濱州地區男性人乳頭瘤病毒感染基因分型研究

李鈺儒,徐 彥,孫長華△

濱州醫學院附屬醫院:1.檢驗科;2.婦產科,山東濱州 256600

人乳頭瘤病毒(HPV)是一種小型無包膜二十面體嗜上皮樣環狀DNA病毒,大小約為8 000個核苷酸堿基對,由蛋白衣殼包裹[1],大多數編碼8種蛋白質,6種位于早期區域 (E1、E2、E4、E5、E6、E7),兩種位于晚期區域 (L1、L2)[2]。基于L1基因的核苷酸序列將HPV分為α、β、γ、μ和ν 5個系統發育屬[3]。根據HPV致病性不同,分為高危型、中危型和低危型[4]。HPV流行基因型在不同人群和地域中的分布存在一定差異,了解不同地區的HPV流行特點具有重要意義。目前,對濱州地區男性HPV感染的相關研究相對較少,本研究采用實時熒光聚合酶鏈反應(PCR)技術,對濱州地區就診的男性患者HPV感染情況、基因分型情況進行研究,為本地區HPV感染的臨床防治和流行病學調查提供參考依據。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2021年5月至2022年10月在濱州醫學院附屬醫院就診的820例HPV男性受檢者為研究對象,年齡18～70歲,平均(34.45±10.27)歲。按不同年齡段分為6組,其中<20歲組47例,20～<30歲組261例,30～<40歲組314例,40～<50歲組134例,50～<60歲組49例,≥60歲組15例。

1.2儀器與試劑 PCR擴增儀為上海宏石SLAN-96P熒光定量PCR儀,HPV核酸提取和分型鑒定試劑由江蘇碩世生物科技股份有限公司提供。

1.3方法

1.3.1標本采集 臨床醫生佩戴無菌手套,用無菌棉拭子采集患者包皮、冠狀溝、尿道口或肛周等處的皮損部位脫落細胞或組織,并放入專用保存液中,標本采集后及時檢測,或2～8 ℃保存3 d內完成檢測,(-20±5)℃保存不超過12個月。標本避免反復凍融,凍融次數不能超過5次,采用冰袋低溫運輸不能超過3 d。

1.3.2檢測方法 采用實時熒光PCR技術檢測21種HPV亞型,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、26、82、73、6、11、81型。檢測過程包括試劑配制、核酸提取、PCR擴增、雜交檢測、結果分析,操作嚴格按照試劑說明書進行。

1.4統計學處理 采用SPSS25.0統計軟件進行數據處理及統計分析。計數資料以例數或百分率表示,多組間比較采用χ2檢驗或Fisher精確概率法。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1HPV各亞型分布情況 820例男性受檢者中共檢出239例陽性,陽性率為29.15%,陽性率居前5位的HPV亞型分別為HPV6、11、16、51、53型。低危型中陽性率最高的HPV亞型為HPV6、11型,分別為12.20%、5.61%;中危型中陽性率最高的HPV亞型為HPV53型,為2.07%;高危型中陽性率最高的HPV亞型為HPV16、51型,分別為4.27%、2.20%。見表1。

表1 HPV各亞型分布情況

2.2HPV感染類型分布 239例HPV陽性者中單一感染176例(21.46%),多重感染63例(7.69%),其中雙重感染35例,三重感染14例,四重感染7例,五重感染4例,六重感染3例,單一感染率明顯高于多重感染率,差異有統計學意義(P<0.05)。單一低危型99例,占41.42%,單一中危型9例,占3.77%,單一高危型68例,占28.45%;多重低危型4例,占1.67%,多重高危型7例,占2.93%,多重中危型0例,多重混合型(高-中、高-低、中-低、高-中-低)52例,占21.76%。見表2。

表2 HPV感染類型分布

2.3HPV感染年齡分布特征 在不同年齡組中,以50～<60歲年齡組男性HPV陽性率最高,陽性率為44.90%(22/49),其次為<20歲年齡組,陽性率為36.17%(17/47)。20～<30歲、30～<40歲、40～<50歲、≥60歲年齡組男性HPV陽性率分別為24.52%(64/261)、27.71%(87/314)、32.84%(44/134)、33.33%(5/15)。不同年齡組HPV陽性率比較,差異無統計學意義(χ2=10.974,P>0.05)。

3 討 論

HPV是男性和女性最常見的性傳播感染病毒,高危型HPV感染與女性宮頸、外陰、陰道癌癥,男性陰莖、肛門和口咽癌癥發生有密切關系。全世界大約88%的肛門癌與HPV感染有關,HPV16(75%～80%)和HPV18(約3.5%)是最常見的亞型[5],HPV16也是引起陰莖癌最常見的HPV亞型[4]。宮頸癌是全球女性中第四大常見癌癥,同樣是女性癌癥死亡的第四大原因[6],與HPV感染密切相關,其中HPV16和HPV18是最常見的亞型,并且HPV陽性率隨著宮頸病變嚴重程度的增加而增加[7-8]。此外,男性高危型HPV的感染在女性宮頸病變中起到一定的作用,有研究表明女性宮頸HPV感染者其男性配偶外生殖器HPV感染率偏高,男女雙方在容易引起宮頸高級別病變的亞型感染上具有較高的吻合率[9],說明男性感染HPV可能是其配偶患宮頸癌的潛在危險因素。臨床上要提高對男性HPV感染的重視,男女共同防治才能達到更好的效果。值得注意的是,在美國,與HPV相關的頭頸部癌的發病率已經超過HPV相關宮頸癌的發病率[10]。同時,研究發現HPV陽性的口咽癌患者比HPV陰性的口咽癌患者有更好的預后和治療反應,檢測口咽癌患者HPV對其預后和治療具有重要意義[11]。

持續存在的低危型HPV6、11可以導致大多數肛門生殖器疣和呼吸道乳頭瘤病。尖銳濕疣是一種良性疣狀增生,呈外生性生長,如果不及時治療,多個皮損融合可形成巨大尖銳濕疣,30%～56%的巨大尖銳濕疣可能進展為鱗狀細胞癌[12]。復發性呼吸道乳頭瘤病(RRP)是HPV通過逃逸先天和適應性免疫引起反復發作的黏膜乳頭狀瘤,預防性接種疫苗可以降低 RRP的發病率[13]。HPV異體接種主要發生在家庭成員之間[14],因此HPV感染的男性患者家族成員也應該檢測是否存在HPV感染,并及時接種疫苗。本地區陽性率最高的HPV亞型是HPV6、11型,雖然大多情況下不會導致惡性腫瘤的發生,但是也應該對感染低危型HPV的患者定期進行隨訪,警惕HPV感染持續存在而引起的相關病變,采取行之有效的辦法及時清除病毒。

本研究820例研究對象中,HPV陽性239例,總陽性率為29.15%。廣州地區就診男性HPV陽性率為30.75%[15],長春地區就診男性HPV陽性率為28.10%[16],與本研究的結果相近;鄭州地區就診男性HPV陽性率為42.91%[17],懷化地區就診男性HPV陽性率為50.67%[18],高于本研究結果。造成這些差異的原因可能與標本采集方式、病例來源,以及各地區經濟條件、生活方式、文化多樣性、教育水平、遺傳變異與HPV疫苗接種意識的不同有關。本研究共檢測20種HPV亞型,陽性率居前5位的HPV亞型分別為HPV6、11、16、51、53型,陽性率分別為12.20%、5.61%、4.27%、2.20%、2.07%,與各地區報道不完全一致[19-21]。耿見忠[19]報道貴州地區檢出率居前5位的HPV亞型分別為HPV6、11、52、16、55型,呂家慶等[20]報道海南地區常見的HPV亞型主要為HPV6、11、16、42、43型,季澤益等[21]報道杭州地區HPV陽性率較高的亞型依次為HPV6、11、52、16、81型。本研究發現不在九價疫苗范圍內的HPV51、53型在濱州地區的陽性率較高,因此,對某一地區HPV流行病學調查的深入研究可為該地區HPV預防性疫苗接種及研究提供依據。

本研究結果顯示,濱州地區239例HPV陽性感染者以單一感染為主,占73.64%,多重感染占26.36%,其中以雙重感染為主;單一感染中低危型占比高于中危型、高危型占比,多重感染中以多重混合型感染為主,多重感染呈現出復雜性特點,所以在檢測時不能只單一檢測高危型、中危型或低危型HPV,避免造成漏診。

本研究結果表明,濱州地區男性HPV陽性率在不同年齡組中比較,差異無統計學意義(P>0.05),這與于功奇等[22]報道山東地區男性HPV陽性率與年齡的關系結果基本一致,但各年齡段就診人數差異較大,20～<40歲就診人數較多,可能與此年齡段性生活活躍有關。50～<60歲人群陽性率最高,可能與該年齡段人群免疫力低下而導致HPV的易感染性增加有關。<20歲的人群HPV陽性率位居第2位,此年齡段正處于青少年,缺乏健康意識,也是宣教過程中不可忽視的人群。>60歲人群由于就診人數較少,統計結果可能存在偏倚,參考性不高,需擴大樣本量進一步研究。

綜上所述,濱州地區男性HPV感染主要以HPV6、11、16、51、53型為主,單一感染多于多重感染,單一感染以低危型感染最常見,多重感染以多重混合感染為主,年齡與患病率無關。本研究通過對濱州地區男性HPV感染流行病學的研究,為濱州地區男性HPV感染早期篩查、預防、診斷提供了重要的依據。