消化道不同部位印戒細胞癌中的SATB2、CDX2表達水平及臨床意義

楊娟，劉春梅，趙路

1.漯河市中心醫院(漯河醫學高等專科學校第一附屬醫院)病理科，河南 漯河 462000；2.漯河醫學高等專科學校第二附屬醫院病理科，河南 漯河 462000

消化道印戒細胞癌(signet ring cell carcinoma，SRCC)屬于臨床一種常見的惡性腫瘤，其早期臨床表現和胃腸鏡表現均無特異性，確診時多數患者已進展至中晚期，錯失最佳治療時機，預后欠佳。因此對于消化道SRCC 患者早診斷、早治療至關重要。核基質結合蛋白質2(special AT-rich sequence-binding protein 2，SATB2)為近幾年發現的能與核基質結合的特異性結合轉錄因子，報道顯示，SATB2于結直腸癌、口腔癌及乳腺癌等多個腫瘤細胞中的表達水平較高[1-2]。尾型同源異型框轉錄因子-2(caudal type homeobox transcription factor-2，CDX2)為果蠅尾部有關同源基因的家族成員之一，為機體腸道內特異性表達的一種核轉錄因子，于腸黏膜上皮細胞發育和保持形態、結構中具有重要作用，在直腸腫瘤的發生過程中發揮抑癌基因的效果，與腫瘤生物學特性和預后具有緊密聯系[3-4]。本研究將探討SATB2、CDX2 在消化道SRCC 中的表達水平及其與TNM 分期和浸潤深度的關系。

由Lagrange定理，當f(a)=f(b)時，有f′(ξ)=0，就是Rolle定理。這段微視頻的目標明確，主要復習Rolle定理，介紹Lagrange中值定理，進而說明兩個定理之間的聯系，為了清晰明了地講解這個定理，要十分明確清晰地設計活動，設計資源，設計內容，都是圍繞Lagrange中值定理這一知識點而開展的，激發學生學習高等數學的興趣，刺激學生探究問題的心理，幫助學生發現數學問題。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經漯河市中心醫院醫學倫理委員會批準，收集2008 年3 月1 日至2019 年1 月31 日漯河市中心醫院收治的265例消化道手術切除SRCC標本。(1)納入標準：經過病理組織活檢確診為消化道SRCC；性別不限；年齡≥18 歲；均簽署知情同意書。(2)排除標準：非消化道的SRCC；伴有認知障礙或者精神障礙者；伴有其他惡性腫瘤者；有放化療治療史者。根據SRCC發生部位不同分為上消化道SRCC患者178例(上消化道組)和下消化道SRCC患者87例(下消化道組)，兩組患者的基線資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

表1 兩組患者的基線資料比較[例(%)]Table 1 Comparison of basic data between the two groups[n(%)]

1.2 方法

1.2.1 SATB2和CDX2表達水平檢測 采用免疫組化EnVision檢測法檢測，68℃下烤片20 min，常規進行二甲苯脫蠟、系列梯度酒精脫水，然后將切片浸泡于水中進行保存；37℃下經濃度為3%的雙氧水浸泡切面約10 min，降低內源性過氧化酶的活性；采用磷酸鹽緩沖液(PBS)進行清洗3 次，轉移到0.01 mmol/L枸櫞酸緩沖液內煮沸約15 min，自然冷卻至室溫，進行抗原修復；每張切片滴入50 μL 一抗，于4℃下孵育過夜，后經PBS 沖洗，每張切片滴50 μL 的EnVsision試劑，于室溫下孵育0.5 h；PBS 沖洗，經DAB 顯色，采用蘇木精襯染，經二甲苯透明之后用中性膠予以封片。

2.2 消化道不同部位SRCC 患者的SATB2、CDX2 陽性率比較 上消化道組患者中的SATB2、CDX2 陽性率明顯低于下消化道組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

1.2 納入標準 ①因分泌性中耳炎行鼓膜穿刺抽液次數或置管≥1次；②穿刺或置管后分泌性中耳炎復發，保守及藥物治療3個月以上不緩解，半年內急性分泌性中耳炎復發超過3次；③耳鏡檢查見鼓膜內陷，鼓室積液呈液平或渾濁，琥珀色或橙紅色；④純音聽閾提示氣骨導差值≥15 dB，≤40 dB，聲導抗“B”或“C”型。

將第三代MSCs消化后制成細胞懸液，取50萬個細胞，重懸于0.5 ml細胞培養液中。根據商品說明書加入0.5 ml JC-1染色工作液，顛倒數次混勻，細胞培養箱中37℃孵育20 min。600 g 4℃離心5 min，沉淀細胞，棄上清。以JC-1染色緩沖液洗滌2次：加入1 ml JC-1染色緩沖液重懸細胞，600 g 4℃離心5 min，棄上清。再用300 μl JC-1染色緩沖液重懸細胞后，流式細胞儀測定相對熒光強度。

2 結果

2.1 消化道不同部位SRCC患者中SATB2、CDX2陽性率比較 食管、胃SRCC 組織中的SATB2、CDX2陽性率明顯低于十二指腸、空回腸、闌尾、結腸、直腸，差異均具有統計學意義(P<0.05)，見表2和圖1。

1.3 觀察指標 (1)比較不同部位SRCC 患者中SATB2、CDX2 陽性率；(2)比較上消化道和下消化道SRCC患者中SATB2、CDX2陽性率；(3)比較不同病理學參數SRCC組織中SATB2、CDX2陽性率。

圖1 不同部位SRCC患者中SATB2、CDX2蛋白的表達Figure 1 Expression of SATB2 and CDX2 in patients with SRCC at different sites

表2 不同部位SRCC患者中SATB2、CDX2陽性率比較[例(%)]Table 2 Comparison of positive rates of SATB2 and CDX2 among patients with SRCC at different sites[n(%)]

1.2.2 結果判定 全部切片由兩名高年資病理科醫師予以雙盲法閱片。隨機選10個視野，每一視野細胞計數不低于100，于高倍鏡下觀察腫瘤細胞。根據陽性細胞所占百分比及著色的強度進行評分，標準如下：無陽性細胞為0分、陽性細胞≤10%為1分、陽性細胞11%~50%為2 分、陽性細胞>51%~75%為3 分、陽性細胞>75%為4 分；無染色為0 分、淺黃色為1 分、棕黃色為2 分、棕褐色為3 分。取兩項得分結果相加為判定標準，即≥2 分陽性、<2 分為陰性，其中0~1 分是-、2~3分是+、4~5分是++、6~7分是+++。

1.4 統計學方法 應用SPSS22.0 統計學軟件分析數據。計量資料以均數±標準差()表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數資料比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

表3 兩組患者中的SATB2、CDX2陽性率比較[例(%)]Table 3 Comparison of positive rates of SATB2 and CDX2 between the two groups[n(%)]

近幾年，流行病學調查結果指出，胃癌的總體發病率呈逐漸下降態勢，彌漫性胃癌尤其SRCC 發病率呈逐漸升高態勢，主要原因為SRCC早期診斷率較低，SRCC 發病機制與癌前病變并未闡述明確[5]。報道顯示，結直腸SRCC極易產生腹腔種植轉移、區域淋巴結轉移以及腫瘤鄰近組織廣泛浸潤，多數患者在確診時已處于晚期，此時可實施根治性手術者占50%~70%，且術后遠期療效欠佳，故早期診斷、早期治療對于改善SRCC預后具有重要意義[6]。有報道顯示，胃以及腸型免疫表型標志物有利于早期鑒別消化道(例如胃、消化道等)SRCC種類與評估預后，并對治療方案起到指導作用[7]。

表4 不同病理學參數SRCC 組織中SATB2、CDX2 陽性率比較[例(%)]Table 4 Positive rate of SATB2 and CDX2 in SRCC tissues with different pathological parameters[n(%)]

3 討論

2.3 不同病理學參數SRCC 組織中SATB2、CDX2陽性率比較 上消化道和下消化道SRCC組織中Ⅲ+Ⅳ期SATB2 和CDX2 陽性率均高于Ⅰ+Ⅱ期，T3+T4期SATB2 和CDX2 陽性率均高T1+T2期，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表4。

一般說來，一千位教師就有一千種講課設計。寬泛地說，這些同文本的個案設計都算作是同課異構。但是我們并不能說同課異構是隨心所欲地構造教學。無論怎樣創造性地開展教學，也都離不開對文本內容、文本特征和教學手段最優化的考慮。

SATB2基因處在人類2 號染色體長臂33 區，編碼SATB2蛋白為核基質結合蛋白質之一，和SATB1具備高度同源性，而SATB1 為潛在致癌基因，目前對于SATB2機理并未明確闡述[8]。有報道指出，SATB2能通過干擾染色質高級結果，實現調控目標基因表達的目的，進而對腫瘤細胞發生、發展發揮作用，且SATB2能直接性影響中樞神經系統的發育，對于腦橋、胼胝體等組織正常發育具有重要作用，在正常人體上皮組織內，SATB2僅于胃腸道組織下端黏膜上皮內表達[9]。有報道顯示，SATB2 能參與腫瘤的發生、發展，對于腫瘤進程具有一定影響。因SATB2 呈現細胞核著色，即為“全或者無”顯色方式，觀察上更為清晰，而著色強度不會隨著腫瘤分化程度而發生變化，因此，可以作為臨床的一種診斷指標[10]。本研究結果表明，食管、胃SRCC組織中的SATB2陽性率低于十二指腸、空回腸、闌尾、結腸、直腸SRCC，差異有統計學意義(P<0.05)；上消化道SRCC患者中SATB2陽性率為29.21%，低于下消化道SRCC 患者中的88.51%，差異有統計學意義(P<0.05)，說明SATB2 參與消化道SRCC 的發生、進展，且其水平變化可反映病情嚴重程度。

另外，機體中各種上皮細胞免疫組化報道顯示，自胚胎發育第8 周開始，胎兒胃腸道內便能檢測出CDX2 表達，正常生物體發育中，CDX2 屬于腸特異性轉錄因子，能調節腸上皮細胞增殖與分化以及腸表型維持，對于消化道尤其是結腸、小腸上皮發育發揮重要作用[11-12]。正常機體的上皮細胞內，CDX2在內胚層來源腸道上皮、胰腺導管與腺泡上皮內表達，但在食管、正常胃黏膜上皮內不表達，除了消化系統之外，其他系統的正常上皮無法檢測到CDX2表達[13]。本研究結果中，食管、胃SRCC組織中的CDX2陽性率低于十二指腸、空回腸、闌尾、結腸、直腸SRCC，差異有統計學意義(P<0.05)；上消化道SRCC患者中CDX2陽性率為41.01%，低于下消化道SRCC 患者中的68.97%，差異有統計學意義(P<0.05)。說明CDX2 表達可反映消化道SRCC 的發生、發展。CDX2 屬于一種腫瘤抑制基因，可能和癌基因突變以及細胞周期的調控存在關聯性[14]，加上CDX2 作為腸道特異性的表達轉錄因子之一，對于生物發育和細胞分化具備重要調節效果[15]。由此說明CDX2 表達水平可作為臨床診斷消化道SRCC的標志物之一。

此外，本研究還顯示，上消化道和下消化道SRCC組織中Ⅲ+Ⅳ期SATB2 和CDX2 陽性率均高于Ⅰ+Ⅱ期，T3+T4期SATB2 和CDX2 陽性率均高T1+T2期，差異有統計學意義(P<0.05)，說明SATB2 和CDX2 陽性表達不僅能反映消化道SRCC 的發生，還與SRCC 患者的TNM分期和浸潤深度關系密切，可反映SRCC患者進展的嚴重程度。

綜上所述，SATB2、CDX2 在不同部位的SRCC 組織中表達水平不同，尤其在下消化道SRCC中SATB2、CDX2陽性表達率更高，可用于早期診斷消化道SRCC，且對評估SRCC嚴重程度有一定臨床價值。