外周血miR-126在呼吸道合胞病毒感染毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為支氣管哮喘中的意義

王珺 張廣超 陳丹 孫曉敏

鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 河南省兒童醫(yī)院 鄭州兒童醫(yī)院普內(nèi)一病區(qū)，鄭州 450000

毛細(xì)支氣管炎是一種發(fā)生于嬰幼兒時(shí)期的下呼吸道感染性疾病，引發(fā)毛細(xì)支氣管炎最主要的病原體是呼吸道合胞病毒（RSV）［1］。RSV感染后，患兒容易出現(xiàn)呼吸急促、咳嗽、氣喘等癥狀，反復(fù)發(fā)作后可能進(jìn)展為支氣管哮喘［2-3］。哮喘主要是由嗜酸性粒細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、炎性因子等多種細(xì)胞參與呼吸道變態(tài)反應(yīng)炎性疾?。?-5］。研究發(fā)現(xiàn)，早期RSV反復(fù)感染與哮喘發(fā)作及惡化之間存在相關(guān)性，是非特應(yīng)性哮喘的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素［6］，因此，早期及時(shí)干預(yù)治療有助于改善患兒預(yù)后。目前，臨床尚未有特異性評(píng)估RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)展為支氣管哮喘的有效指標(biāo)。有研究顯示，miR-126與多種炎癥疾病的發(fā)生發(fā)展相關(guān)，且在支氣管哮喘患兒外周血中的表達(dá)增加，并隨著病情的加重而逐漸升高［7］。因此推測(cè)，miR-126是否與RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為哮喘的病理過程相關(guān)。但目前關(guān)于miR-126與RSV毛細(xì)支氣管炎及支氣管哮喘的關(guān)系尚未見相關(guān)研究結(jié)論。本研究旨在探討miR-126在RSV毛細(xì)支氣管炎患兒中的表達(dá)及對(duì)進(jìn)展為支氣管哮喘風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估價(jià)值。

資料與方法

1.一般及臨床資料

收集2018年6月至2019年6月河南省兒童醫(yī)院收治的RSV毛細(xì)支氣管炎患兒共126例。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》［8］中關(guān)于毛細(xì)支氣管炎的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）0～2周歲；（3）首次感染和發(fā)病。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料不完整；（2）伴有其他免疫缺陷疾?。唬?）合并有其他病原菌感染。對(duì)所有RSV毛細(xì)支氣管炎患兒進(jìn)行2年隨訪，按照《支氣管哮喘防治指南》［9］中支氣管哮喘的診斷標(biāo)準(zhǔn)，將所隨訪的RSV毛細(xì)支氣管炎患兒分為非哮喘組94例和哮喘組32例。本研究經(jīng)鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并經(jīng)患兒家屬同意。

2.觀察指標(biāo)

統(tǒng)計(jì)患兒一般及臨床資料包含：年齡、性別、是否接觸過敏原、家族過敏史、父母吸煙史、入院時(shí)氧飽和度、呼吸頻率等，并參照Gentile等［10］對(duì)RSV毛細(xì)支氣管炎患兒入院時(shí)的病情進(jìn)行評(píng)分，評(píng)分越高病情越嚴(yán)重。

入組時(shí)采集所有患兒指腹血5 ml，其中3 ml抗凝采集后送檢驗(yàn)科采用全自動(dòng)細(xì)胞生化分析儀進(jìn)行血常規(guī)分析，統(tǒng)計(jì)其中的白細(xì)胞（WBC）、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)及比例；另2 ml血液樣品置于非抗凝管中靜止2 h，3 000 r/min離心30 min（離心半徑13.5 cm），取上清，采用放射免疫法檢測(cè)血清中C反應(yīng)蛋白（CRP）的含量，采用RT-PCR法檢測(cè)miR-126的相對(duì)表達(dá)量。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用比例（%）表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料符合正態(tài)分布，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；受試者工作特征曲線（ROC）分析miR-126對(duì)RSV毛細(xì)支氣管炎患兒的診斷以及預(yù)測(cè)其發(fā)展為支氣管哮喘的作用價(jià)值；多因素logistic回歸分析RSV毛細(xì)支氣管炎患兒進(jìn)展為支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.外周血miR-126與RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)展為哮喘的關(guān)系

對(duì)126例RSV毛細(xì)支氣管炎患兒進(jìn)行隨訪，其中32例患兒發(fā)展成為支氣管哮喘，約占總患兒的25.4%。非哮喘組與哮喘組一般及臨床資料比較如表1所示，從表中可以看出，兩組在接觸過敏原、臨床評(píng)分和miR-126指標(biāo)上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），且哮喘組miR-126的水平顯著高于非哮喘組（P＜0.001）。

表1 是否進(jìn)展為哮喘的RSV毛細(xì)支氣管炎患兒的一般及臨床資料的比較

2.外周血miR-126的ROC分析

以是否進(jìn)展為支氣管哮喘為因變量，以miR-126水平為自變量進(jìn)行ROC分析，結(jié)果顯示，外周血miR-126預(yù)測(cè)RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為哮喘的曲線下面積為0.691，靈敏度為88.30%，特異度為59.38%，最佳截?cái)嘀禐?.78，見圖1。

圖1 miR-126預(yù)測(cè)126例RSV毛細(xì)支氣管炎患兒進(jìn)展為哮喘的ROC分析

3.RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)展為哮喘的logistic回歸分析

為排除混雜因素的干擾，對(duì)非哮喘組與哮喘組間P＜0.1的指標(biāo)（年齡、接觸過敏原、臨床評(píng)分和miR-126）進(jìn)行多因素logistic回歸分析。其中，定義年齡＜6歲、未接觸過敏原、臨床評(píng)分（1～2分）、miR-126 ＜7.78為0，年齡≥6歲、接觸過敏原、臨床評(píng)分（3～4分）、miR-126 ≥7.78為1。表2結(jié)果顯示，臨床評(píng)分和miR-126水平較高是RSV毛細(xì)支氣管炎發(fā)展為哮喘的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（均P＜0.05）。

表2 126例RSV毛細(xì)支氣管炎患兒進(jìn)展為哮喘危險(xiǎn)因素的logistic回歸分析

討論

毛細(xì)支氣管炎多是由病毒感染引起的急性下呼吸道感染性疾病，RSV是其主要病原體［11］。RSV毛細(xì)支氣管炎是嬰幼兒中最常見的一種下呼吸道感染性疾病，部分患兒未經(jīng)及時(shí)干預(yù)有進(jìn)展為支氣管哮喘的風(fēng)險(xiǎn)。Jartti等［12］研究發(fā)現(xiàn)RSV是支氣管哮喘發(fā)作的重要誘因，抗RSV單克隆抗體可降低嚴(yán)重性RSV感染疾病及支氣管哮喘發(fā)生的可能。有研究對(duì)RSV毛細(xì)支氣管炎嬰幼兒隨訪5年后，發(fā)現(xiàn)48%的患兒診斷為支氣管哮喘，提示嬰幼兒階段RSV毛細(xì)支氣管炎是兒童支氣管哮喘發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，并且具有較高的哮喘發(fā)病率［13］。但目前RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為支氣管哮喘的分子調(diào)控機(jī)制尚不明確，多項(xiàng)研究認(rèn)為RSV毛細(xì)支氣管炎與哮喘的病理機(jī)制都涉及了炎性反應(yīng)和變態(tài)免疫調(diào)控，且具有多個(gè)相同指標(biāo)的改變［14-16］，推測(cè)炎癥相關(guān)指標(biāo)可能在這一過程中發(fā)揮重要作用。

miR-126是一個(gè)高度保守的miRNA，多項(xiàng)研究報(bào)道m(xù)iR-126參與多種炎癥和免疫應(yīng)答反應(yīng)，其在腸炎、肺炎支原體肺炎等感染性疾病患者中的表達(dá)均顯著增加［17-18］。有研究顯示，在哮喘大鼠及小鼠模型中，miR-126的表達(dá)均顯著高于對(duì)照組，且通過調(diào)節(jié)白細(xì)胞介素（IL）-6及Th2等細(xì)胞炎性因子參與免疫應(yīng)答反應(yīng)［19-20］。此外，有文獻(xiàn)報(bào)道，在支氣管哮喘患兒中，miR-126表達(dá)增加，并通過調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞亞群型及Th2細(xì)胞因子水平參與支氣管哮喘的進(jìn)展［21］。鄔超等［22］采用熒光定量PCR法檢測(cè)了哮喘患者的miR-126水平，發(fā)現(xiàn)隨著患者哮喘程度越嚴(yán)重，血漿中miR-126的表達(dá)水平越高。吳挺實(shí)［7］也研究發(fā)現(xiàn)外周血miR-126水平可能是評(píng)估支氣管哮喘患兒嚴(yán)重程度的重要參考指標(biāo)。但目前關(guān)于miR-126與毛細(xì)支氣管炎及進(jìn)展為哮喘的相關(guān)性尚未見相關(guān)研究。本研究結(jié)果顯示，毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為哮喘組患兒的miR-126水平明顯高于非哮喘組，提示該指標(biāo)可能對(duì)RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為支氣管哮喘有一定的預(yù)測(cè)作用，與現(xiàn)有研究結(jié)論一致。多因素logistic回歸分析結(jié)果顯示，miR-126是RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為支氣管哮喘的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且預(yù)測(cè)靈敏度達(dá)88.30%。推測(cè)miR-126由于參與炎癥和免疫反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展，因此介導(dǎo)RSV感染后向支氣管哮喘進(jìn)展的病理過程，但其深層次機(jī)制仍需進(jìn)一步研究才能明確。

綜上所述，本研究認(rèn)為，miR-126水平升高可能是RSV毛細(xì)支氣管炎進(jìn)展為支氣管哮喘的危險(xiǎn)因素，可作為臨床評(píng)估RSV毛細(xì)支氣管炎患兒預(yù)后的參考指標(biāo)。