普通擬桿菌調控高血壓小鼠小腸上皮細胞腺苷合成的機制探究

王一梁,張安坤,何冬旭

(江南大學 食品學院,江蘇 無錫,214122)

高血壓影響機體器官功能,是心血管疾病的主要可改變因素。據調查數據顯示,我國普通人群中高血壓患病率高,且患病率隨年齡增長而穩步上升[1]。高血壓發病誘因的多樣性決定了高血壓病理生理機制的復雜性。因此,深入辨析心血管健康維護和心血管疾病危險因素、揭示相關通路與機制對開發新型降壓藥物及心血管疾病的預防和干預有重要意義。基于對高血壓機制及治療的研究基礎,科學家們提出了將腎交感神經去神經支配術作為耐受性高血壓的一種新型治療方法[2]或將質膜鈣ATPases作為治療原發性高血壓的潛在靶標[3]。不過,由于近年來腸道微生物群與疾病相關性和因果關系研究的興起[4],已有研究發現腸道內生菌群結構及其代謝物功能對于維持人體生態平衡、調節心血管健康尤為重要[5]。它們可以通過影響營養物質消化吸收、宿主微生物組和腸道細胞相關基因通路及各類第一信使代謝等方式,直接或間接地調控血管細胞及心血管系統穩態[6]。

有趣的是,長期的高鹽飲食習慣,不僅直接與腸道代謝、內環境息息相關,也是我國民眾日常生活中最多見的高血壓引發因素之一[7],因此,從高鹽飲食引發的高血壓入手,研究腸道內生菌影響心血管健康的機制,具有充分的科學合理性及可行性。在人類眾多腸道內生菌種屬中,擬桿菌屬(Bacteroides)是健康人群中最豐富的優勢菌屬。擬桿菌屬中的普通擬桿菌(Bacteroidesvulgatus)對維持宿主腸道生態系統健康有重要作用,它可以減少血管斑塊,促進血管健康[8]。腸道上皮屏障的生態失調可引起全身炎癥并破壞腸道機械傳導[6]。益生菌定殖在腸道后與腸道細胞相互影響,維護腸上皮屏障穩態,調節小腸上皮細胞代謝物分泌并入血,進而調控宿主健康[9-10],這提示我們B.vulgatus也可能促進小腸上皮細胞表達分泌某些物質而進入血液循環。由于這些代謝物在血液中是直接與血管腔接觸[11],即可直接影響血管功能,從而構成腸道內生菌影響心血管健康的機制。

因此,本研究從實驗室已經穩定造模的高鹽飲食誘導的小鼠高血壓模型入手[12],探討了小鼠腸道中B.vulgatus的穩態與高血壓進程的關聯及機制,發現了B.vulgatus菌群定殖緩解了小鼠高血壓進程[13],增加了血漿中抗高血壓物質——腺苷[14]的含量。為探索腺苷的來源,我們繼而解析了B.vulgatus定殖后,該內生菌與小腸上皮細胞的互作表達譜,以期探索B.vulgatus調控小腸上皮細胞腺苷合成的機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

8周齡C57BL/6J雄性小鼠,無特定病原體(specific pathogen free,SPF)級,上海斯萊克實驗動物有限責任公司。動物實驗的開展遵守實驗動物操作指南,實驗方案經江南大學實驗動物倫理委員會審核批準,審批編號為JN.No20220615c0201230 [290]。

1.1.2 實驗菌株

普通擬桿菌(Bacillusvulgatus),由本課題組從小鼠糞便中獲得,30%甘油重懸保存于-80 ℃冷庫中。

1.1.3 主要試劑

高鹽小鼠飼料(質量分數為8% NaCl),南京特洛菲飼料科技有限公司;腦心浸出液肉湯(brain heart infusion,BHI)培養基,青島海博生物技術有限公司;膠原酶XI(C7657),美國Sigma公司;表皮生長因子、纖維細胞生長因子,PeproTech公司;DMEM-F12培養基,美國Gibco公司;重組Anti-CD39抗體,Abcam公司;D-PBS,碧云天公司。

1.1.4 儀器設備

BP-2010A智能無創血壓劑,北京軟隆生物技術有限公司;Sorvall WX 100+離心機、Forma Steri-Cycle i250細胞培養箱,美國Thermo Scientific公司;CM1950全自動冷凍切片機,德國Leica公司;LSM880倒置激光共聚焦顯微鏡,德國Zeiss公司;Mini-PROTEANTetra垂直電泳儀、GellDoc Go全自動凝膠成像儀,美國Bio-Rad公司;SCIENTZ-48高通量組織研磨器,寧波新芝生物科技股份有限公司;BSC-1004IIA2生物安全柜,蘇州安泰空氣技術有限公司。

1.2 菌株活化和發酵液、灌胃菌懸液制備

挑取適量菌液,在BHI瓊脂平板上劃線活化2次(37 ℃厭氧培養20 h)。挑取單菌落接種于含有1 g/L半胱氨酸鹽酸鹽、2 mg/L維生素K1、10 mg/L血晶質的BHI液體培養基中,置于37 ℃的厭氧工作站進行發酵培養。取對數生長后期的發酵液,離心(4 ℃,8 000 r/min,10 min)收集菌泥,生理鹽水(質量分數為0.9% NaCl,下同)重懸得到灌胃菌液(109CFU/mL);收集上清液過0.22 μm濾膜得到發酵液。

將C57BL/6J小鼠隨機分為安慰劑對照組(A組,n=8)和B.vulgatus灌胃組(B組,n=8)。A組給予生理鹽水安慰劑灌胃(0.9% NaCl,200 μL/只);B灌胃組給予菌液灌胃(109CFU/mL,200 μL/只), 以1 mL無菌注射器打入小鼠食道內。2組灌胃期間均使用高鹽飼料飼養,灌胃時間持續4周。

1.3 小鼠血壓檢測

在無人、溫暖的環境中對小鼠血壓進行測量,避免環境問題引起小鼠血壓波動。測量前連接好傳感器,設定溫度為39 ℃,感應靈敏度為3,選擇中號鼠袋和鼠網,將小鼠固定穩妥并將加壓感應器置于鼠尾根處開始測量,記錄數據以得知灌胃進程中的血壓變化情況。

1.4 HPLC靶向檢測小鼠血漿腺苷

取小鼠全血裝入含有肝素鈉的抗凝管,上下顛倒5次,離心(4 ℃,3 000 r/min,10 min),上清液即為血漿。將上清液移至普通離心管中,-80 ℃超低溫保存。取小鼠血漿與甲醇按1∶3的體積比混合沉淀蛋白質后,離心(4 ℃,14 000 r/min,10 min),收集上清液。取上清液于真空濃縮儀中蒸發干燥2 h,以等量20%的甲醇水溶液復溶后離心(4 ℃,14 000 r/min,5 min)。取上清液于0.22 μm濾膜過濾,濾液待測。

采用HPLC進行血漿腺苷檢測,HypersilTMODS C18反相色譜柱(125 mm×4.6 mm,5 μm)梯度洗脫。流動相A:0.1%甲酸水溶液(pH 9.0);流動相B:V(甲酸)∶V(水)∶V(甲醇)=0.1∶9.9∶90(pH 9.0)。梯度洗脫程序設置如下:0～5 min:100%(A)0%(B);5～10 min:75%(A)25%(B);10～15 min:50%(A)50%(B);15～20 min:25%(A)75%(B);20～25 min:0%(A)100%(B);25～30 min保持5 min。流速1.0 mL/min。對色譜峰積分,根據標準曲線計算小鼠血漿腺苷含量變化情況。

1.5 小腸上皮細胞培養方法建立

小鼠CO2安樂死,取小腸,去掉周圍脂肪組織,放入含有細胞清洗液的小皿中。吸取細胞清洗液沖洗小腸內容物,隨后移到新的細胞清洗液的小皿中,用剪刀縱切腸道,沖洗小腸內壁至內容物被完全洗凈。將小腸剪碎至約2 mm2,轉移至含細胞清洗液的離心管中,清洗,靜置,棄上清液,重復多遍至上清液澄清。轉移組織至含有消化液的10 mL離心管中,37 ℃振蕩消化5 min,靜置,棄上清液,重復3次。在剩余組織中加入消化液,37 ℃振蕩消化10 min,靜置,轉移上清至新的10 mL離心管,室溫270×g離心5 min,棄上清液,用完全培養基重懸,重復4次。收集細胞,70 μm濾膜過濾除菌3次后270×g室溫離心5 min,棄上清液,用完全培養基重懸種于六孔板中,隨后置于細胞培養箱中培養,48 h后換液。

1.6 小腸上皮細胞轉錄組測序

分離B.vulgatus處理前后的小腸上皮細胞進行細胞轉錄組表達譜測序(美吉生物公司)。基于Illumina NovaSeqTM6000測序平臺,對所有mRNA進行測序,采用Illumina TruSeqTMRNA sample prep Kit方法進行基因文庫構建。使用統計學方法,比較2個條件或多個條件下的基因表達差異,從中找出與條件相關的特異性基因,然后進一步分析這些特異性基因的生物學意義。

1.7 免疫蛋白印跡法(Western Blot)驗證小腸上皮細胞腺苷合成關鍵基因表達

1.7.1 細胞蛋白的提取

待六孔板內的細胞密度達到90%進行細胞蛋白的提取。吸棄細胞培養基,D-PBS沖洗3次。配制細胞蛋白裂解液(RIPA∶PMSF=100∶1),每孔加入100 μL裂解液,移液槍輕輕吹打收集細胞,將收集到的細胞與裂解液轉移至1.5 mL離心管中,4 ℃層析柜旋轉裂解30 min。裂解完畢后,離心(4 ℃,12 000×g,15 min),上清液即為提取到的細胞蛋白,蛋白存于-80 ℃冰箱以備后續實驗。

1.7.2 組織蛋白的提取

取實驗小鼠小腸組織,研磨成組織勻漿,加入適量蛋白裂解液(每50～100 mg組織約加入1 mL裂解液),將組織勻漿與裂解液一同轉入10 mL離心管中,4 ℃層析柜旋轉裂解30 min,離心(4 ℃,12 000×g,15 min),上清液即為提取到的組織蛋白,蛋白存于-80 ℃冰箱以備后續實驗。

1.7.3 Western Blot實驗

配制10%分離膠加入制膠板內,異丙醇封膠,待分離膠凝固后棄去異丙醇。配制5%濃縮膠加入制膠板內,放入梳子,待膠凝固后進行后續操作。蛋白樣品中加入適量1×loading buffer,金屬浴(98 ℃,10 min)。在電泳槽內外加入1×Running,拔出梳子,加入蛋白樣品。上層濃縮膠:恒壓70 V,30 min;下層分離膠:恒壓120 V,60 min。將5.5 cm×8.5 cm的聚偏二氟乙烯(polyvinylidene difluoride,PVDF)膜在甲醇溶液中浸泡2 min后取出。將轉膜液轉移至鋁制飯盒中,將海綿、濾紙、PVDF膜依次浸泡其中。切除濃縮膠以及多余部分,組裝好轉印夾板。轉膜條件為恒流330 mA,80 min,全程水浴。轉膜結束后,將PVDF膜取出,置于5%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)封閉液中,水平搖床室溫封閉2 h。根據蛋白marker位置判斷并剪出所需條帶(CD39約75 kDa),將條帶置于一抗溶液中4 ℃孵育過夜。吸棄一抗,三乙醇胺緩沖鹽水溶液+吐溫-20(Tris buffered saline+Tween-20,TBST)清洗3次。TBST 溶液配制相應二抗,室溫孵育2 h,孵育結束后,TBST清洗3次。配制ECL顯色液(A液與B液按1∶1比例避光配制),使用全自動凝膠成像系統進行顯影,以GAPDH為內參,使用Image J軟件對其灰度值進行定量分析。

1.8 小腸上皮細胞鑒定和CD39蛋白表達免疫熒光分析

1.8.1 組織冷凍切片

小鼠CO2安樂死,取3 cm小腸浸泡于4%多聚甲醛(paraformadehyole,PFA)中固定24 h。待組織沉入管底后取出,立刻浸泡于20%蔗糖溶液中,24 h后轉移至30 %蔗糖溶液中進行梯度脫水,24 h后將組織從30%蔗糖溶液中取出,浸泡于OCT膠中24 h。用錫紙做好包埋槽,加入一半OCT膠并置于-80 ℃冰箱凝固,待包埋槽內OCT膠完全凝固,立刻將組織展平包埋其中,并用OCT膠覆蓋,放入-80 ℃冰箱凝固。隨后,使用全自動冰凍切片機,修平組織橫切面并切片。切片完成后置于60 ℃烘箱中烘片1 h,取出切片進行后續實驗。

1.8.2 組織免疫熒光

取小腸切片,PBS清洗3次,洗凈OCT膠,用組化筆圈出小腸組織,在圈內加入0.1% Triton X-100,室溫通透10 min,隨后加入5% BSA封閉液,室溫封閉30 min。加入一抗置于濕盒中4 ℃孵育過夜,實驗所用一抗CD39配制比例為1∶200。吸棄一抗,PBS清洗3次,加入熒光二抗,室溫避光孵育2 h,實驗所用二抗AF-568配置比例為1∶200。二抗孵育結束后,4′,6-二脒基-2苯基吲哚(4,6-Diamidino-2-phenylindole dihydrochloride,DAPI)室溫避光染色10 min,吸棄DAPI,PBS清洗多次。使用中性樹脂封片,蓋上蓋玻片,保證組織上沒有氣泡,避光保存,于倒置激光共聚焦顯微鏡下進行拍攝。

1.8.3 細胞鑒定和免疫熒光

將細胞爬片置于24孔板中,明膠包被過夜,細胞種在24孔板中培養至穩定,待細胞貼壁生長到約80%密度后,去除培養基,PBS清洗,加入4% PFA溶液室溫固定30 min。吸去PFA,PBS清洗多次,加入0.1% Triton X-100和5% BSA混合液,室溫通透封閉1 h。加入一抗4 ℃孵育過夜,實驗所用Anti-E-Cadherin和CD39配制比例分別為1∶250和1∶100。棄去一抗,PBS清洗多次,加入二抗,室溫避光孵育2 h,實驗所用二抗AF-488稀釋比例為1∶200。棄去二抗,PBS清洗多次,加入DAPI,室溫避光孵育10 min,DAPI稀釋比例為1∶1 000。棄去DAPI,PBS清洗多次,將細胞爬片置于共聚焦小皿中,于倒置激光共聚焦下拍攝。

1.9 數據統計與分析方法

數值表示為平均值±標準差,采用Prism 8進行統計分析和圖形繪制。顯著性標準設為P<0.05;其中*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001,****P<0.000 1。

2 結果與分析

2.1 B.vulgatus緩解小鼠高血壓進程

實驗組以B.vulgatus對小鼠灌胃28 d,菌液濃度為109CFU/mL,生理鹽水重懸,灌胃劑量為200 μL/只;對照組以生理鹽水為安慰劑對小鼠灌胃28 d。灌胃組和對照組同時飼喂高鹽飼料。在此期間,我們對小鼠血壓以智能無創血壓儀進行監測。由圖1可知,在灌胃第14天,高鹽飲食對照組小鼠出現了血壓升高,但是接受了B.vulgatus灌胃的小鼠,血壓呈現出降低趨勢,第21天與對照組呈現出顯著統計學差異。因此,結果提示B.vulgatus可以緩解小鼠高血壓進程。

a-收縮壓變化圖(0～28 d);b-舒張壓變化圖(0～28 d)

2.2 B.vulgatus增加小鼠血漿腺苷含量

前期研究中,對B.vulgatus定殖前后的高血壓小鼠進行了血漿代謝譜學分析,發現腺苷為B.vulgatus定殖前后的顯著差異代謝物。然而,該部分研究并沒有對代謝譜學、包括腺苷含量的結果進行驗證,也沒有對腺苷產生機制進行探討。由此出發,利用HPLC法,驗證了如上腺苷含量的變化,結果如圖2所示,由于血漿中含有多種核苷酸、嘌呤類物質,所以我們通過標準品比對,確定了腺苷的出峰位置。可以看到,在小鼠灌胃B.vulgatus后,小鼠血漿中的腺苷含量顯著升高。為了探究血漿中腺苷變化的來源,利用HPLC法檢測了普通擬桿菌發酵上清液中的腺苷含量,結果發現,灌胃后腺苷含量的增高不是由普通擬桿菌分泌引起的。

a-HPLC峰面積圖;b-小鼠血漿腺苷含量

2.3 小腸上皮細胞表達譜測序

小腸上皮細胞為機體腺苷產生的主要場所之一[15]。因此,我們推斷血漿中增加的腺苷有一部分可能來源于B.vulgatus與腸道細胞互作產生,并經腸道微血管入血循環[9-10]。為了深入解析小腸上皮細胞在與B.vulgatus互作的過程中,涉及哪些與腺苷合成和核苷酸代謝相關的通路,將B.vulgatus培養前后的小腸上皮細胞的mRNA進行了測序(P為對照組、K為B.vulgatus灌胃組,各n=3)。6個樣品的轉錄組分析共獲得40.44 Gb的Clean Data,各樣品Clean Data均達到 5.99 Gb以上,Q30堿基百分比在94.12%以上(圖3-a～圖3-c)。隨后,分別將各樣品的Clean Reads與小鼠參考基因組(Mus_musculus;GRCm39)進行序列比對,比對率為97.13%～97.74%,共檢測到26 066個表達基因,其中已知基因25 494個,新基因572個;表達轉錄本共86 087個,其中已知轉錄本75 333個,新轉錄本10 754個。

a-堿基含量分布;b-測序飽和度曲線;c-差異基因表達量分布分析;d-差異基因表達量火山圖分析;e-差異基因表達聚類熱圖分析;f-差異基因GO注釋分析;g-差異基因KEGG注釋分析;h-差異基因Reactome注釋分析

隨后,將B.vulgatus灌胃鼠及對照鼠小腸上皮細胞的表達譜數據進行比對,利用DESeq2軟件進行組間差異基因分析,獲得兩組間發生差異表達的基因(|log2Fold Change|>=1;P<0.05),共發現287個顯著上調基因,215個顯著下調基因(圖3-d),差異基因熱圖如圖3-e所示。

對這些基因進行GO分析。在生物過程方面,差異基因在細胞代謝、生物合成、分子應答(biological regulation,metabolic process,response to stimulus,cellular component organization or biogenesis)等方面顯著富集。在細胞成分方面,差異基因在細胞表面和細胞器中等部位(organelle, membrane)顯著富集。在分子功能方面,差異基因顯著富集于細胞結合和催化等過程(catalytic activity,binding)。更詳細的GO富集分析結果如圖3-f所示。同時,對差異基因進行了KEGG通路分析(圖3-g),發現在KEGG代謝過程中,脂肪代謝(fat metabolism)、能量代謝(energy metabolism)、輔酶(coenzyme metabolism)及維生素代謝(vitamin metabolism)等過程都顯著富集。與之對應的,在Reactome通路分析中,細胞內對蛋白質(protein)、核苷酸(ribotide)等物質的代謝通路發生了顯著改變(圖3-h)。總之,通過對上述差異基因功能富集結果提示,B.vulgatus灌胃后,小鼠小腸上皮細胞的代謝相關通路的改變為重要切入點。

2.4 小腸上皮細胞腺苷合成關鍵基因表達驗證

由于本研究主要關注腺苷的合成過程,對上述差異基因富集的核苷酸代謝、能量代謝通路中涉及的差異表達基因進行了分析。有趣的是,我們發現細胞腺苷合成中幾個關鍵基因,包括Adcy9,Prps1l3,Adarb2,Entpd1表達都發生了上調。其中,與腺苷合成直接相關的Adcy9(腺苷酸環化酶9,adenylyl cyclase 9)能夠促進細胞產生cAMP,cAMP調節Entpd1產物CD39生成,繼而促進腺苷合成[16]。為了驗證該通路,我們通過Western Blot和免疫熒光實驗分別從細胞層面(圖4-a～圖4-c)和組織層面(圖4-d～圖4-g)對通路中的最后一步——CD39的表達進行了驗證,結果發現B.vulgatus灌胃鼠的CD39表達顯著增加,提示小腸上皮細胞的腺苷合成被激活。

a-Western Blot驗證CD39在正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸上皮細胞中表達量的變化;b-正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸上皮細胞CD39平均灰度統計圖;c-小腸上皮細胞CD39的免疫熒光表達;d- Western Blot驗證CD39在正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸組織中表達量的變化;e-正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸組織CD39平均灰度統計圖;f-正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸組織CD39免疫熒光表達;g-正常、高血壓、高血壓灌菌小鼠小腸組織CD39的平均熒光強度統計圖

2.5 小腸上皮細胞腺苷合成與血漿腺苷含量相關性分析

基于HPLC檢測血漿腺苷含量及Western Blot驗證CD39表達量實驗的結果,我們對小鼠血漿腺苷含量與小腸上皮細胞CD39表達量做了皮爾遜相關性分析,血漿腺苷含量與小腸上皮細胞CD39表達量呈顯著正相關(P<0.01)(圖5)。

圖5 小腸上皮細胞腺苷合成與血漿腺苷含量相關性分析

3 結論與討論

在過去的十年里,出現了大量證據支持腸道內生菌群在調節血壓方面的作用。擬桿菌屬作為健康腸道中的優勢菌屬,對它的研究較為廣泛。YOSHIDA等[8]在報道中稱,B.vulgatus及其衍生的代謝物可以調控腸道脂多糖產生而維護血管穩態。不過,上述研究中普通擬桿菌與血壓的明確關聯和作用機制都沒有完全闡明。本研究構建了高鹽飲食誘導的高血壓小鼠模型,發現了B.vulgatus可以調節小鼠高血壓進程,證實了該過程伴隨著血漿中腺苷含量的增加和小腸上皮細胞腺苷合成通路的激活,且二者存在顯著的相關性(圖6)。

圖6 B.vulgatus調控高血壓小鼠小腸上皮細胞腺苷合成的機制

由于我們發現了B.vulgatus定殖可升高血漿腺苷的含量,且小腸為腺苷的主要合成場所之一,因此推斷血漿中增加的腺苷有一部分可能來源于B.vulgatus與腸道細胞互作,產生的腺苷隨后經腸道微血管入血循環。目前,已有研究證實腺苷合成及作用的通路較為復雜。在細胞中,腺苷可以通過ATP和AMP的去磷酸化、甲硫氨酸循環、腎上腺素刺激等通路合成[17];腺苷隨后與A1R、A2AR、A2BR和 A3R 4種腺苷受體結合[18],調節炎癥反應、血管生成等多種重要的細胞生理病理功能[14],其參與的通路也可以引起機體血管舒張從而緩解高血壓[19]。然而,尚不明晰B.vulgatus是通過怎樣的通路促進小腸上皮細胞產生腺苷的。因此,為深入解析小腸上皮細胞在與B.vulgatus互作的過程中,涉及哪些腺苷合成相關、核苷酸代謝相關的通路,將B.vulgatus培養前后的小腸上皮細胞的mRNA進行了測序,以便從中篩選到本系統中參與腺苷合成的關鍵通路,并進行后續驗證。以此,我們發現B.vulgatus顯著改變了小腸上皮細胞表達譜,影響其代謝過程,其中就包括了小腸上皮細胞上與腺苷合成相關的關鍵酶CD39[20]。這里需要指出的是,因為本研究關注的是腺苷合成通路,所以在諸多顯著變化的代謝通路中我們著重對腺苷生成相關通路進行了解析及驗證。但是,在數據分析的過程中我們還發現了諸如蛋白質、核苷酸、能量物質等代謝過程也發生了顯著改變,值得在未來研究中繼續深入探索。

需要指出的是,本研究在轉錄組學的實驗設計時,采取了高血壓小鼠小腸上皮細胞合并培養基孵育與高血壓小鼠小腸上皮細胞合并菌液孵育的組間比較方案,篩選出了一些在2組小腸上皮細胞中差異表達的基因,沒有設置正常小鼠小腸上皮細胞對照。但后期實驗驗證候選蛋白質時均設置了正常小鼠小腸上皮細胞對照數據,確保了數據的準確性和合理性。

總之,本研究揭示了B.vulgatus促進小腸上皮細胞合成腺苷的通路,闡述了B.vulgatus緩解高血壓的機制。基于小腸上皮細胞為機體腺苷產生的主要場所之一,此處生成的腺苷很有可能經腸道微血管入血循環。因此,在未來的工作中將繼續探索腺苷合成后是如何進入血液循環從而發揮作用的,對于闡明普通擬桿菌調節血管穩態的完整機制,具有重要意義。