加味星蔞承氣顆粒制備工藝及質量標準研究

任桂林 蒲清榮 趙劍 黃銳 羅群 唐定洪 李能源 楊思進

摘要：目的 研究加味星蔞承氣處方的制備工藝和質量標準，為研制成顆粒劑提供基礎。

方法 采用正交實驗法進行水提工藝研究，以出膏率及辛弗林的含量為指標，優選出最佳的水提工藝。采用薄層鑒別及高效液相色譜法對加味星蔞承氣顆粒進行質量標準研究。

結果 加味星蔞承氣處方最佳的提取工藝為：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。在此條件下，出膏率為（21.79±0.94）%，辛弗林含量為（2.0097±0.09）mg/g。該水提工藝條件穩定可行，干膏率及辛弗林含量較高。加味星蔞承氣顆粒以羌活中紫花前胡苷，大黃中大黃酸、大黃素甲醚，芒硝為鑒別指標，以麩炒枳實中辛弗林為含量指標，建立了加味星蔞承氣顆粒的質量標準。

結論 本文為加味星蔞承氣顆粒備案為醫療機構制劑提供了藥學基礎。

關鍵詞：加味星蔞承氣顆粒；制備工藝；質量標準；辛弗林；正交實驗

中圖分類號：R285.5

文獻標志碼：A

文章編號：1007-2349（2023）07-0001-03

痰熱腑實證是中風病急性期最常見的證候，化痰通腑法是中風病急性期基本治療大法［1］。星蔞承氣湯是化痰通腑的代表方劑［2］。加味星蔞承氣湯是在星蔞承氣湯的基礎上加郁金、石菖蒲、膽南星、雞血藤、麩炒枳實、姜厚樸、地龍、甘草組成，具有熄風清熱，通腑化濁，開玄啟閉的功效，適用于中風病急性期風火痰瘀所致的玄府郁閉證，癥見神識昏朦、口舌歪斜、偏癱、肢麻、大便秘結或不通等。為方便臨床使用，提高治療腦梗死急性期治療水平，本文采用正交實驗優選加味星蔞承氣處方最佳的制備工藝，并研制成顆粒劑，同時對顆粒劑進行質量標準研究，為醫療機構制劑的申報提供藥學基礎。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 紫花前胡苷（中國食品藥品檢定研究院，批號：111821-201604）；辛弗林（中國食品藥品檢定研究院，批號：110727-201809）；大黃酸（中國食品藥品檢定研究院，批號：110757-201607）；大黃素甲醚（中國食品藥品檢定研究院，批號：110758-201817）；加味星蔞承氣顆粒（西南醫科大學附屬中醫醫院制劑室，批號：20201128，20201129，20201130）

1.2 實驗儀器 A-SERIES電子天平（常州市幸運電子設備有限公司）；AUW120D十萬分之一電子天平（日本島津）；HH-4數顯恒溫水浴鍋（江蘇金壇市金城國勝實驗儀器廠）；JPCT0328超聲波發生器（武漢嘉鵬電子有限公司）；GOODLOOK-1000型薄層成像系統（上海科哲生化科技有限公司）；LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津）

1.3 辛弗林含量測定［3］ 色譜條件 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-磷酸二氫鉀溶液（取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL）（50：50）為流動相；流速為1 mL·min-1，檢測波長為275nm，柱溫為40℃，理論塔板數按辛弗林計應不低于4000。

對照品溶液的制備 取辛弗林對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL含辛弗林0.5 mg的溶液，即得。

供試品溶液的制備 取干浸膏粉末3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，通過聚酰胺柱（60～90目，2.5 g，內徑為1.5 cm，干法裝柱）用水20 mL洗脫，收集洗脫液，轉移至25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.4 制備工藝研究 按處方準確稱取加味星蔞承氣飲片，選擇加水量、浸泡時間、煎煮時間、煎煮次數為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗，進行水提，合并提取液，濃縮，烘干，進行干膏率的測定及含量測定，優選最優的水提工藝［4-5］。

1.5 質量標準研究 對加味星蔞承氣顆粒進行質量標準研究，包括鑒別和含量測定。以羌活中紫花前胡苷、大黃中的大黃酸、大黃素甲醚和芒硝作為鑒別，以枳實中的辛弗林作為含量測定指標。

2 結果

2.1 方法學考察［6］

2.1.1 線性關系的考察 取辛弗林對照品8.47 mg置25 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.3371 mg/mL的對照品溶液，作為對照品貯備液，備用。分別精密量取對照品貯備液0.25，0.5，1.0，2.0，4.0，8.0 mL，分別置10 mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別制成濃度為0.008 43，0.016 86，0.033 71，0.067 42，0.134 84，0.269 68 mg/mL的對照品溶液。精密吸取上述對照品溶液各10 μL，按照上述色譜條件測定。以峰面積（A）為縱坐標（Y），辛弗林濃度（mg/mL）為橫坐標（X），繪制標準曲線。得到辛弗林的回歸方程為y=5E+06x-876.02，R2=0.999 8（n=6），在0.008 43 mg/mL～0.269 68 mg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.1.2 精密度試驗 取濃度為0.033 371 mg/mL的辛弗林對照品連續進樣測定6次，其峰面積平均值為148 364.3，RSD值為0.93%，表明儀器精密度良好。

2.1.3 重復性試驗 取加味星蔞承氣浸膏粉，按供試品制備方法制備，平行制備6份樣品，測定，辛弗林平均含量為1.66 mg/g，RSD%為1.32%，表明分析方法重復性良好。

2.1.4 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別在0，2，4，8，12，24 h進樣分析。記錄峰面積，結果辛弗林峰面積均值為206 886.5，RSD%為0.69%。表明供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.5 加樣回收試驗 精密稱取辛弗林對照品26.21 mg，加甲醇定容至25 mL，其濃度為1.0432 mg/mL，稱取同一份供試品1.5 g，精密稱定。每3份為一組，每組分別加入辛弗林對照品溶液1.5 mL，2.6 mL，3.9 mL。按照供試品溶液制備方法制備，進樣，測定。

2.1.6 專屬性試驗 取缺枳實的處方量飲片，按“1.3辛弗林含量測定”中供試品制備方法制備陰性樣品溶液，對比陰性樣品、對照品和供試品的高效液相色譜圖。結果表明加味星蔞承氣顆粒其他組分對辛弗林的測定無干擾，本方法專屬性強。

2.2 制備工藝研究

2.2.1 水提正交實驗研究 取水提正交實驗干浸膏，按照辛弗林含量測定的方法制備樣品，測定，記錄峰面積，計算含量。以辛弗林的含量及干膏率為指標進行綜合評分，綜合評分值=［（辛弗林含量/辛弗林含量最大值）×0.6+干膏率/干膏率最大值×0.4］×100［7-8］。正交試驗結果見表3、表4。

由直觀分析可見，影響提取效果的因素順序為：提取次數C>加水量A>煎煮時間B>浸泡時間D，以浸泡時間D作為誤差項，進行方差分析。方差分析結果表明，提取次數和加水量對結果有顯著性影響（P<0.05），煎煮時間對結果無顯著性影響，無統計學差異（P>0.05）。因此，水提的最佳提取工藝中，最佳的因素組合為A3B1C3D3，考慮到生產實際，由于浸泡時間對結果影響很小，故最佳的水提工藝定為：十二倍量的水，浸泡0.5 h，煎煮0.5 h，煎煮3次。

2.2.2 水提驗證性試驗 由于水提工藝的最佳方案沒有在正交試驗因素表內，因此對最佳水提工藝進行了3次驗證。結果見表5。

2.3 質量標準

2.3.1 羌活TLC鑒別［9-10］ 取加味星蔞承氣顆粒??? 5 g，加甲醇50 mL，超聲處理20 min，靜置，過濾，濾液濃縮至2 mL，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取紫花前胡苷對照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方（除羌活外）與制法，制成陰性樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法（四部通則0502）試驗，吸取上述三種溶液各10 μL，分別點于同一3%醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍色熒光斑點，且陰性樣品無干擾。同時在三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（9∶1∶5∶0.5）驗證系統一和三氯甲烷-甲醇（9∶5）驗證系統二為展開劑的條件下，樣品中分離情況均良好，缺羌活陰性樣品無干擾。見圖3。

2.3.2 大黃TLC鑒別［11-14］ 取加味星蔞承氣顆粒5 g，加甲醇50 mL，浸泡1 h，濾過，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取大黃酸和大黃素甲醚對照品，分別加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。按處方（除大黃外）與制法，制成陰性樣品，其余處理同供試品溶液，作為陰性樣品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各10 μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相對應的位置上，顯相同的橙黃色熒光主斑點，陰性無干擾。同時在正己烷-乙酸乙酯-甲酸（30∶10∶0.5）驗證系統一和環己烷-乙酸乙酯-甲酸（12∶5∶0.1）驗證系統二為展開劑的條件下，樣品中分離情況均良好，缺大黃陰性樣品無干擾。見圖4。

2.3.3 芒硝鑒別 芒硝中含有Na2SO4，取加味星蔞承氣顆粒1 g，加10 mL水溶解后，加鹽酸1 mL，攪拌，加入氯化鋇試液5 mL，作為加味星蔞承氣顆粒供試品溶液。另取芒硝0.2 g，加10 mL水溶解后，加鹽酸1 mL，攪拌，加入氯化鋇試液5 mL，作為芒硝對照溶液。芒硝對照溶液和加味星蔞承氣顆粒供試品均生成白色沉淀。

2.3.4 含量測定 加味星蔞承氣顆粒的含量測定色譜條件及供試品制備方法同“1.3辛弗林含量測定”，根據加味星蔞承氣顆粒（批號：20201128，20201129，20201130）三批中試結果，規定本品每1 g顆粒含麩炒枳實以辛弗林（C9H13NO2）計，不得少于0.94 mg。

3 討論

加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與紫花前胡苷相對應的位置上，顯相同顏色的藍色熒光斑點，且陰性無干擾，可作為質量標準鑒別項。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與大黃酸、大黃素甲醚相對應的位置上，顯相同顏色的橙黃色熒光斑點，且陰性無干擾，可作為質量標準鑒別項。加味星蔞承氣顆粒供試品與芒硝顯相同的白色沉淀，可作為質量標準鑒別項。

同時，本文對其他部分藥材也進行了鑒定試驗，加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與郁金、姜厚樸、地龍對照藥材相應的位置上，無相應的斑點，故未選擇郁金、姜厚樸、地龍作為鑒別。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與瓜蔞皮對照藥材相應的位置上，斑點顏色較淺，加大取樣量和點樣量后，斑點顏色仍較淺，故不作為質量標準的鑒別指標項。加味星蔞承氣顆粒供試品色譜中，在與雞血藤對照藥材相應的色譜位置上，紅色主斑點無相應斑點，故未選擇雞血藤作為鑒別項。加味星蔞承氣顆粒和缺膽南星陰性樣品在兩液相交處均能產生環，故膽南星不作為鑒別項。加味星蔞承氣顆粒中含量測定以辛弗林為指標，且缺麩炒枳實陰性樣品無干擾，可作為含量測定指標。

本文按照四川省醫療機構機制備案管理的相關

要求，本文主要完成了工藝研究和質量標準研究，為醫療機構制劑的申報提供基礎。

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（收稿日期：2022-08-18）