微柱凝膠技術在ABO血型不合新生兒溶血病診斷及輸血前檢驗中的應用分析

蔣金燕 楊媛媛

（中國人民解放軍陸軍第八十集團軍醫院輸血科，山東 濰坊，261000）

母體、新生兒的血型融合度低或不融合，是導致ABO血型不合新生兒溶血病（ABO-HDN）發生的主要原因，本病為血型免疫反應疾病[1]。母體在孕育胎兒的過程中產生的血型抗體無法與胎兒抗原相匹配，但血型抗體隨胎盤進入胎兒體內，導致同族免疫性溶血[2]。這類患兒的母親多為O型血，新生兒多為A/B型血，O型血母體內部會產生大量的抗A、抗B免疫球蛋白，拮抗A型血與B型血，當母體血液從胎盤進入胎兒體內，極易使其發生溶血。產前IgG抗體的降低，也是導致ABO-HDN發生的關鍵原因[3]。新生兒出生后尚未完全適應外在環境，抗A、抗B型抗體并未產生，與成人相比，新生兒紅細胞表面血型抗原的表達能力弱，因此無法利用成人血型鑒定方式對新生兒血型進行鑒定[4]。新生兒有ABO血型不合新生兒溶血病（ABO-hemolytic disease of the newborn，ABO-HDN）傾向時需盡早診斷，確診后要做好輸血前檢驗工作，通過交叉配血選擇與患兒血液相容度較高的同型血液。在交叉配血篩查中，重點篩查抗A、抗B的存在，以提升臨床檢驗結果的精確性，避免誤診，為后續臨床制訂相應的治療方案奠定基礎[5]。在眾多檢驗方法中，大量學者認為微柱凝膠技術（microbubes gel technology，MGT）在ABO-HDN診斷中具有較大優勢，且用于輸血前檢驗的安全性高。微柱凝膠法的基本原理是將生物分子放入一種叫作凝膠的特殊介質中，然后用電流將它們分離出來。凝膠是一種半固體、稠厚的物質，它可以將生物分子分離出來，并且可以控制分子的運動方向。凝膠的結構可以由電流控制，從而使生物分子在凝膠中沿著一定的方向移動，從而實現分離。因此本研究以2021年2月—2023年2月收治的58例ABO-HDN新生兒為對象，分析MGT技術優勢，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年2月—2023年2月中國人民解放軍陸軍第八十集團軍醫院收治的58例ABO-HDN新生兒為研究對象。新生兒中男、女患兒分別為30例、28例；日齡2～12 d，平均日齡（6.15±0.25）d；體質量4687.58～6584.56 g，平均體質量（5964.45±25.13）g；分娩方式：自然分娩、剖宮產分別40例、18例；HDN分型：輕型、中型、重型分別24例、25例、9例。胎齡38～41周，平均胎齡（39.45±1.23）周；血型：A型、B型分別30例、28例；網織紅細胞計數范圍為21.56×109/L～89.65×109/L。患兒資料完整，可進行后續報道。本研究所納入患兒的家長對研究內容知情同意，并簽署知情同意書。本研究經中國人民解放軍陸軍第八十集團軍醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 納入與排除標準

納入標準：①符合ABO-HDN的診斷標準[6]；②足月新生兒；③生長發育正常。

排除標準：①無惡性腫瘤等合并癥；合并先天性心臟病等先天疾病；②新生兒家族存在精神病史；③對藥物過敏；④生存時間＜3個月。⑤合并先天性畸形；⑥合并肝腎功能異常。

1.3 方法

對58例ABO-HDN患兒分別進行MGT和MPT檢驗，同時與5份ABO同型紅細胞制劑進行急性交叉配血試驗。

樣本采集：取患兒空腹靜脈血6 mL，分為兩份。正定、反定凝集強度分別達到3+、2+，且正反定型血型復查一致，即樣本質量符合檢測要求。

MPT檢驗過程：取一支干凈空試管，滴入2滴ABO-HDN患兒的紅細胞放散液/血漿，同時加入同型ABO-HDN紅細胞懸液（3%～5%），再加入低離子介質（0.7 mL），所有液體加入完成后完全混合，再加入凝聚胺溶液。利用離心機（生產企業：長春博迅生物技術有限責任公司，型號：TD-3A）高速離心處理，靜置10 min后去掉上清液，對紅細胞凝聚狀況進行評估，存在凝集狀態需重新進行上述操作。

MGT檢驗：取微柱凝膠卡，將紅細胞放散液/血漿滴入2滴，然后將血樣加入凝膠卡中，持續離心處理5 min，轉速1500 r/min，觀測最終結果。

溶血試驗：（1）游離抗體試驗：準備三支試管，分別標號A、B、O，在各試管中加入50 μL紅細胞懸液（濃度0.8%），再加入血清25 μL，置于孵育器中快速處理，等待15 min，然后高速離心10 min，離心速度2500 r/min。（2）直接抗球蛋白試驗：取一張抗人球蛋白卡，將A、B與O三孔標記出來，加入濃度為0.8%的紅細胞懸液，劑量50 μL，持續離心1 min，觀察離心結果。（3）抗體釋放試驗：取一張空白的抗人球蛋白卡，將A、B與O三孔標記出來，加入濃度為0.8%的紅細胞懸液，劑量50 μL，滴入放散液后持續孵育15～20 min，離心10 min后觀察結果。

1.4 觀察指標

（1）統計不同溶血檢驗下，ABO-HDN的診斷結果。（2）記錄MGT與MPT檢驗方式下，直抗與血清交叉配血的結果。（3）記錄MGT與MPT檢驗方式下，直抗與放散液交叉配血的結果。（4）統計血清MGT與MPT配血的結果。（5）統計放散液MGT與MPT配血的結果。

1.5 統計學分析

采用SPSS 25.0統計軟件進行數據分析，計數資料[n（%）]表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。一致性檢驗利用Kappa檢驗，Kappa值大小與一致性程度成正比。K為0～1。

2 結果

2.1 直抗、游離及放散診斷結果

三種溶血試驗結果顯示，直抗、游離及放散檢驗為陽性分別為29例（50.00%）、44例（75.86%）、58例（100.00%），見表1。

表1 直抗、游離及放散診斷結果 [n（%）]

2.2 直抗與血清交叉配血

58例ABO-HDN患兒共進行290次交叉配血試驗，MGT試驗顯示不合格率為173/290次（59.66%），MPT不合格率為82次（28.78%），MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗（χ2=57.955，P=0.001）。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為137/290（47.24%）、118/290（40.69%），陽性高于陰性，差異有統計學意義（χ2=18.239，P=0.001＜0.05），見表2。

表2 直抗與血清交叉配血 [n（%）]

2.3 直抗與放散液交叉配血

58例ABO-HDN患兒共進行290次交叉配血試驗，MGT試驗顯示不合格率為155次（53.45%），MPT不合格率為73次（25.17%），MGT檢出不合格率顯著高于MPT試驗（χ2=48.594，P=0.001）。直抗+與直抗-交叉配血的不合格率分別為120/290（41.38%）、108/290（37.24%），陽性高于陰性，差異有統計學意義（χ2=1.041，P=0.037＜0.05），見表3。

表3 直抗與放散液交叉配血 [n（%）]

2.4 配血結果（血清MGT與MPT）

血清MGT與MPT配血結果顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗顯示MGT與MPT一致性較差（Kappa值=0.215，P=0.002），見表4。

表4 配血結果（血清MGT與MPT） [n（%）]

2.5 配血結果（放散液MGT與MPT）

放散液MGT與MPT配血結果顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性。Kappa檢驗顯示MGT與MPT一致性較差（Kappa值=0.185，P=0.001），見表5。

表5 配血結果（放散液MGT與MPT） [n（%）]

3 討論

臨床常采用抗體釋放、游離血清等方法對ABO-HDN進行檢測，確診后需根據患兒狀況給予輸血治療[7]。先進行交叉配血再輸血，能摒除與患兒血液相容性較差的血型，通過對放散液和游離血清同時進行交叉配血，能保證交叉配血全面性[8-9]。采用放散液交叉配血，能有效評估細胞溶血性抗體、紅細胞的不相容程度。采用游離血清交叉配血，能評估血液溶血抗體、紅細胞的不相容程度，細胞和血液兼顧，有效提升交叉配血精度[10]。在眾多檢測技術中，MGT技術的應用效果較為理想。

本研究先對ABO-HDN患兒進行溶血檢驗，結果顯示：放散檢驗的陽性率為100%，可見放散檢驗在是ABO-HDN患兒的首選方法，配合游離與直抗試驗能夠獲得更加精確的診斷結果。在確定所有患兒都為ABO-HDN類型后，給予MGT檢驗，獲得良好效果。MGT與MPT配血結果也顯示，MPT檢出陽性的MGT也全部為陽性，且兩者一致性差，MGT檢驗不合格率較高。由統計學結果可知，MGT技術在ABO-HDN新生兒診斷中具有明顯優勢，其診斷精確率明顯高于MPT，能夠更加準確地檢驗出不合格交叉配血情況，提高輸血安全性。

本次獲得上述良好結果，與MGT的實施有密切關系。與其他檢驗技術相比，MGT技術在診斷ABO-HDN中優勢突出，兼具可重復、診斷結果準確、無創等優勢，在檢驗的同時保證患兒安全性，避免對患兒造成二次損傷[11]。同時在交叉配血過程中應用MGT技術，能有效提升檢驗敏感度，減少假陰性可能[12]。但MGT技術無法完全避免假陰性結果，因此在臨床檢驗過程中，需配合放散液、血清兩種交叉配血方式，提高不合格交叉配血檢出率，進而降低漏檢、誤檢風險[13]。由于ABO-HDN患兒的個體化差異，身體的抗體數量、紅細胞血型抗原表達強度等都存在差異性，加上胎兒時期被動接收的溶血性抗體數量不同，都會對交叉配血靈敏度產生不同程度的影響，因此在利用MGT技術進行交叉配血試驗時，要合理把控靈敏度的彈性范圍[14]。

直接抗人球蛋白檢測，是當前ABO-HDN廣泛應用的方法，但受到多種因素的限制，應用MPT技術所獲得的診斷結果仍存在較大爭議性[15]。與MPT技術相比，MGT技術是近年來臨床認可度較高的診斷技術，總結該項技術優勢主要包括：操作過程簡單，檢驗人員只需按照特定程序，依次完成各個檢測步驟，就能獲得相應結果，且檢測過程無需洗滌，檢驗時間短，滿足患者即時查看結果的需求；MGT檢驗的判讀方式簡單，可通過存盤、拍照方式進行檢驗，結果清晰且穩定；檢驗過程自動化程度高，有效避免人工檢驗導致的誤差；MGT技術具有較高的靈敏度，結合條形碼技術進行上機檢測，有利于降低檢測錯誤率，保證交叉配血檢驗的精準度。但需要注意的是，MGT技術并不是十全十美的，交叉配血檢驗過程中仍存在誤診風險，因此臨床檢驗過程中，仍需注意規避相關的風險點[16-17]。

楊鑫等[18]的報道中，對MGT技術的臨床應用價值進行評價，收治284例ABO-HDN新生兒，分別進行MGT檢驗及MPT檢驗，結果顯示：直抗、血清、放散試驗陽性率分別為53.1%、85.2%、100.00%，MGT檢出不合格率均顯著高于MPT試驗（P＜0.05），直抗+與直抗-交叉配血的不合格率相比，“+”均高于“-”（P＜0.05），本研究結果與上述報道具有一致性，可見本次結果具有較高的可信度。盡管本次研究初步取得成效，但仍存在漏診、樣本量少、健康教育不到位等問題[19-20]。

綜上所述，ABO-HDN患兒診斷及輸血前檢驗中，MGT技術的血液檢驗不合格率較高，且陽性檢出高于MPT。