高效液相色譜法同時測定冷飲中12 種食品添加劑

◎ 毋修遠，高海軍，張紅云，高敬銘，劉 瑩

（1.河南省食品和鹽業(yè)檢驗技術研究院，河南 鄭州 450002；2.河南省糧油飼料產(chǎn)品質量監(jiān)督檢驗中心，河南 鄭州 450002）

現(xiàn)階段，對冷飲的食品添加劑檢測需要以我國的相關標準作為檢測的依據(jù)。由于檢測成本較高，檢測方法較為煩瑣，造成檢測工作費時費力、效率低下。基于此，本文對多種常用的食品添加劑進行分析，比如納他霉素、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、咖啡因、糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜等，利用高效液相色譜法進行簡單便捷的檢測，確保得到準確度較高的信息，旨在為國家的相關標準建立提供依據(jù)，保證食品添加劑的安全，實現(xiàn)食品安全[1]。

1 實驗準備

1.1 實驗材料

在該實驗當中，用到的實驗冷飲都是超市購買所得；糖精鈉、安賽蜜、山梨酸、苯甲酸、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、檸檬黃、亮藍、脫氫乙酸、丙酸、阿斯巴甜這幾種食品添加劑都購買于北京振翔科技有限公司；磷酸二氫鉀，色譜純購買于上海麥克林生化科技有限公司；甲醇、乙腈，色譜純購買于德國默克公司。在本文當中，主要利用的是Agilent 1290 高效液相色譜儀。C18 色譜柱（Synergi Fusion-RP 00G-4424-E0 C18，4.6 mm×250 mm）主要利用美國飛諾美公司制造的儀器設備，GWB-2T 超純水器由北京普析通用儀器有限責任公司制造，ALC-110.4 分析天平來自德國賽多利斯股份公司；MS3 Basic 旋渦混合器來自廣州艾卡儀器設備有限公司；TG-19 離心機來自四川蜀科儀器有限公司。

1.2 實驗方法

（1）對標準溶液的制備。制備的時候需要將適量的標準物質放置在50 mL 的容量瓶當中，利用10%的甲醇水溶液來對其進行定容操作，在此種操作之后，可以配備成標準品的母液進行備用操作。其中，糖精鈉、安賽蜜、山梨酸、苯甲酸、脫氫乙酸、紐甜、阿斯巴甜可以配置成為1.0 g·L-1的標準儲備液；亮藍、胭脂紅、莧菜紅、日落黃、檸檬黃可以配成 0.5 g·L-1的標準儲備液；丙酸配成 5.0 g·L-1的標準儲備液。在標準工作溶液的制備過程當中，需要利用10%的甲醇溶液稀釋定容操作，之后就可以得到一個濃度的標準工作溶液[2]。

（2）處理樣品階段。將5.0 g 的樣品放置到50 mL 的帶蓋離心管當中，并加入20 mL 的水溶液，保持渦旋震蕩操作之后，對其進行加熱保持20 min。將冷飲以及果蔬冷飲放置到室溫溫度之后，分別加入2 mL 106 g·L-1的亞鐵氰化鉀溶液和 220 g·L-1的乙酸鋅溶液，利用25 mL 溶液定容，保持混合搖勻，在8 000 r·min-1的狀態(tài)下進行5 min 的離心操作之后，就可以進行清液的獲取，將其用過濾膜過濾之后等待測量。

（3）對色譜條件進行分析和研究。采用Synergi Fusion-RP 00G-4424-E0（250 mm×4.6 mm，5 μm）的C18 色譜柱，保持35 ℃的柱溫、1.0 ml的流速、10μm 的進樣量。其中，50 mmol·L-1的磷酸氫二銨用流動相A 表示，pH=3.5，甲醇用流動相B 表示，檢測器屬于二級管陣列，主要是利用梯度洗脫的方式進行操作和應用，梯度洗脫程序表如表1所示。

2 實驗結果分析

（1）色譜條件的優(yōu)化方面，在實驗的過程當中，需要利用乙酸銨溶液、磷酸二氫鉀溶液和磷酸氫二銨來完成實驗，利用磷酸氫二銨緩沖鹽體系進行目標物質的分離，出現(xiàn)的峰形最好，50 mmol·L-1的磷酸氫二銨水當中的溶液pH 數(shù)值為8.1。如果處于堿性環(huán)境下，其丙酸的峰形呈現(xiàn)過寬狀態(tài)且不尖銳，如果處于低酸性條件下，則山梨酸和脫氫乙酸不容易分開，無法滿足檢測條件。在不斷的調試和檢測之后可以發(fā)現(xiàn)，當pH 處于3.5 時，山梨酸和脫氫乙酸分開操作會更加良好，丙酸的峰形也相對良好，因此，磷酸氫二銨的流動相采用了pH=3.5[3]。利用檢測器對190-700 nm 的范圍進行全盤掃描，以此確定各個組分的吸收波長長度。在不同的組分響應以及對應的雜峰干擾因素下,可以對定量的波長進行測量確定。其中,經(jīng)過測定可以得出安賽蜜、苯甲酸以及山梨酸的定量波長為230 nm，檸檬黃的定量波長為420 nm，莧菜紅、丙酸、胭脂紅、日落黃、糖精鈉、阿斯巴甜的定量波長為214 nm，亮藍的定量波長為 630 nm。在12 種冷飲組分當中，對最大的吸收波長進行分析之后可以得出，需要對具體的出峰時間以及分離效果進行綜合化的考量，以此得出檢測波長在214 nm 的時候，組分的吸收相對良好。

（2）需要對方法的線性范圍與檢出限進行分析和研究。本文將冷飲當中的12 種食品添加劑混合標液按照上述方法進行分析研究之后，得出了最終的結果。其中，目標化合物的峰面積可以利用Y來表示，標樣的質量濃度可以用X表示，對Y和X的線性回歸模型進行建立分析之后，可以得出一個目標化合物的線性回歸方程。對12 種食品添加劑的回歸參數(shù)與檢測限（信噪比 S/N=3）進行分析之后得出，丙酸處于25.0～200.0 mg·L-1的范圍內，其他則處于5.0～40.0 mg·L-1的范圍內，且最終出現(xiàn)的目標物呈良好線性關系，其中的相關系數(shù)可以用R2來表示，其數(shù)值都超出了0.999 00，也就是其中的檢測限范圍達到了0.3～10.0 mg·kg-1。

（3）需要進行回收率與精密度試驗。實驗過程當中需要利用4 種樣品，進行3 個濃度梯度水平的添加之后對其做回收試驗操作。在操作當中，需要保持每一個添加都分為6 次平行實驗，以及2 個空白實驗來操作。經(jīng)過分析可以得出，在各組分當中呈現(xiàn)的平均回收率在81.50%～113.12%的范圍內，產(chǎn)生的相對標準差值處于0.5%～3.9%的范圍內。利用此種方式進行分析得出的精密度和回收率都處于相對良好的狀態(tài)，且測試也趨于穩(wěn)定狀態(tài)[4]。本文在對市面當中的超市冷飲進行檢測的過程當中，主要在果蔬汁飲料、碳酸飲料、乳飲料和功能飲料當中抽取了40 種冷飲進行分析。其中，存在梨酸陽性樣品有9 個，檢測的數(shù)值分別為185 mg·kg-1、144 mg·kg-1、204 mg·kg-1、118 mg·kg-1、115 mg·kg-1、200 mg·kg-1、157 mg·kg-1、150 mg·kg-1和 85 mg·kg-1；安賽蜜檢出樣品數(shù)量有8 個，含量分別為75 mg·kg-1、56 mg·kg-1、32 mg·kg-1、38 mg·kg-1、37 mg·kg-1、70 mg·kg-1、36 mg·kg-1和75 mg·kg-1；苯甲酸樣品檢測數(shù)量為4 個，檢測的含量為78 mg·kg-1、80 mg·kg-1、83 mg·kg-1和77 mg·kg-1；阿斯巴甜樣品檢測數(shù)量為2 個， 含量分別為7.6 mg·kg-1、21 mg·kg-1。

3 結語

綜上所述，對我們日常生活當中的冷飲進行硝酸鹽含量測定時，需要對其影響測量不確定度進行分析，其中可能產(chǎn)生制約的因素有配制標準曲線、標準曲線擬合和樣品重復測量。因此，在實際的測定過程當中，需要針對標準曲線、擬合標準曲線以及樣品重復測量進行分析，以此判斷最終結果的準確度和可信程度[5]。同時，在實驗的過程當中，不僅需要做好儀器和走基線的調試，確保儀器、基線處于穩(wěn)定的狀態(tài)，還需要對標準曲線、樣品、實驗步驟進行反復的核對測量，確保其處于規(guī)范的狀態(tài)，以此從多個角度做好保障工作，從而減少誤差，最大限度提高檢測的可信度。