受此系數并且在此基礎上再次進行儀器的校準系數調整,以偏離最遠的那個濃度的標本進行相應校準系數調整,針對中值的失控則選取5號標本進行計算;RBC則以中值標本計算的校準系數為基礎進行下一步的調整。最后得到WBC的校準系數為104.40、RBC的校準系數為100.20、PLT 的校準系數為103.03時,WBC、RBC、PLT的檢測結果均在允許范圍內[10]。

以上說明,針對不合格的血細胞分析儀進行校準系數調整時可以用高、中、低值標本進行初次的校準系數調整,接受最佳的校準系數(即失控最少的);再以失控較多的水平進行二次調整;最后重新進行高、中、低值標本的測試,觀察結果是否在目標偏倚度內,偏倚度越接近0越好,如果全部結果都在控則接受此次的系數調整;在沒有低值標本的情況下各項參數的校準可以先以中值進行比對,計算出相對偏差及新校準系數錄入血細胞分析儀,再進行第2次比對;逐次調整系數。每個項目的調整都以傾向于靶值的校準系數為基礎進行下一步調整;但是也不會立即達到最佳系數狀態,還要進行2次、3次或多次的中值標本調試,才能將失控的儀器調整到在控狀態,使比對儀器檢驗結果具有較好的可比性、準確性、一致性[11]。

在工作中血細胞分析儀每年需要進行兩次校準[12]及比對,以確保及時發現和調整系統誤差,確保檢驗科室內各類型血細胞分析儀的可比性;在更換試劑批號后要觀察室內質控結果記錄,變異系數越小說明其性能穩定精密度[13]越好;經過調整的校準系數[14]一般不再變更,除非比對不合格需要重新校準。實驗室有多臺血細胞分析儀時應選擇一臺性能較好的儀器作為基準儀器,其條件需滿足:(1)使用原廠配套試劑;(2)每年用配套校準品進行校準;(3)規范開展室內質控[15],參加室間質評成績優良。以此臺基準儀器為標準開展不同廠家血細胞分析儀和不同型號血細胞分析儀的比對和校準,使所有儀器的檢測結果非常接近,可解決儀器的可比性問題。