基于物相形態差異探究煎煮過程對紅花-桃仁藥對藥效物質的傳遞作用

陶春曉，葉泰瑋，李 敏，張 芳，謝 燕*

基于物相形態差異探究煎煮過程對紅花-桃仁藥對藥效物質的傳遞作用

陶春曉1，葉泰瑋1，李 敏2，張 芳3，謝 燕1*

1. 上海中醫藥大學公共健康學院，上海 201203 2. 上海中醫藥大學 專家委員會辦公室，上海 201203 3. 上海中醫藥大學創新中藥研究院，上海 201203

以紅花-桃仁藥對湯液中相態差異為基礎，探究煎煮過程對該藥對藥效物質的傳遞作用。采用超速離心和透析技術對紅花-桃仁藥對湯液進行相態拆分，使用馬爾文粒徑儀、透射電子顯微鏡對各相態的粒徑、ζ電位、微觀形態進行表征，選用氣相色譜法、紫外分光光度法、HPLC法對各相態的脂肪酸、蛋白、糖類以及紅花有效成分羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A，HSYA）、脫水紅花黃色素B（anhydrosafflor yellow B，AHSYB）的含量進行測定；拆分單煎液、分煎合并液及共煎液的相態，并比較不同藥液中同級相態的物質組成或微觀形態的差異，考察煎煮方式對相態形成的影響。紅花-桃仁藥對湯液中分離得到了1個親油型相態②和6個親水型相態①③④⑤⑥⑧；親油型相態②由棕櫚酸、棕櫚油酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、花生四烯酸、二十烷酸共8種脂肪酸組成；親水型相態粒徑在20～1000 nm，主要為混懸相態與膠體相態，糖類、蛋白是親水型相態的重要組成物質，HSYA、AHSYB主要分布于親水型相態③⑥⑧中。共煎煮可形成親油型相態，其脂肪酸組成與桃仁油相近，單煎液、分煎合并液及共煎液中親水型相態⑥⑧粒子的形態有一定差異，共煎液中相態⑥⑧粒子的粒徑均一性、穩定性最佳。物相形態是紅花-桃仁藥對藥效物質傳遞的重要形式，煎煮過程特別是共煎煮，是該藥對有效相態形成的重要步驟。

中藥藥對；紅花；桃仁；煎煮過程；相態；超速離心；透析技術；脂肪酸；蛋白；糖類；羥基紅花黃色素A；脫水紅花黃色素B；藥效物質傳遞

紅花、桃仁均為活血化瘀常用藥味，兩者配伍后入心可散血中之滯，入肝可理血中之雍，是體現“活血化瘀”治則的經典藥對[1]。臨床及實驗研究表明，紅花-桃仁藥對確在心脈瘀阻、血滯經閉等病證及相關病理模型治療中療效顯著[2-3]。湯劑是中藥復方最常見的口服劑型，以紅花-桃仁藥對為基礎的血府逐瘀湯、桃紅四物湯、補陽還五湯等均以湯劑形式用藥[4]；另有研究顯示，湯劑的藥效作用發揮與其煎煮方式密切相關[5-6]，因此，有必要研究紅花-桃仁藥對的煎煮過程，為合理闡釋其藥效作用提供支持。此外，《中國藥典》2020年版第一部收載的成方制劑中，含有紅花-桃仁藥對的制劑共有34個，其中尿塞通片、根痛平顆粒、消栓口服液等18個制劑中紅花-桃仁藥對均以共煎入藥[7]，因此，充分了解紅花-桃仁藥對湯液煎煮過程中的變化對相關中藥制劑的質量提升也具有重要意義。

物相形態是指在非外力作用下，理化性質相同的物質相互作用形成的聚集態，簡稱相態[8]。隨著超分子化學、納米生物學等新興學科在傳統中藥學研究的不斷滲入，有學者發現藥對如甘草-附子、馬錢子-甘草等在煎煮過程中會產生新的物相形態，包括沉淀相（粒徑＞10 μm）、混懸相（粒徑0.5～10 μm）、膠體相（粒徑1～100 nm）等[9-10]，由不同成分在靜電引力、氫鍵作用、親-疏水作用等弱相互 作用的誘導下從無序狀態轉變為有序的聚集態而引起[11]。另外，白虎湯、麻杏石甘湯中各相態藥效結果表明，相態中成分含量、相互作用力的變化會引起藥效活性的增強或削弱[12-13]。可見，相態可能是中藥湯劑藥效物質的重要傳遞形式，其維持與變化過程中伴隨著藥效物質的裝載、釋放和效應發揮。迄今，紅花-桃仁藥對湯液中的相態存在形式及變化未見報道，值得探究。

因此，本實驗擬通過濾過、透析、超速離心等物理分離方法對紅花-桃仁藥對共煎液進行物相形態拆分，并采用馬爾文粒徑儀（DLS）、透射電子顯微鏡（TEM）、氣相色譜-質譜（GC-MS）及高效液相色譜（HPLC）等對所獲得的相態進行粒徑、ζ電位和形態表征，成分含量分析；進一步選取組成特殊或可負載藥效物質的相態為研究對象，探究不同煎煮方式對紅花-桃仁藥對湯液相態形成的影響，以期探討煎煮過程中紅花-桃仁藥對藥效物質的傳遞規律，為中藥復方制劑前處理過程研究提供一定的實驗證據與借鑒。

1 儀器與材料

1.1 儀器

HH-4型數顯式電熱恒溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司；UV-2800型紫外-可見分光光度計，上海尤尼科儀器有限公司；Eppendorf Centrifuge 5424R型離心機，德國艾本德股份公司；SCIENTZ-12N型冷凍干燥機，寧波新芝生物科技股份有限公司；YH型電熱套，江蘇近湖鎮教學儀器廠；Optima XPN-100型超高速離心機，美國Beckman Coulter公司；Nano-ZS/ZEN-3600型粒徑儀，英國馬爾文公司；JEM-2100F型透射電子顯微鏡，日本電子株式會社；Agilent 8860/7697A型氣相色譜-質譜聯用儀（GC-MS）、Agilent 1260 II型高效液相色譜儀，美國Agilent Technologies公司；Powerware XS型酶標儀，Biotek公司。

1.2 試藥

石油醚、正丁醇、蒽酮、濃硫酸均為分析純，活性炭為試劑級，購自國藥集團化學試劑有限公司；甲醇、冰醋酸為色譜純，購于賽默飛世爾科技有限公司；BCA試劑盒，購于上海碧云天生物技術有限公司；14%三氟化硼甲醇溶液為試劑級，購于上海泰坦科技有限公司；水為超純水，由Milli-Q超純水儀系統制備。

紅花購于上海康橋中藥飲片有限公司（產地新疆，批號211011），經上海中醫藥大學中藥研究所吳立宏研究員鑒定，為菊科紅花屬植物紅花L.的干燥花；桃仁購于上海康橋中藥飲片有限公司（產地山東，批號211116），經上海中醫藥大學中藥研究所吳立宏研究員鑒定，為薔薇科植物桃(L.) Batsch的干燥成熟種子。羥基紅花黃色素A（hydroxysafflor yellow A，HSYA）對照品購自阿拉丁試劑（上海）有限公司，批號20191109，質量分數98.8%；無水葡萄糖對照品購自成都樂美天醫藥科技有限公司，批號DSTDW000501，質量分數98.0%；脫水紅花黃色素B（anhydrosafflor yellow B，AHSYB）對照品購自上海詩丹德標準技術服務有限公司，批號184840-84-4，質量分數95.0%。

2 方法與結果

2.1 紅花-桃仁藥對共煎液的物相形態考察

2.1.1 紅花-桃仁藥對共煎液的相態分離 稱取紅花、桃仁（搗碎）藥材各50 g，加20倍量水浸泡30 min，加熱至微沸并保持1 h，趁熱過七號篩濾除藥渣，如此煎煮2次，合并藥液得共煎液。共煎液4 ℃靜置過夜，4000×離心10 min，得到相態①和上層液。相態①用少量水混懸收集，上層液于分液漏斗中靜置分層后，上層加入水飽和正丁醇振搖萃取，萃取液去除有機試劑得到相態②；下層液體濃縮10倍后于相對分子質量3500的透析袋（按文獻報道方法[15]預處理）中透析至外液無色，透析外液濃縮得相態③。透析袋內樣品于100 000×、200 000×梯度超速離心90、120 min，沉淀分別為相態④、⑤，200 000×離心后上清液為相態⑥，流程見圖1。取部分相態①③④⑤⑥留作形態鑒定樣品，其余凍干后儲存于?20 ℃。

圖1 紅花-桃仁藥對共煎液物相形態拆分流程

2.1.2 紅花-桃仁藥對共煎液物相形態的鑒定與表征 經觀察，相態②為可溶于石油醚的黃色黏稠狀液體，而相態①③～⑥為具有較明顯丁達爾效應的親水性液體，故分為親油型相態與親水型相態兩類進行表征。

（1）親水型相態中粒子粒徑分布、ζ電位及微觀形態表征：分別吸取適量相態①③～⑥溶液，以超純水稀釋10倍后，采用馬爾文粒徑儀測定各樣品的粒徑、ζ電位；同時將樣品滴至銅網支持膜上，陰干后于TEM下觀察粒子形態，結果如圖2所示。

DLS結果顯示，相態①④所含粒子從微米級至納米級均有分布，平均粒徑在2600 nm左右，ζ電位約為?10 mV且呈現多峰狀；相態③粒徑偏小，在納米級別（70～200 nm），ζ電位約為?30 mV；而相態⑤⑥粒徑主要集中在250 nm左右，ζ電位為?30 mV且呈現單峰。TEM結果顯示，相態①中粒子由大小不一且不規則的白色、黑色粒子組成；相態③中粒子為黑色球狀顆粒；相態④為白色類球狀粒子；相態⑤中粒子也為白色球狀，但粒徑遠小于相態④；相態⑥所含粒子呈黑色圓球狀，且粒子內可見網狀結構。值得注意的是，相態⑤⑥中單個粒子聚集成團，因此DLS測得粒徑偏大，但相態⑤⑥實際粒徑與相態③相近。綜上，親水型相態總體粒徑在20～1000 nm，表明其主要由混懸相態和膠體相態組成，其中相態①④包含有膠體相態和混懸相態；相態③⑤⑥粒徑偏小，為膠體相態。

圖2 共煎液中親水型相態的微觀形態、粒徑分布及ζ電位

（2）親油型相態GC-MS定性分析：參照文獻方法[14]及GB 5009.168-2016的方法，測定相態②中脂肪酸組成。

色譜條件：氣相色譜柱為VF-WAXMS毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），載氣為氦氣；體積流量1 mL/min；進樣口溫度150 ℃；分流比10∶1，升溫程序及柱溫如下：150 ℃（20 ℃/min）→220 ℃（3 ℃/min）→250 ℃，保持5 min，進樣量0.3 μL。

質譜條件：電子轟擊源EI；離子源溫度為230 ℃；四級桿溫度為150 ℃；掃描質量范圍/45～600，溶劑延遲為3 min。

樣品溶液的制備：稱取適量相態②于圓底燒瓶中，加入100倍量的0.5 mol/L氫氧化鈉甲醇溶液，60 ℃恒溫水浴30 min，冷卻后加入14%三氟化硼甲醇溶液，60 ℃恒溫水浴15 min，冷卻后，加入適量正己烷，振搖后加入等量飽和氯化鈉溶液，靜置，取正己烷層，加入過量無水硫酸鈉，混勻并離心 （10 000×，10 min），上清液進樣檢測即可。

所得GC-MS總離子流色譜圖見圖3。由色譜圖可知，各成分已達到基本分離，滿足后續定性分析的要求。調用NIST化合物譜庫，解析總離子流圖，共得到9個成分，其中脂肪酸類成分8個，分別為棕櫚酸、棕櫚油酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、花生四烯酸、二十烷酸；苯甲醛衍生物或烷類1個。采用峰面積歸一化法計算其相對百分含量，結果顯示，相態②中脂肪酸以油酸含量最高，亞油酸、棕櫚酸含量次之，具體數據見表1，上述結果說明相態②為脂肪酸組成的油類物質。

1-棕櫚酸 2-棕櫚油酸 3-十七烷酸 4-硬脂酸 5-油酸 6-亞油酸 7-花生四烯酸 8-二十烷酸

表1 相態②脂肪酸成分的相對含量

Table 1 Relative content of fatty acid in phase ②

tR/min成分名稱分子式相對分子質量相對含量平均值/% 6.153棕櫚酸C17H34O2270.457.04 6.387棕櫚油酸C17H32O2268.430.32 7.390十七烷酸甲酯C18H36O2284.480.05 7.838硬脂酸C19H38O2298.501.39 8.141油酸C19H36O2296.4960.51 8.620亞油酸C19H34O2294.4727.07 9.938花生四烯酸甲酯C21H34O2318.490.58 10.683二十烷酸甲酯C21H42O2326.560.09 苯甲醛衍生物、烷類 0.39

2.1.3 親水型相態物質組成分析及成分分布考察 糖類、蛋白類物質在湯液相態形成中發揮著重要作用[15]，紅花中多糖含量豐富且為主要藥效物質，桃仁中蛋白質占比達到20%～30%[16]，兩者可能會參與相態形成，故進行親水型相態中蛋白質、總糖的定量分析；同時，以紅花有效成分HSYA、AHSYB為代表考察小分子成分在親水型相態中的分布情況。

（1）相態中蛋白質、總糖含量測定：樣品溶液前處理：稱取適量相態①③～⑥凍干粉于10 mL量瓶中，平行3份，加超純水超聲溶解并定容，離心（2800×，10 min），取上清液進行蛋白質、總糖含量測定。

蛋白質含量測定：取適量相態①③～⑥溶液，平行3份，加入1%活性炭水浴脫色得樣品溶液。按照試劑盒說明書配制BCA工作液及標準曲線，吸取2 μL樣品溶液于96孔板中，超純水補足至20 μL，加入200 μL工作液，37 ℃孵育30 min后，酶標儀測定562 nm的吸光度（）值，代入標準曲線計算樣品中蛋白含量，結果見表2。

總糖含量測定：采用蒽酮-硫酸法[16]測定樣品中總糖含量。配制質量濃度為0.010～0.075 mg/mL的葡萄糖對照品溶液，按體積比4∶1將對照品溶液與0.2%蒽酮-硫酸溶液混勻，沸水浴10 min，冷卻后于波長625 nm測定值，以葡萄糖質量濃度為橫坐標、值為縱坐標繪制標準曲線。取適量相態①③～⑥溶液，平行3份，按體積比5∶1加Sevage試劑[17]除蛋白并加入1%活性炭脫色后，按上述操作反應，測定值并代入標準曲線計算樣品中總糖含量，結果見表2。

實驗結果：相態①③⑥中總糖含量較高，相態①③④中蛋白含量較高，且相態③中2種物質含量最高，相態①次之；共煎液、相態①③④⑥中總糖含量分別為蛋白的45、47、62、7、100倍。以上結果表明糖類、蛋白在煎煮過程中溶出良好，且兩者均是相態①③④的重要組成物質；相態⑥的形成僅與糖類密切相關，蛋白參與較少。

表2 共煎液及親水型相態中蛋白、總糖及有效成分含量測定(, n = 3)

（2）親水型相態中有效成分含量測定：參照文獻中液相色譜方法[18]，測定親水型相態中HSYA和AHSYB的含量。

色譜條件：色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為0.7%乙酸水溶液-甲醇，梯度洗脫：0～10 min，20%甲醇；10～14 min，20%～35%甲醇；14～20 min，35%～44%甲醇；20～30 min，44%～50%甲醇；后運行時間5 min；檢測波長403 nm；體積流量1 mL/min；柱溫30 ℃；進樣量10 μL。

對照品溶液的配制：分別取HSYA、AHSYB對照品適量，加25%甲醇制成質量濃度為51.8、88.0 μg/mL的HSYA和AHSYB對照品溶液。

樣品溶液配制：稱取適量相態①③～⑥凍干粉于5 mL量瓶中，平行3份，加超純水超聲溶解并定容，10 000×離心10 min，取上清液進樣檢測并計算各樣品HSYA、AHSYB的含量，結果見表2。由表2可知，紅花-桃仁共煎液中HSYA含量為AHSYB的8倍。HSYA和AHSYB主要存在于相態①③⑥，其在相態③中的含量分別為共煎液總量的68%和42%，相態①中分別為共煎液總量的3%和8%，說明在混懸、膠體相態形成過程中，共煎液中的HSYA、AHSYB在不同相態間進行了重新分布。另外，圖2顯示相態①③⑥均含有黑色納米粒，提示納米粒可能是HSYA、AHSYB的主要傳遞形式，為驗證該推論，本實驗將相態①進一步分離并考察HSYA、AHSYB在其中的分布情況。

（3）相態①分離及有效成分的分布情況考察：取相態①，加適量超純水分散后，濾過，得到濾餅為相態⑦，濾液為相態⑧，并對相態⑧進行粒徑分布、ζ電位及微觀形態表征，分離過程及表征結果見圖4。取相態①⑦⑧溶液適量，平行3份，按“2.1.3（2）”項下方法測定樣品中HSYA、AHSYB的含量，結果見表3。結果顯示，相態⑧為100～200 nm的小粒子，且相態①中超過80%的HSYA、AHSYB集中分布于相態⑧，表明相態⑧是HSYA、AHSYB的主要傳遞形式。

綜上，本實驗從紅花-桃仁共煎液中分離得到了1個親油型相態和6個親水型相態，親水型相態包括混懸相態與膠體相態；對相態進行化學組成分析發現親油型相態由8種脂肪酸組成，糖類、蛋白是親水型相態的重要組成物質，小分子有效成分HSYA、AHSYB主要分布于親水型相態③⑥⑧中。以上結果表明，紅花、桃仁中脂肪酸、糖類和蛋白等物質按不同比例相互作用形成了多種相態，其中相態③⑥⑧是紅花有效成分HSYA、AHSYB在湯液中的重要傳遞形式。

2.2 不同煎煮方式對紅花-桃仁藥對物相形態的影響

據報道，中藥復方經單煎、分煎合并、共煎提取所得湯液中的成分種類、含量及理化性質均存在差異[5]，提示煎煮方式對相態的形成具有一定影響。本實驗以親油型相態②、親水型相態⑥⑧為研究對象，通過考察紅花-桃仁藥對單煎、分煎合并及共煎湯液的相態差異，探究煎煮方式對紅花-桃仁藥對湯液相態形成的影響。

2.2.1 樣品制備

（1）紅花、桃仁單煎液和分煎合并液中相態的分離：分別稱取50 g紅花、桃仁（搗碎），加20倍量水浸泡30 min，加熱回流至微沸并保持1 h，趁熱濾除藥渣，各煎煮2次后合并藥液，得2味藥材的單煎液。所得單煎液冷卻后將其等量混合，得紅花桃仁分煎合并液。按“2.1.1”項下分離方法將單煎液、分煎合并液分離得到各相態。

圖4 相態①的分離及相態⑧的形貌表征

表3 相態①⑦⑧有效成分含量(, n = 3)

相態分離過程中發現，單煎液、分煎合并液均未得到相態②。表1結果顯示，相態②為油類物質，且桃仁含有30%～60%的油類物質，故以桃仁油為對照，考察煎煮過程對相態②形成的影響。

（2）桃仁油提取：采用石油醚提取法[14]提取桃仁油：稱取搗碎后過一號篩的桃仁粉適量，置于索氏提取器中，按料液比1∶15加入石油醚，加熱回流一定時間，濾過并脫除溶劑，即得黃色清亮的桃仁油。

2.2.2 桃仁油與共煎液相態②成分比較 將桃仁油與相態②按“2.1.2（2）”項下方法處理并檢測，所得總離子流圖如圖5所示。結果表明，桃仁油含有棕櫚酸、棕櫚油酸、十七烷酸、硬脂酸、油酸、亞油酸共6個脂肪酸成分，3個苯甲醛衍生物和1個烷類。與相態②進行對比可知，兩者脂肪酸組成相近，但相態②中存在少量花生四烯酸及二十烷酸，這可能與紅花中花生酸、二十烷烯酸的溶出[19]有關。該結果說明共煎促進桃仁、紅花中油類成分分離，并與其他結構物質相互作用，形成穩定存在于湯液中的相態②。

1-棕櫚酸 2-棕櫚油酸 3-十七烷酸 4-硬脂酸 5-油酸 6-亞油酸 7-花生四烯酸 8-二十烷酸

2.2.3 相態⑥的差異分析 按“2.1.2（1）”項測定紅花-桃仁單煎、分煎合并液、共煎液中相態⑥的粒徑、ζ電位及粒子形態，結果如圖6所示。共煎液相態⑥為粒徑分布均勻（平均粒徑約150 nm）、大小相近的類球形粒子；與之相比，桃仁、紅花單煎液相態⑥的平均粒徑較大，分別在360、440 nm左右，粒徑分布范圍也更廣，且形貌均為大小不一的球形粒子；分煎合并液相態⑥也與共煎液有區別，其粒徑分布近似于2種單煎液的簡單加和，平均粒徑約為317 nm，不規則小粒子和球形粒子共存于相態中。另外，與共煎液相態⑥的單峰、負ζ電位（＜?30 mV）不同，桃仁單煎液相態⑥帶正電荷（＞30 mV），紅花單煎液與分煎合并液為雙峰、負ζ電位（＞?10 mV），由于ζ電位絕對值越大則粒子穩定性越好[20]，因此共煎液與桃仁單煎液中相態⑥穩定性更佳。上述結果表明共煎所得相態⑥與單煎液、分煎合并液中相態⑥在形貌、電荷負載方面存在較大差異，且共煎液相態⑥粒子均一性、穩定性較佳，提示共煎時紅花、桃仁發生了單煎、分煎合并中不存在的物理化學變化，從而形成了與之不同的相態。

2.2.4 相態⑧的差異分析 按“2.1.2（1）”測定紅花-桃仁單煎、分煎合并液、共煎液中相態⑧的粒徑、ζ電位并觀察粒子形態，結果如圖7所示。從粒徑及形貌來看，共煎液相態⑧粒徑約為200 nm，由不規則小粒子組成，桃仁單煎液相態⑧粒徑較大（約400 nm），為具光暈的類球狀粒子；紅花單煎液相態⑧粒徑偏小（＜120 nm），為大小、形狀不一，內部含晶狀粒子的聚集物；分煎合并液粒徑分布最廣，與單煎液相態⑧相似的類球狀粒子與聚集物均有出現；分析ζ電位圖可得，各相態⑧均帶負電荷，以紅花單煎液相態⑧ζ電位絕對值最小，分煎合并液次之，桃仁單煎液與共煎液相態⑧ζ電位絕對值最大，兩者具有較好的穩定性。上述結果進一步說明紅花-桃仁藥對共煎形成相態的原理與單煎、分煎合并不同，共煎所得相態均一性及穩定性更佳。

圖6 單煎液、分煎合并液和共煎液中相態⑥的微觀形態、粒徑分布及ζ電位

圖7 單煎液、分煎合并液和共煎液相態⑧的微觀形態、粒徑分布及ζ電位

總之，紅花-桃仁藥對共煎液與單煎液、分煎合并液在相態的種類、微觀形態等方面存在明顯差異，親油型相態僅見于共煎液，又以共煎所得親水型相態的粒子粒徑均一性、穩定性最優，此類相態或在湯液藥效物質傳遞過程中發揮重要作用，因此，共煎是紅花-桃仁藥對湯液相態生成的重要步驟。

3 討論

中藥湯液屬于多相態體系，現有研究多以相態系統中的微粒粒徑為參考指標進行中藥湯液的相態分離，常用的分離方法有離心法、透析法、場流分離法、過濾法和凝膠色譜法等[21]。本實驗以微粒溶解性和粒徑為指標，結合離心法、透析法和過濾法從紅花-桃仁藥對共煎液中分離得到了1種親油型相態和6種親水型相態，使用該方法得到的相態種類更為全面，且操作簡單、高效。

進一步地，采用GC-MS法進行親油型相態成分分析發現，其組成與桃仁油相近，推測兩藥共煎過程中桃仁油在多糖、皂苷等具有良好界面吸附能力的物質[22]作用下乳化，并作為疏水性成分的傳遞形式穩定存在于湯液中；HPLC和紫外光譜法測定結果顯示，3種親水型相態中糖類、蛋白及小分子活性成分HSYA、AHSYB的含量較高，可能是紅花多糖、桃仁蛋白發生美拉德反應或自組裝形成膠束或納米粒[15]后裝載小分子活性成分，從而成為湯液中藥效物質的主要傳遞形式。

已有研究表明，藥對配伍共煎時原有化學成分會發生取代、氧化還原、異構化等多種反應，從而生成新的化合物或使原有化合物消失[23]。而本實驗研究發現，紅花-桃仁藥對共煎形成了單煎、分煎合并液中不存在的親油型相態，且共煎液中親水型相態的粒子形貌也不同于單煎、分煎合并液，提示湯液相態的形成可能與藥對中物質成分在共煎時發生的化學反應相關。除共煎、單煎和分煎合并等煎煮方式外，煎煮容器、煎煮時間、煎煮用水量和浸泡處置等亦會影響中藥湯劑的藥效發揮[24]；考察上述因素對湯液相態形成的影響，是中藥湯液相態研究的重要補充，將有助于充分闡釋中藥復方煎煮這一傳統中藥制藥方式的科學內涵，促進中藥復方煎煮工序的理論化、規范化。

綜上，本實驗拆分了紅花-桃仁藥對湯液中的親油型及親水型相態，對所得相態進行微觀形貌和物質組成分析，并發現共煎是該藥對湯液相態形成的重要工序，為中藥復方制藥工藝合理性研究提供了新的思路。紅花-桃仁藥對相態形成過程中物質成分的相互作用機制，以及相態中藥效成分的溶出、吸收方式及量效關系等問題尚需進一步探究。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Exploration of delivering effects of decocting process on pharmacodynamic substances of-herb pair based on variation of phase states

TAO Chun-xiao1, YE Tai-wei1, LI Min2, ZHANG Fang3, XIE Yan1

1. School of Public Health, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 2. The Office of Experts Committee, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China 3. Innovative Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China

To explore the delivering effects of decocting process on the pharmacodynamic substances in-herb pair based on the phase state differences.The phase states of the co-decoction were separated using ultracentrifugation and dialysis, and the particle size, ζ potential, and microscopic morphology of each phase state were characterized by Zetasizer Nano ZS instrument and transmission electron microscope. The content of fatty acids, proteins, saccharine, hydroxysafflor yellow A (HSYA) and anhydrosafflor yellow B (AHSYB) were determined by gas chromatography, UV spectrophotometry and HPLC. The effects of decoction modes on phase states formation were investigated by splitting the phase states in single-, merged- and co-decoction and then comparing the composition or microscopic forms of phase states in different decoctions.One oleophilic phase state ② and six hydrophilic phase states including ①, ③, ④, ⑤, ⑥, and ⑧were isolated from-herb pair decoction; The oleophilic phase state consisted of eight fatty acids including palmitic acid, palmitoleic acid, margaric acid, stearic acid, oleic acid , linoleic acid, arachidonic acid, and arachidic acid and the hydrophilic phases were mainly miscible or colloidal phase states with the particle size ranging from 20 to 1000 nm. Both saccharine and proteins are important constituents of the hydrophilic phases, and HSYA, AHSYB are predominantly distributed in the hydrophilic phases ③, ⑥ and ⑧. Co-decocting can form oleophilic phase state, whose fatty acid composition is similar to that of peach kernel oil. The microscopic morphology of hydrophilic phases ⑥ and ⑧ in single-, merged- and co-decoction are slightly different, and phases ⑥ and ⑧ in co-decoction present the good particle size uniformity and stability.The phase state is an important form for delivering the pharmacodynamic substances in-herb pair, and the decocting process, especially the co-decocting, is the essential procedure for the formation of the effective phase states of this herb pair.

herb pairs;;; decocting process; phase state; ultracentrifugation; microdialysis technique; fatty acids; proteins; saccharine; hydroxysafflor yellow A; anhydrosafflor yellow B; pharmacodynamic substance delivery

R283.6

A

0253 - 2670(2023)17 - 5550 - 10

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.17.009

2023-02-21

上海市衛生健康學科帶頭人項目（2022XD026）

陶春曉（2000—），女，碩士研究生，主要從事中藥制劑新技術的研究與應用。

謝 燕（1978—），女，博士，研究員，博士生導師，主要從事中藥制劑新技術的研究與應用。Tel: (021)51322440 E-mail: rosexie_2004@163.com

[責任編輯 鄭禮勝]