血清VAP-1、VCAM-1在甲狀腺癌患者中的變化及意義

張燕妮,胡玉海

湖北省武漢市漢口醫院檢驗科,湖北武漢 430013

甲狀腺癌是臨床上最常見的惡性內分泌系統腫瘤,流行病學顯示,近年來甲狀腺癌在全球范圍內的發病率均呈明顯上升趨勢。盡管有75%～85%的甲狀腺癌患者為甲狀腺乳頭狀癌,預后較好[1]。然而由于腫瘤侵襲性較強,長期隨訪顯示超過25%的甲狀腺乳頭狀癌患者經過常規治療后仍會出現復發和轉移,其中大部分需經二次手術并輔以放射治療和靶向藥物治療;另一部分仍無法根治,最終死亡[2]。甲狀腺髓樣癌和甲狀腺未分化癌因為侵襲性較強,進展迅速,預后較差[3]。因此,深入研究甲狀腺癌進展標志物,對早期診斷和疾病病情監測,以及改善患者預后具有十分重要的作用。

血管黏附蛋白-1(VAP-1)為內皮細胞黏附分子,主要參與白細胞滾動黏附和向炎癥部位轉移,其水平高低與胃癌、肝癌等疾病的復發和預后差密切相關[4-5]。血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)是一類通過介導白細胞黏附等導致血管內皮細胞功能受損的黏附分子,與多種腫瘤的預后也密切相關[6]。研究表明VAP-1和VCAM-1的水平與甲狀腺癌細胞侵襲、黏附和遠處轉移密切相關[7-8]。因此本研究擬通過比較血清VAP-1和VCAM-1在甲狀腺癌患者、甲狀腺腺瘤患者和健康者間的變化,進而評估這2項指標聯合檢測對甲狀腺癌的診斷價值,為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年7月至2022年5月在本院行甲狀腺全切術并經病理檢查確診的甲狀腺癌患者57例作為甲狀腺癌組,另選取同期確診的甲狀腺腺瘤患者47例作為甲狀腺腺瘤組,同期體檢健康者30例作為健康對照組。甲狀腺癌組:男13例,女44例;年齡19～69歲,平均(43.77±11.85)歲;甲狀腺乳頭狀癌32例,甲狀腺濾泡狀癌14例,甲狀腺髓樣癌10例,甲狀腺未分化癌1例;TNM分期,Ⅰ～Ⅱ期39例,Ⅲ～Ⅳ期18例;有淋巴結轉移36例。甲狀腺腺瘤組:男16例,女31例;年齡20～52歲,平均(38.60±8.16)歲。健康對照組:男8例,女22例;年齡21～53歲,平均(37.57±8.62)歲。3組研究對象性別、年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05),具有可比性。甲狀腺癌組納入標準:(1)為首次確診甲狀腺癌,術前未接受其他相關治療;(2)未合并高血壓、心臟病等心腦血管疾病;(3)臨床資料完整。排除標準:(1)合并其他系統相關疾病;(2)患有傳染性疾病;(3)合并其他甲狀腺相關疾病;(4)近期服用可能影響本研究結果的藥物。本研究符合相關醫學倫理學要求并獲得本院醫學倫理委員會批準。

1.2儀器與試劑 PW350全自動洗板機(深圳市匯松科技發展有限公司),RT-6100全自動酶標儀(深圳雷杜生命科學股份有限公司),BY-300C低速臺式高速離心機(北京白洋醫用離心機有限責任公司),DW-86L338J醫用超低溫保存冰箱(青島海爾生物醫療股份有限公司),人VAP-1 酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測試劑盒(EK1646,武漢博士德生物工程有限公司),人VCAM-1 ELISA檢測試劑盒(EK0537,武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3方法 甲狀腺癌患者分別于術前和術后第3天晨起空腹采集外周靜脈血3 mL,甲狀腺腺瘤組和健康對照組均晨起空腹采集外周靜脈血3 mL,3 000 r/min離心15 min,取血清于-80 ℃冰箱凍存備用。采用ELISA檢測血清VAP-1和VCAM-1水平。ELISA嚴格按照產品說明書進行操作。具體如下:每孔加入250 μL稀釋血清 (即25 μL血清加入225 μL標本稀釋液),封板后37 ℃孵育90 min,吸棄酶標板內液體,每孔加入100 μL生物素標記抗人抗體,37 ℃孵育60 min,1×洗滌緩沖液洗板3次,每孔加入100 μL ABC工作液,37 ℃孵育30 min,1×洗滌緩沖液洗板5次,最后每孔加入90 μL TMB顯色液,37 ℃避光25 min,每孔加入100 μL終止液,使用酶標儀在450 nm檢測吸光度(A)。

2 結 果

2.1各組血清VAP-1和VCAM-1水平比較 甲狀腺癌組術前血清中VAP-1水平顯著低于甲狀腺腺瘤組和健康對照組(P<0.05),而血清VCAM-1水平顯著高于甲狀腺腺瘤組和健康對照組(P<0.05)。血清VAP-1和VCAM-1水平在甲狀腺腺瘤組和健康對照組間差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清中VAP-1和VCAM-1水平檢測比較

2.2甲狀腺癌組手術前后血清VAP-1和VCAM-1水平比較 和術前相比,甲狀腺癌組術后血清VAP-1水平顯著升高(P<0.05),而血清VCAM-1水平顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 甲狀腺癌組手術前后血清中VAP-1和VCAM-1水平比較

2.3不同臨床病理參數的甲狀腺癌患者術前血清VAP-1和VCAM-1水平比較 術前血清VAP-1、VCAM-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結轉移的甲狀腺癌患者中差異有統計學意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者中術前血清VAP-1、VCAM-1水平差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理參數的甲狀腺癌患者術前血清VAP-1和VCAM-1水平比較

2.4血清VAP-1和VCAM-1診斷甲狀腺癌的ROC曲線分析 ROC曲線分析結果顯示,血清VAP-1、VCAM-1單項檢測診斷甲狀腺癌的曲線下面積(AUC)分別為0.883(95%CI:0.828～0.939)、0.698(95%CI:0.604～0.793),2項聯合檢測診斷甲狀腺癌患者的AUC為0.904(95%CI:0.854～0.954)。見表4和圖1。

圖1 血清VAP-1和VCAM-1檢測診斷甲狀腺癌的ROC曲線

表4 血清VAP-1和VCAM-1單項及聯合檢測診斷甲狀腺癌的效能

3 討 論

據國家癌癥中心最新統計數據顯示,我國甲狀腺癌不僅發病率和病死率呈現持續上升趨勢,而且5年生存率與發達國家相比仍有14%左右的差距。因此加大高危人群的早期篩查和診治勢在必行。目前超聲檢查由于其具有無創、易操作、快速等諸多優勢,成為臨床上對甲狀腺癌篩查的首選方法。但是眾多研究表明,單純依靠超聲方法對甲狀腺癌診斷的靈敏度、特異度和準確度均不足80%[9-10]。這與超聲檢查主要依據病變形態、大小、病灶鈣化、病灶血流狀況等指標進行診斷密切相關。而細針穿刺活檢技術,由于其可以在超聲引導下準確判斷組織病變狀況,故具有較好的臨床診斷特異度,但是由于其具有有創性,且研究顯示部分經該技術穿刺的患者會增加淋巴結轉移、骨轉移和肺轉移等情況的發生,增加致死率[10]。因此尋找血液標志物有其重要的臨床意義。

近年來有關甲狀腺癌患者血清標志物、患者清除甲狀腺癌術后的殘余甲狀腺組織(簡稱為清甲)效果、清甲治療后對患者預后的影響等研究已取得了較大進步,如促甲狀腺激素(TSH)、甲狀腺球蛋白(Tg)和甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)等已在臨床廣泛應用,其中Tg被美國甲狀腺協會(ATA)等推薦為臨床上行甲狀腺癌全切術后復發及轉移的重要監測指標[11]。但由于Tg水平受到TSH調控,同時易受患者生理狀態、血液中其他免疫因子的影響,故在2015版ATA指南[12]及我國關于甲狀腺癌的指南[13]中已明確術前血清Tg水平增高不能作為診斷甲狀腺癌的依據。但鑒于術后Tg水平升高可能提示甲狀腺癌術后體內殘留甲狀腺組織或癌組織,且Tg的最佳區分水平仍未明確,故術后Tg水平仍不足以用于監測甲狀腺癌的預后,需輔以影像學證據[14-15]。因此,有必要篩選更為敏感的血清生物學標志物來輔助診斷和監測甲狀腺癌。

VAP-1是一種內皮黏附分子,可促進淋巴細胞黏附于血管內皮,還可以通過調節轉錄因子、趨化因子和其他黏附分子來調節炎癥微環境[16]。在結直腸癌患者中,癌組織的VAP-1 無論是在mRNA水平還是蛋白水平均顯著降低,血清VAP-1水平也顯著低于健康對照者[17]。因此本研究分析了甲狀腺癌患者血清VAP-1的水平,結果顯示甲狀腺癌患者血清VAP-1水平也顯著降低,術后VAP-1水平明顯增高,術前血清VAP-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結轉移的甲狀腺癌患者中差異有統計學意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者術前血清VAP-1水平差異無統計學意義(P>0.05)。采用ROC曲線分析甲狀腺癌患者血清VAP-1水平對甲狀腺癌的診斷價值,結果顯示血清VAP-1單項檢測診斷甲狀腺癌的AUC分別為0.883(95%CI:0.828～0.939)。這說明甲狀腺癌患者血清VAP-1水平可以很好地用于診斷甲狀腺癌,同時也是甲狀腺癌患者疾病進展的一個重要標志物。

VCAM-1可通過介導細胞間及細胞與間質之間的黏附從而參與細胞分化、炎癥、對移植組織的反應和腫瘤擴散等多種生物學過程[18]。前期研究表明在甲狀腺乳突狀癌中VCAM-1水平升高,其水平增加可能與組織分化、T細胞活化和腫瘤細胞的傳播密切相關,但確切作用仍不清楚[19]。在本研究中發現甲狀腺癌患者VCAM-1水平顯著高于甲狀腺腺瘤患者和健康對照者。與術前相比,術后甲狀腺癌患者VCAM-1水平顯著降低。通過對不同病理類型的甲狀腺癌進行研究,發現不同甲狀腺癌類型的患者血清VCAM-1水平差異較大,未分化型甲狀腺癌患者血清VCAM-1水平顯著高于分化型甲狀腺癌。此外甲狀腺癌患者術前血清中VCAM-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結轉移的甲狀腺癌患者中差異有統計學意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者術前血清VCAM-1水平差異無統計學意義(P>0.05)。采用ROC曲線分析血清VCAM-1對甲狀腺癌的診斷價值,結果顯示VCAM-1單項檢測診斷甲狀腺癌患者的AUC為0.698(95%CI:0.604～0.793)。

ROC曲線分析顯示血清VAP-1和VCAM-1聯合檢測診斷甲狀腺癌的AUC為0.904(95%CI:0.854～0.954),大于2項指標單項檢測,因此血清VAP-1和VCAM-1聯合檢測可用于輔助臨床對甲狀腺癌的早期診斷和疾病進展的判斷,這樣有助于臨床對不良預后甲狀腺癌患者早期采取必要手段進行干預治療,進而提升患者生存率。

綜上所述,本研究發現甲狀腺癌患者血清VAP-1水平明顯降低, VCAM-1水平明顯升高,這2項指標的水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、淋巴結轉移和腫瘤分化程度的甲狀腺癌患者中有差異。VAP-1和VCAM-1聯合檢測可以提高對甲狀腺癌早期診斷的效能,有助于臨床早期診斷和監測疾病進展。