抑郁癥患者血清circDYM水平的變化及其與疾病嚴重程度的關系

徐沛蕾，孫喜蓉，薛慧，夏雯瑩，龔恒芬

上海市浦東新區精神衛生中心檢驗科，上海 200124

抑郁癥是一種威脅人類身心健康的重要精神疾病，也是全球殘疾的主要原因之一，其往往具有致命性[1]。重度抑郁癥患者常表現出各種關鍵功能的改變，包括睡眠、食欲、精神運動活動、認知及情緒[2]。目前抑郁癥疾病嚴重程度的評估主要依賴于對患者體征的判斷，仍缺乏客觀明確的生物學標志物，使得誤診率及漏診率較高[3]。研究顯示，環狀RNA 參與調控抑郁癥的進展，但其在抑郁癥中的臨床價值需要進一步探索[4]。circDYM是微小RNA-9的海綿，沉默微小RNA-9可抑制脂多糖誘導的海馬小膠質細胞活化，而小膠質細胞可參與各種神經病理[5]?；诖?，本研究通過檢測抑郁癥患者血清circDYM水平，分析其表達變化與抑郁癥患者病情嚴重程度的關系，為疾病評估提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年10月至2022年7月上海市浦東新區精神衛生中心收治的118例抑郁癥患者作為觀察組。納入標準：(1)診斷符合國際疾病分類第11 版中抑郁障礙的標準[6]；(2)臨床資料完整者；(3)實驗室相關檢查排除其他中樞神經系統障礙疾病。排除標準：(1)急慢性感染、免疫功能異常者；(2)因外源性藥物等導致的認知功能障礙者；(3)多器官受損者；(4)無法配合完成抑郁癥檢查者。同期選取109 例本院體檢正常、記憶力良好、無焦慮、抑郁等精神障礙的志愿者作為對照組。本研究經上海市浦東新區精神衛生中心臨床研究倫理委員會審批，所有研究對象家屬均知情并簽署知情同意書。

1.2 血清circDYM 水平檢測 采集觀察組和對照組受檢者清晨空腹5 mL外周靜脈血樣(抑郁癥患者取治療前和治療3個月后血清)，室溫放置1 h后，離心機3 500 r/min 離心處理10 min，保留上層血清保存于無菌干燥EP 管中，-80℃保存待測。按照Trizol 提取試劑盒(試劑盒購自北京百奧創新科技有限公司，貨號：EZB-TZ1)說明書提取血清總RNA，使用反轉錄試劑盒(試劑盒購自北京伊塔生物科技有限公司，貨號：YT9036)將RNA 反轉錄為cDNA，采用實時熒光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)法檢測血清circDYM 表達水平。反應體系：cDNA 模板(50 ng/μL)2 μL，上下游引物(10 μmol/L)各0.8 μL，SYBR?Green Mix 10 μL，ddH2O 6.4 μL。反應程序：95℃預熱30 s；95℃15 s，60℃15 s，72℃15 s。反應結束后收集數據，對CT值進行分析，采用2-△△CT法計算circDYM相對表達量，引物序列見表1，引物由北京華大基因公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列Table 1 qRT PCR primer sequences

1.3 抑郁程度評估 采用17 項漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Scale 17，HAMD-17)評估觀察組患者的抑郁程度，無抑郁評分≤7分，輕度抑郁評分8~16 分，中度抑郁評分17~23 分，重度抑郁評分≥24分，評分越高代表抑郁程度越高。

1.4 治療及隨訪 采用成都康弘藥業集團股份有限公司生產的鹽酸文拉法辛緩釋片(國藥準字H20070270)對觀察組患者進行治療，口服劑量為75 mg/d，連續治療3 個月后評估療效。HAMD-17 評分減分率≥75%則為治療顯效，評分減分率50%~74%則為治療好轉，評分減分率<50%則為治療無效，治療有效=治療顯效+治療好轉。

1.5 統計學方法 應用SPSS23.0 統計學軟件分析數據。計數資料比較采用χ2檢驗；計量資料檢驗后符合正態分布，以均數±標準差()表示，兩組采用獨立樣本t檢驗，三組采用單因素方差分析，進一步兩兩比較采用SNK-q 檢驗；采用Pearson 相關性分析檢驗抑郁癥患者circDYM 水平與HAMD-17 評分的相關性；采用受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)分析血清circDYM 水平對抑郁癥嚴重程度的評估價值。以P<0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組受檢者的一般資料比較 兩組受檢者的年齡、性別、BMI、吸煙史、飲酒史、受教育年限、高血壓史、糖尿病史、結婚患者比例及甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平比較差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]Table 2 Comparison of general information between two groups of subjects[,n(%)]

表2 兩組受檢者的一般資料比較[，例(%)]Table 2 Comparison of general information between two groups of subjects[,n(%)]

指標年齡(歲)男性BMI(kg/m2)吸煙史飲酒史受教育年限(年)高血壓史糖尿病史結婚TG(mmol/L)TC(mmol/L)LDL-C(mmol/L)HDL-C(mmol/L)對照組(n=109)50.84±7.85 49(44.95)22.98±1.95 42(38.53)24(22.02)13.94±3.62 48(44.04)22(20.18)74(67.89)1.06±0.38 4.62±1.01 2.20±0.32 1.24±0.30觀察組(n=118)51.02±7.93 53(44.92)22.76±1.97 45(38.14)26(22.03)14.06±3.07 52(44.07)26(22.03)78(66.10)1.10±0.37 4.68±0.95 2.28±0.45 1.20±0.36 t/χ2值0.172 0.000 0.845 0.004 0.000 0.270 0.000 0.116 0.348 0.803 0.461 1.532 0.905 P值0.864 0.995 0.399 0.951 0.998 0.787 0.996 0.733 0.555 0.423 0.645 0.127 0.366

2.2 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評分比較 觀察組患者的血清circDYM水平明顯低于對照組，HAMD-17評分明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評分比較()Table 3 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score between the two groups()

表3 兩組受檢者的血清circDYM水平及HAMD-17評分比較()Table 3 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score between the two groups()

組別對照組觀察組例數109 118 circDYM 1.02±0.23 0.47±0.14 HAMD-17評分(分)4.23±1.01 19.70±3.46 t值P值21.947 0.001 44.938 0.001

2.3 抑郁癥患者circDYM 水平與HAMD-17 評分的相關性 經Pearson相關分析結果顯示，抑郁癥患者circDYM水平與HAMD-17評分呈負相關(r=-0.734，P<0.05)，見圖1。

圖1 抑郁癥患者circDYM水平與HAMD-17評分的相關性Figure 1 Correlation between circDYM level and HAMD-17 score in patients with depression

2.4 不同嚴重程度患者血清circDYM 水平及HAMD-17 評分比較 依據HAMD-17 評估結果將觀察組患者分為輕度組45 例、中度組40 例和重度組33 例。重度組患者的血清circDYM 水平明顯低于中度組和輕度組，HAMD-17 評分明顯高于中度組和輕度組，差異均有統計學意義(P<0.05)；中度組患者的血清circDYM 水平明顯低于輕度組，HAMD-17 評分明顯高于輕度組，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表4。

表4 不同嚴重程度患者血清circDYM水平及HAMD-17評分比較()Table 4 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score in patients with different disease severity()

表4 不同嚴重程度患者血清circDYM水平及HAMD-17評分比較()Table 4 Comparison of serum circDYM level and HAMD-17 score in patients with different disease severity()

注：與輕度組比較，aP<0.05；與中度組比較，bP<0.05。Note: Compared with the mild group,aP<0.05; Compared with the moderate group,bP<0.05.

組別輕度組中度組重度組F值P值HAMD-17評分(分)12.42±3.30 20.44±2.23a 28.72±2.45ab 338.396 0.001例數45 40 33 circDYM 0.62±0.20 0.48±0.16a 0.26±0.09ab 47.092 0.001

2.5 血清circDYM 水平對抑郁癥嚴重程度的評估價值 以血清circDYM 水平為檢驗變量，以輕度組作為對照，將抑郁癥是否進展為中度作為狀態變量繪制ROC 曲線，結果顯示，circDYM 評估中度抑郁癥的AUC 為0.780(0.684~0.876)，敏感度為55.6%，特異性為90.0%，見圖2。以血清circDYM 水平為檢驗變量，以中度組作為對照，將抑郁癥是否進展為重度作為狀態變量繪制ROC 曲線，結果顯示，circDYM 評估重度抑郁癥的AUC 為0.855 (0.768~0.943)，敏感度為75.1%，特異性為90.9%，見圖3。

圖2 血清circDYM水平評估中度抑郁癥的ROCFigure 2 ROC of moderate depression assessed by serum circDYM level

圖3 血清circDYM水平評估重度抑郁癥的ROCFigure 3 ROC of severe depression evaluated by serum circDYM level

2.6 治療有效和無效抑郁癥患者的血清circDYM水平比較 治療無效抑郁癥患者的血清circDYM 水平為0.35±0.09，明顯低于治療有效抑郁癥患者的0.52±0.16，差異有統計學意義(t=5.895，P<0.05)。

3 討論

抑郁癥是世界上最常見的精神疾病之一，其主要特征為情緒功能障礙，目前已成為主要公共衛生問題[7-8]。重度抑郁癥由遺傳因素和環境因素等引起，其中壓力是導致抑郁癥的主要風險因素[9-10]。抑郁癥具有異質性，其個體識別率較低，僅以臨床癥狀作為抑郁癥診斷依據可能會導致漏診率增加。因此，需要進一步了解抑郁癥的詳細機制，并尋找更有效的診斷和治療靶點[11]。

circRNAs是經由初級線性轉錄物中的3'和5'剪接位點連接產生，是非編碼RNA家族成員，其特征在于環結構穩定、進化保守[12]。CircRNA 已被證明參與神經發育及可塑性、細胞生長、阿爾茨海默病等生理過程和疾病發展[13-14]。目前研究證實，circDYM 可通過一系列相關途徑減輕輕度應激小鼠的抑郁樣行為和海馬神經元損傷[15]。Zhang等[16]研究顯示，circDYM在抑郁癥患者血清及抑郁癥模型小鼠血漿和海馬中表達均下調。Song 等[17]研究表明，經顱磁刺激治療后的的重度抑郁癥患者血漿circDYM 表達上調，circDYM可作為診斷重度抑郁癥的潛在生物標志物。

本研究結果顯示，抑郁癥患者血清circDYM 低表達，且隨抑郁程度加重，circDYM 表達進一步降低，與上述研究結果中circDYM 表達趨勢基本一致，提示circDYM 低表達可能參與抑郁癥的疾病進展。既往研究顯示，小膠質細胞的功能狀態與抑郁癥的發生發展密切相關。而Yu 等[18]研究結果表明，系統性施用RNA藥物將circDYM遞送至大腦后，可減輕膠質細胞功能障礙，進而緩解小鼠抑郁樣行為?；诩韧芯客茰ycircDYM低表達加重抑郁癥的機制可能如下：抑郁癥早期，為使神經元損害降低，患者機體將啟動自我保護機制，病理狀態使血清circDYM 表達降低并負反饋調控其下游靶基因表達，進而刺激膠質細胞形成，抑郁程度越重，其保護機制越明顯，致血清circDYM下調越顯著。

HAMD-17 評分是目前常用的抑郁癥狀評估工具，17項版本常用于評估抑郁癥狀的嚴重程度[19]。而本研究結果顯示，抑郁癥患者血清circDYM 表達與HAMD17 評分呈負相關。提示HAMD-17 評分越高，circDYM 表達越低，患者抑郁程度也越嚴重，臨床可同時將血清指標circDYM 作為監測抑郁癥患者疾病嚴重程度的重要輔助指標。ROC 曲線結果表明circDYM評估重度抑郁癥的效果最為顯著，其AUC達0.855，可為臨床提供重要參考。此外，本研究治療無效抑郁癥患者血清circDYM 水平顯著低于治療有效抑郁癥患者。進一步表明檢測血清circDYM 水平有助于提前判斷抑郁癥患者預后。但由于circDYM 水平可能受其他疾病狀態的影響，后續將納入更多影響因素以排除干擾，進一步驗證circDYM的臨床價值。

綜上所述，抑郁癥患者血清circDYM 低表達，且隨著疾病嚴重程度增加而進一步降低。此外，血清circDYM 表達與HAMD-17 評分呈負相關，檢測血清circDYM 水平可為臨床評估抑郁癥患者疾病嚴重程度提供參考。然而本研究納入排除標準仍需進一步精確，以降低其他因素對本研究指標circDYM 表達的干擾；同時需采取多中心研究，納入更多樣本量驗證研究結果。