鹽酸羥考酮緩釋片體外釋藥特性研究*

劉新穎，許向陽，曾令高，毛文星，鄭冬梅，高梓真△

（1. 江蘇恩華藥業股份有限公司藥物研究院·江蘇省中樞神經藥物研究重點實驗室，江蘇 徐州 221000； 2. 重慶市食品藥品檢驗檢測研究院·國家藥品監督管理局麻醉精神藥品質量監測重點實驗室，重慶 401120）

溶出是控制藥物吸收的關鍵因素，在口服固體藥物制劑的研發與質量控制中，體外溶出試驗對制劑處方篩選及工藝優化、評價質量的一致性、預測體外溶出速率與生物利用度的相關性［1-4］有指導意義。目前，口服普通制劑常選擇籃法或槳法測定溶出度，隨著制藥行業的不斷發展，復雜新型制劑大量涌現，在評估藥物制劑的體外釋放行為時面臨更多的挑戰［5］。傳統溶出度測定方法存在一些固有局限性（尤其是對緩/控釋制劑），故常用往復筒法、流通池法等［6-8］新方法作為其必要補充。往復筒溶出度測定裝置具有介質靈活（能快速、簡便地改變溶出介質組分、pH 等）、流體力學獨特（通過上下往復提供剪切力）等優勢，能更好地模擬體內生理環境，更具區分力，可更全面地考察制劑質量。目前第43 版《美國藥典》中碳酸鋰緩釋片、氟西汀遲釋膠囊、硝苯地平緩釋片等品種已采用往復筒法進行溶出度測定，《中國藥典》暫無相關方法收載品種。同時，對于體外溶出行為，除考察常規生理pH 介質的溶出外，對于緩/控釋制劑，因其含較高活性物質和不同的輔料，某些情況（食物或含酒精飲料）會導致其中的活性物質快速釋放，從而導致藥物系統暴露量發生變化，引發用藥安全問題。故需合理地選擇體外試驗方法，評估乙醇劑量傾瀉風險［9-11］。本研究中以鹽酸羥考酮緩釋片為研究對象。鹽酸羥考酮是臨床治療中重度癌痛的常用藥物，其生物利用度高，不良反應輕［12］。目前已上市的固體劑型有速釋膠囊、速釋片劑及緩釋片，與口服速釋制劑相比，緩釋制劑可減少給藥次數，提高患者的用藥依從性，減少血藥濃度的峰谷現象，減輕毒副作用，尤其適用于長期用藥患者，臨床優勢明顯［13-15］。為促進鹽酸羥考酮緩釋片仿制藥的開發，保證臨床用藥需求，本研究中建立了制劑籃法和往復筒法溶出測定方法，并進行含乙醇介質的劑量傾瀉評估，探討其體外釋藥特性，從而為后續仿制藥的工藝改進及質量控制研究提供借鑒。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XSE205 DU 型電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司，精度為0.01 mg）；LC - 20AD 型液相色譜儀（日本Shimadzu 公司）；FADT-1202 型自動取樣溶出儀（上海富科思分析儀器有限公司）；DISSO Ⅲ- 7 型往復筒溶出儀（美國Logan Instruments公司）。

1.2 試藥

鹽酸羥考酮對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為171271 - 201501，含量94.9%）；鹽酸羥考酮緩釋片（奧施康定，Purdue Pharma LP 公司，批號為WF1T4，規格為每片40 mg）；庚烷磺酸鈉、甲醇、乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB C8柱（150 mm×4.6 mm，5μm）；流動相：1.1 g/L 庚烷磺酸鈉溶液（用磷酸調pH至2.0）- 甲醇- 乙腈（750∶150∶100，V/V/V）；流速：1.5 mL/ min；檢測波長：230 nm；柱溫：45 ℃；進樣量：50μL。

2.2 溶液制備

溶出介質：根據人體內吸收部位的pH 環境（胃腸液pH 為1.2～6.8）配制。取氯化鈉2.0 g、鹽酸7 mL，精密稱定，加水至1 000 mL，即得pH 1.2 氯化鈉鹽酸溶液；取乙酸鈉2.99 g，冰醋酸1.68 g，精密稱定，加水至1 000 mL，即得pH 4.5醋酸鹽溶液；精密量取0.2 mol/L磷酸二氫鉀溶液250 mL、0.2 mol/L氫氧化鈉溶液118 mL，加水至1 000 mL，即得pH 6.8 磷酸鹽溶液。分別記為介質1，2，3（下文順序同）。

對照品溶液：取鹽酸羥考酮對照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，制成質量濃度為1 mg/mL 的對照品貯備液；精密量取適量，用溶出介質稀釋成質量濃度為40μg/mL的對照品溶液。

2.3 方法學考察

專屬性考察：取2.2 項下介質1，2，3 及對照品溶液各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果介質1，2，3 在與對照品溶液保留時間相同處無干擾峰，表明專屬性良好。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms

線性關系考察：分別精密量取2.2項下對照品貯備液適量，用介質1，2，3稀釋制成系列對照品溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。以鹽酸羥考酮質量濃度（C，μg/mL）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程A1=45 405C1-3 677.5（r=1.000 0），A2= 45 331C2- 2 235.4（r= 1.000 0），A3= 45 863C3-2 992.1（r= 1.000 0）。結果表明，介質1，2，3 中鹽酸羥考酮質量濃度均在0.5～80μg/mL 范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液適量，按2.1項下色譜條件連續進樣測定6次，記錄峰面積。結果的RSD分別為0.28%，0.34%，0.05%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取2.2 項下對照品溶液適量，分別于室溫下放置0，8，16，24，36，48 h時按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果的RSD分別為0.09%，0.11%，0.21%（n= 6），表明對照品溶液在室溫下放置48 h內穩定性良好。

加樣回收試驗：取樣品適量，精密稱定，共9 份，分別精密加入低、中、高質量濃度的對照品溶液，制備待測溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結果平均加樣回收率分別為99.78%，99.16%，100.04%，RSD分別為1.76%，1.32%，1.18%（n=9），表明方法準確度較高。

2.4 體外溶出測定

2.4.1 籃法

照2020 年版《中國藥典（四部）》通則0931“溶出度與釋放度測定法”第一法（籃法）測定，取樣品適量，分別以3種介質各900 mL為溶出介質，轉速為100 r/min，依法操作，分別于0.5，1，2，4，6，8，10，12 h 時取樣5 mL（同時補充等溫等體積的相同釋放介質），濾過，取續濾液，作為供試品溶液；取適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，計算不同時間的累積釋放量，并繪制體外釋放量（溶出量）-pH-時間三維釋放特性圖，結果見圖2 A和圖3。

圖2 鹽酸羥考酮緩釋片不同條件下溶出曲線Fig.2 Dissolution profiles of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets under different conditions

圖3 鹽酸羥考酮緩釋片的三維釋放特性Fig.3 Three-dimensional release characteristics of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets

2.4.2 體外釋放機制及模型擬合

按2020 年版《中國藥典（四部）》指導原則9013“緩釋、控釋和遲釋制劑指導原則”規定，采用Origin 軟件，對介質1的體外釋藥曲線分別按零級釋放模型、一級釋放模型、Higuchi方程和Rigter-Peppas方程擬合［16-19］，用相關系數（R2）判斷其擬合程度，并分析擴散指數，研究釋藥規律和機制，結果見表1（其中，Q為平均累積釋放量，t為時間）。

表1 溶出曲線擬合結果Tab.1 Results of model fitting of dissolution profiles

2.4.3 往復筒法

體外溶出測定結果顯示樣品無明顯pH 依賴性，且美國食品和藥物管理局（FDA）溶出數據庫收載的溶出介質為pH 1.2 氯化鈉鹽酸溶液，故選取該溶液為代表介質進行研究。采用往復筒測定裝置，設定水浴溫度為（37 ± 0.5）℃，介質體積為250 mL，行程為10 cm，滴水時間為10 s，浸入時間均為10 s。往復頻率和篩網孔徑是影響往復筒法溶出速率的關鍵因素。其考察參數中，往復頻率分別為10，20，30 次/分，篩網規格分別為上20目、下30目，上30目、下30目，上40目、下30目。將樣品置往復筒內管中，在第1 排介質1 中往復，分別在0.5，1，2 h時取樣5 mL；2 h后，自動移至第2排，在介質3中繼續往復至實驗結束，分別于0.5，1，2，3，4，6，8 h時（已到平臺，后續不再檢測）取樣5 mL，濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

往復頻率考察：分別采用往復頻率10，20，30次/分，上、下篩網目數均設為30 目。取各時間點的溶出液測定，繪制溶出曲線。結果見圖2 B。可見，隨往復頻率加快，溶出速率逐漸增加，且均基本在6 h 時達平臺。往復頻率為10 次/ 分時部分片劑一直黏附在玻璃筒內部，影響往復狀態，而20，30 次/ 分時幾乎無上述現象發生，再考慮低往復頻率可保持方法的適度區分力，因此優選往復頻率為20次/分。

篩網規格考察：往復筒溶出度測定裝置的上篩網規格一般在20～100目（或部分品種不加），下篩網常用目數為20～40 目，本研究中選擇前述3 種上下篩網組合，溶出曲線見圖2 C。可見，隨著上篩網目數的增加，篩網孔徑減小，介質在制劑表面形成的剪切力減小，釋放速率后期有減緩趨勢，但整體區別不明顯。考慮往復筒上下運行過程中，筒內外水能快速、平穩、完全地進行交換，篩網上下目數均選擇30目。

2.5 劑量傾瀉試驗

照2020 年版《中國藥典（四部）》通則0931“溶出度與釋放度測定法”第一法（籃法）測定，取樣品適量，分別以pH 1.2 鹽酸溶液及含5%，20%，40% 乙醇的pH 1.2 鹽酸溶液（V/V）各900 mL 為釋放介質。設定溫度為（37 ± 0.5）℃，調節轉速為100 r/ min，于15，30，45，60，75，90，105，120 min 時分別取溶液5 mL（同時補充等溫、等體積的釋放介質），濾過，取續濾液2 mL，作為供試品溶液1；取適量，按2.1 項下色譜條件進樣測定，計算累積溶出度。溶出曲線見圖4。結果顯示，與pH 1.2 鹽酸溶液比較，隨著乙醇體積分數的增加，各時間點溶出量逐漸減少，表明乙醇不會導致劑量傾瀉。

圖4 含不同體積分數乙醇pH 1.2鹽酸介質中鹽酸羥考酮溶出曲線Fig.4 Dissolution profiles of Oxycodone Hydrochloride Sustained-Release Tablets in hydrochloric acid（pH 1.2）containing ethanol with different volume fractions

3 討論

預試驗中分別對比離心法和濾膜過濾法棄去不同體積濾液方式制備的對照品溶液測定結果，結果表明，棄去初濾液2 mL時，吸附達飽和，與離心方式處理的溶液峰面積基本一致，因此采用濾過方式時需棄去初濾液2 mL，取續濾液測定。

樣品在3種不同pH 介質中的體外溶出曲線結果顯示，鹽酸羥考酮累積釋放量隨時間延長逐漸增加，10 h起達溶出平臺，12 h 藥物基本溶出完全。溶出量-pH-時間三維釋放圖顯示，各pH 介質中鹽酸羥考酮的釋放量無明顯差異，表明pH 的變化對輔料的特性釋放基本無影響。

口服緩控釋制劑按其結構以及其釋藥機理，大致分為骨架型、膜控型與滲透泵型，主要釋藥原理有溶出、擴散、溶蝕、滲透泵與離子交換等。鹽酸羥考酮緩釋片的體外溶出曲線擬合結果顯示，平均累積釋放量（Q）與時間（t）呈一定關系，以一級方程為最佳擬合模型（R2最大為0.997 6）。按Ritger - Peppas 模型描述其體外溶出曲線［R2= 0.969 6，釋放參數（n）為0.47］，0.45 ＜n＜0.89，顯示其釋藥機制為藥物擴散和骨架溶蝕協同作用。

往復頻率是裝載制劑的玻璃筒在溶出杯中每分鐘往復的次數，可反映不同的流體動力學變化，且不同往復頻率對藥品的體外溶出可能有影響。《美國藥典》目前收載的品種往復筒溶出度方法的往復頻率一般規定在6～30次/分，有研究表明，往復頻率在10～20次/分時，更貼合人體生理條件［20-21］。本研究中采用往復筒溶出度裝置測定鹽酸羥考酮緩釋片溶出度，對往復頻率、篩網規格等因素進行考察，結果顯示，往復頻率（10，20，30 次/分）與溶出速率呈正相關。篩網規格在20～40 目考察范圍內，隨著上篩網目數的增加，篩網孔徑減小，溶出速率略有減緩，但差異不顯著，表明篩網孔徑在上述范圍內變化時，筒內外介質交換受影響較小。但篩網孔徑小到一定程度時，可能出現介質交換不暢情況，導致溶出速率明顯降低。結合試驗過程溶出現象及結果，最終確定往復筒溶出度裝置測定關鍵參數為，往復頻率20次/分，篩網上下目數均為30目。該方法考察樣品在酸性溶出介質中及緩沖溶出介質中的溶出情況，該過程模擬了緩釋制劑在胃腸道中不同滯留時間和pH環境變化，與籃法相比，吸水膨脹后的藥物制劑不會黏附在籃的內部，且幾乎無流體動力學死角，影響溶出結果的穩定性及準確性，該溶出方法能更真實地反映本品的釋放特性，更好地預測體內的釋藥情況，在仿制藥工藝改進方面具有一定的參考價值。

劑量傾瀉試驗結果表明，隨著介質乙醇體積分數的增加，各時間點溶出量逐漸減少，表明乙醇不會引導產生劑量傾瀉。這種現象可能與處方中的關鍵輔料聚氧乙烯在乙醇中的溶脹速率變緩有關。

綜上所述，本研究中建立了鹽酸羥考酮緩釋片溶出度測定的籃法和往復筒法，可為本品體外溶出度測定方法的選擇提供依據；對溶出曲線進行模型擬合，考察其藥物釋放動力學及釋藥機制；為工藝改進提供支持；測定在含不同體積分數乙醇鹽酸介質中的釋放曲線，對劑量傾瀉的風險進行評估，進而為本品的仿制藥開發及體內外評價提供更多參考。