活動期類風濕關節炎患者血漿肝素結合蛋白水平變化及診斷效能

宋波，黃猛，徐冬，豐新倩，李慶

1 淄博市第一醫院檢驗科，山東淄博255200；2 淄博市分子免疫檢驗醫學重點實驗室；3 青島大學附屬醫院檢驗科；4 淄博市第一醫院風濕免疫科

類風濕關節炎（RA）以進行性關節損傷和關節外表現為特征，可導致永久性殘疾，嚴重影響患者生活質量。近年來RA的診療取得一定進展，但早期診斷不及時仍會影響治療效果。DAS28是基于RA患者壓痛關節數（TJC）、腫脹關節數（SJC）、紅細胞沉降率（ESR）、疼痛視覺模擬評分（VAS）評估疾病活動度，是目前臨床評估RA疾病活動度最常用的指標。但DAS28在臨床應用中存在一定的局限性，如ESR受到貧血、紅細胞壓積、生理因素等影響［1］；在關節的輕微腫脹評估方面，主要依靠臨床體格檢查，帶有主觀性和局限性。ESR、C反應蛋白（CRP）可以在一定程度上反應RA疾病活動程度，但ESR、CRP都是炎癥的非特異性標志物，易受到年齡、貧血和免疫球蛋白、類風濕因子等影響，導致其敏感度和特異度不佳。因此迫切需要更準確的RA疾病活動度評價指標。肝素結合蛋白（HBP）是一種儲存在嗜天青顆粒和中性粒細胞分泌小泡中的糖蛋白，在全身炎癥反應早期中性粒細胞活化時釋放［2］。HBP可以激活單核細胞、成纖維細胞和T細胞，并通過刺激腫瘤壞死因子α（TNF-α）生成來增強炎癥反應［3］。同時HBP可增加血管內皮細胞的滲透性，引起炎性疾病中的血管功能障礙和血漿滲漏，導致組織水腫［4-5］。研究發現，HBP在自身免疫性疾病中表達增加，HBP水平升高與自身炎癥性疾病相關［6-7］。然而HBP在RA患者中的變化及意義鮮有報道。本研究通過檢測活動期RA患者血漿HBP水平，探討HBP對RA疾病活動度的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2021年7月—2022年12月淄博市第一醫院收治的215例RA患者（RA組），男31例、女184例，年齡18～83（58.3 ± 10.7）歲，病程0.1～40（6.2 ± 6.8）年。RA的診斷根據美國風濕學會（ACR）和歐洲抗風濕聯盟（EULAR）2010修訂的RA分類標準［8］。采用DAS28評分評價疾病活動度，緩解期RA 100例，活動期RA 115例（輕度16例、中度65例、重度34例）。排除感染、良惡性腫瘤、器官衰竭、其他免疫疾病、病例資料不全、妊娠患者。另選擇同期健康體檢者60例作為對照組，男15例、女45例，年齡31～72（59.1 ± 7.3）歲。兩組性別、年齡具有可比性。本研究通過淄博市第一醫院倫理委員會審核批準（批號：YXLL2021072269），獲得研究對象或其代理人知情同意。

1.3 血漿HBP檢測 采集受試者空腹靜脈血3 mL，EDTA-K2抗凝，2 000 r/min離心10 min，分離血漿，-80 ℃冷凍保存。使用全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特）、透射比濁法檢測血漿HBP。

1.4 RA患者炎癥指標檢測 采集受試者空腹靜脈血3 mL，置于促凝管中，離心分離血清，使用全自動生化分析儀（美國貝克曼庫爾特）、透射比濁法檢測CRP，全自動化學發光分析儀（蘇州立禾）、化學發光法檢測TNF-α。采集受試者空腹靜脈血1.6 mL，枸櫞酸鹽抗凝，魏氏法檢測ESR。

1.5 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件。計量資料采用Shapiro-Wilk法進行正態性檢驗，數據均不符合正態分布，以M（P25，P75）表示。多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗，兩變量間的相關性檢驗采用Spearman相關分析法，受試者工作特征（ROC）曲線分析HBP對RA疾病活動度的診斷價值。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組血漿HBP水平比較 RA組活動期、緩解期及對照組的血漿HBP水平分別為18.05（14.73，22.25）、8.80（7.40，11.62）、7.40（5.63，8.80）ng/mL，活動期RA高于緩解期RA和對照組（P均＜0.05），緩解期RA與對照組比較差異無統計學意義（Z=-0.706，P＞0.05）。活動期RA患者中，輕、中、重度患者的血漿HBP水平分別為13.70（12.60，14.68）、17.20（14.80，22.30）、21.25（19.08，30.23）ng/mL，重度患者高于中度和輕度患者，中度患者高于輕度患者（P均＜0.05）。

2.2 活動期與緩解期RA患者炎癥因子水平比較與緩解期RA相比，活動期RA患者血ESR、CRP、TNF-α水平升高（P均＜0.05）。在活動期RA患者中，重度患者血ESR、TNF-α高于輕度和中度患者，中度患者高于輕度患者（P均＜0.05）；重度患者血CRP高于輕、中度患者（P均＜0.05），輕、中度患者之間比較差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 活動期RA患者血漿HBP水平與炎癥因子的相關性 活動期RA患者血漿HBP水平與血ESR、CRP、TNF-α均呈正相關（r分別為0.442、0.581、0.478，P均＜0.05）。

2.4 血漿HBP對RA疾病活動期的診斷效能ROC曲線顯示，血漿HBP評估活動期和緩解期RA的最佳診斷臨界值為12.7 ng/mL，其ROC曲線下面積0.969，診斷活動期RA的敏感度為93.9%，特異度為84.0%。HBP評估活動期和緩解期RA的AUC高于ESR、CRP（P均＜0.05）。見表2。

表2 血HBP、CRP、ESR對活動期和緩解期RA的診斷效能

3 討論

HBP由中性粒細胞分泌，通過β2整合素介導中性粒細胞可被HBP激活，與血管內皮細胞黏附因子結合，改變血管內皮細胞通透性，引起血管滲漏［9］；HBP釋放后首先作用于血管內皮細胞，與內皮細胞表面多糖受體結合，引起鈣離子活化和細胞骨架重排，通過增加內皮細胞間隙改變細胞通透性，從而導致大分子滲漏和組織損傷［10］。血管翳是RA的病理基礎，其內包含新生微血管，HBP可以誘導血管內皮細胞的間隙增加和破壞，造成炎癥相關細胞外滲至關節腔中［11］。文獻報道，在關節滑液中存在中性粒細胞和TNF-α等細胞因子，可能導致骨侵蝕和軟骨退化［12-13］。HBP作為細菌感染性疾病常用的診斷及病情嚴重程度評估指標，在早期識別膿毒癥及病情評估方面具有較好的靈敏度和特異度［14］。急性期關節炎患者關節腔積液內存在中性粒細胞和HBP［15］，HBP水平升高可能與其介導的炎癥反應有關［16］。

本研究比較了115例活動期RA患者、110例緩解期RA患者、60例健康對照組的HBP水平，結果顯示活動期RA患者HBP水平顯著高于緩解期RA患者和健康對照組，提示RA作為一種自身免疫性炎癥，其活動期白細胞釋放HBP增加。進一步分析表明，HBP水平隨著RA疾病活動度的升高而升高，重度患者高于中度和輕度患者，中度患者高于輕度患者。我們推測，HBP在RA活動期可能參與血管滲漏和關節水腫的進程，同時HBP在RA活動期時激活單核細胞，增加TNF-α的釋放，擴大炎癥反應，參與RA炎癥發生發展過程。因此，HBP可能是RA炎癥發生發展的重要介質。

ESR、CRP是全身炎癥反應指標。ESR可反映RA疾病活動程度，ESR加快的RA患者晨僵時間更長，癥狀更重，但ESR容易受到生理因素（年齡、性別、女性生理周期等）影響［17］。CRP由肝臟合成，作為急性時相反應蛋白可在RA活動期升高，但其特異度較低［18］。TNF-α是RA發生發展中的重要炎癥介質，其可促進軟骨損傷和骨質破壞［19］。本研究結果顯示，與緩解期RA相比，活動期RA患者血ESR、CRP、TNF-α水平均顯著升高，且隨著疾病活動度加重而增加。進一步進行相關性分析顯示，活動期RA患者血漿HBP水平與血ESR、CRP、TNF-α均呈正相關。這表明與其他炎癥指標一樣，血漿HBP也可以反映RA疾病活動狀態。進一步采用ROC曲線分析血漿HBP對RA疾病活動期的診斷價值，結果顯示，血漿HBP評估活動期和緩解期RA的敏感度為93.9%，特異度為84%，敏感度和特異度均高于血ESR、CRP。表明血漿HBP對評估RA疾病活動度具有一定價值。

綜上所述，活動期RA患者血漿HBP水平升高；血漿HBP與疾病活動度相關，對RA活動度診斷有一定價值，可能成為活動期RA的生物標志物。