冠心病合并肺部感染患者中性粒細胞CD64及Toll樣受體的表達及臨床意義*

劉京偉,許風霞,周 倩

臨沂市中心醫院/山東第一醫科大學附屬臨沂醫院檢驗科,山東臨沂 276400

冠心病是一種常見心血管疾病,多見于老年群體[1-2]。隨著我國老齡化程度的加深,冠心病患病率與病死率均不斷上升且有年輕化趨勢,嚴重危害著人民健康[3-4]。冠狀動脈血管壁炎癥能夠促進血小板黏附并將其激活,血管內免疫細胞聚集誘導動脈硬化斑塊形成、破裂,致使血管閉塞,是冠心病發生的重要病理基礎[5]。冠心病患者多伴基礎疾病,機體免疫功能下降,肺部易遭受細菌侵入而發生感染,肺部感染可加劇炎癥反應,促使冠心病進展加快,導致患者預后不良[6]。因此,探尋有效的指標用于冠心病合并肺部感染的早期診斷,并及時干預或者預防,對患者預后改善至關重要。中性粒細胞是一種重要的固有免疫細胞,機體發生感染時,中性粒細胞CD64水平可在感染發生后12 h內快速升高。中性粒細胞在免疫復合物清除、炎癥介質釋放及細胞吞噬等過程中發揮重要作用[7]。Toll樣受體(TLRs)能夠參與機體免疫應答過程并進行調控,可有效識別外來病原體,并相應地開啟防御機制[8]。鑒于此,本研究旨在探討冠心病合并肺部感染患者中性粒細胞CD64指數、TLR2、TLR4水平變化及相關性,了解冠心病合并肺部感染的相關免疫機制,為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年7月至2022年7月本院收治的冠心病患者86例,依據是否合并肺部感染進行分組,感染組35例,非感染組51例。另外,選取同期進行體檢的健康志愿者50例作為對照組。納入標準:冠心病診斷符合文獻[9]中的標準,肺部感染診斷參照文獻[10]中的相關標準。排除標準:(1)合并心肌炎、先天性心臟病等心臟類疾病;(2)有肝腎等臟器的嚴重功能障礙;(3)合并惡性腫瘤;(4)合并感染性或者免疫性疾病;(5)處于妊娠期或者哺乳期的女性。3組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05),見表1。本研究符合《赫爾辛基宣言》。患者簽署知情同意書。

表1 3組一般資料比較

1.2方法

1.2.1中性粒細胞CD64指數的計算和比較 于入院次日或于體檢當日,所有研究對象均抽取空腹靜脈血4 mL,加入EDTA-K2進行抗凝,置于4 ℃冰箱保存待測。采用流式細胞術對中性粒細胞CD64水平進行測定。以鼠抗人CD64-PE、鼠IgG1-PE(美國Becton-Dickinson公司)直接進行免疫熒光染色,完成后于室內避光環境中,向血液標本中加入溶血劑,溶解紅細胞10 min后,1 mL PBS緩沖液進行處理,1 200 r/min離心5 min,分離掉上清液,再以1 mL PBS緩沖液進行重懸,結束后以1%多聚甲醛予以固定,固定好上機測定。設備為Coulter FC500流式細胞儀(美國貝克曼庫爾特公司),每標本計數10 000個細胞,測定中性粒細胞、單核細胞以及淋巴細胞CD64表達水平,以其平均熒光強度(MFI)表示,計算中性粒細胞CD64指數,CD64指數=(MFI中性粒細胞/MFI淋巴細胞)/(MFI單核細胞/MFI中性粒細胞)。比較3組中性粒細胞CD64指數的差異。

1.2.2TLR2、TLR4水平檢測和比較 采用流式細胞術測定TLR2、TLR4水平。取1.2.1中制備的血液標本,加入小鼠抗人PE-TLR2抗體(10 μL/100 μL),于室內避光環境下,加入溶血劑溶解紅細胞10 min,加入1 mL PBS緩沖液,1 200 r/min離心5 min,去除上清液,重復操作2次后,加入0.3 mL PBS緩沖液進行重懸,結束后以1%多聚甲醛予以固定,應用流式細胞儀測定TLR2水平,試劑由美國eBioscience公司生產。TLR4測定參照TLR2檢測方法,應用抗TLR4抗體測定TLR4水平。比較3組TLR2、TLR4水平的差異。

2 結 果

2.13組中性粒細胞CD64指數比較 感染組中性粒細胞CD64指數為4.67±1.36,非感染組CD64指數為2.51±0.37,對照組CD64指數為1.01±0.26。3組中性粒細胞CD64指數比較,差異有統計學意義(F=165.015,P<0.001)。其中,感染組CD64指數高于非感染組與對照組(P<0.05);非感染組CD64指數高于對照組(P<0.05)。

2.23組TLR2、TLR4水平比較 3組TLR2、TLR4水平比較,差異有統計學意義(P<0.05)。其中,感染組TLR2、TLR4水平均高于非感染組與對照組(P<0.05);非感染組TLR2、TLR4水平均高于對照組(P<0.05)。見表2。

表2 3組TLR2、TLR4水平比較

2.3中性粒細胞CD64指數與TLR2、TLR4的相關性 對于總體、感染組、非感染組及對照組,TLR2、TLR4均與中性粒細胞CD64指數呈正相關(P<0.05),見表3。

表3 CD64指數與TLR2、TLR4的相關性

2.4ROC曲線分析 繪制ROC曲線分析CD64指數與TLR2、TLR4診斷冠心病合并肺部感染的效能,結果顯示,CD64指數與TLR2、TLR4的AUC分別為0.922、0.929、0.662,CD64指數、TLR2有較高診斷效能。AUC成對比較發現,CD64指數與TLR2的AUC比較,差異無統計學意義(Z=0.173,P=0.862),CD64指數、TLR2的AUC大于TLR4,差異均有統計學意義(Z=0.747、0.767,P<0.05)。當取最佳界值時,CD64指數和TLR2的靈敏度、特異度分別為0.943、0.804和0.914、0.902。見表4、圖1。

圖1 CD64指數與TLR2、TLR4診斷冠心病合并肺部感染的ROC曲線

表4 CD64指數與TLR2、TLR4診斷冠心病合并肺部感染的效能

3 討 論

肺部感染常見于臨床,在機體免疫力下降、防御修復功能損傷、病原體大量入侵等狀態下,發生肺部感染的風險明顯增加[11]。肺部感染發生可使炎性因子活化,增加炎癥反應,是動脈粥樣硬化斑塊穩定性的直接影響因素,可增加冠心病患者預后不良的風險[12]。冠心病合并肺部感染病因較為復雜,臨床癥狀及表現缺少特異性,現階段臨床上尚無相應的診斷“金標準”,易出現誤診、漏診等情況[13]。目前臨床多采用下呼吸道病原學診斷方法,操作簡單,對技術要求較低,然而培養時間相對較長,容易出現假陽性,影響肺部感染早期診斷準確率[14]。因此,尋找更為高效的用于冠心病合并肺部感染的指標,及時進行抗感染干預,對患者預后至關重要。

機體遭受病原菌侵入發生感染時,中性粒細胞會吞噬病原體,促進細胞因子分泌,誘導巨噬細胞、肥大細胞等參與免疫調節[15]。新型細胞因子CD64是吞噬細胞抗體IgG表面Fc段高親和力受體,能夠特異性地識別IgG,并與之相結合,加強了體液免疫與細胞免疫相互間的聯系。通常狀態下,中性粒細胞表面CD64水平較低,機體發生感染時,中性粒細胞被激活,促炎癥因子水平明顯升高,感染后1～6 h,中性粒細胞CD64水平會快速上升至正常水平的5～10倍[16]。中性粒細胞CD64指數可用于細菌感染的早期診斷,該指標不但沒有生理性變化,也不會受年齡影響[17]。TLRs是一種先天免疫受體分子,能夠對入侵病原體進行有效識別,同時也能夠介導多種免疫細胞激活核轉錄因子κB,促進Th2型輔助性T細胞轉變為Th1型,調節促炎癥因子水平,還能夠加速調節性T細胞成熟來影響獲得性免疫[18]。TLRs家族在冠狀動脈粥樣硬化發生、進展乃至斑塊破裂等不同時期發揮關鍵作用[19]。

本研究顯示,3組中性粒細胞CD64指數比較差異明顯,感染組高于非感染組及對照組(P<0.05),非感染組高于對照組(P<0.05)。3組TLR2、TLR4水平比較有明顯差異,其中,感染組TLR2、TLR4水平均高于非感染組與對照組(P<0.05),非感染組TLR2、TLR4水平均高于對照組(P<0.05),提示冠心病患者合并肺部感染時中性粒細胞CD64、TLR2及TLR4表達明顯增加,肺部感染可能通過促進TLRs表達參與冠心病病情發展。分析中性粒細胞CD64指數與TLR2、TLR4的相關性發現,TLR2、TLR4均與中性粒細胞CD64指數呈正相關,提示發生肺部感染時可能借助中性粒細胞表面受體,使不同信號傳導途徑得以激活,來加強免疫應答反應;CD64、TLRs相互間可能存在互相促進的關系。此外,進一步采用ROC曲線分析了CD64指數、TLR2、TLR4診斷冠心病合并肺部感染的效能發現,CD64指數、TLR2、TLR4的AUC分別為0.922、0.929、0.662,CD64指數、TLR2有較高的診斷效能。當取最佳界值時,CD64指數和TLR2的靈敏度、特異度分別為0.943、0.804和0.914、0.902。

綜上所述,肺部感染與冠心病病情發展密切相關。中性粒細胞CD64、TLR2、TLR4表達在冠心病患者發生肺部感染時明顯增加,CD64指數與TLR2在冠心病合并肺部感染中有較高診斷效能。