Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者手術切除組織中MNAT1蛋白表達及意義

陳 琳,唐桂瑩

南京市江寧醫院病理科,江蘇南京 210000

肺癌是我國發病率、死亡率最高的惡性腫瘤,相關資料顯示,我國肺癌的年發病率約為35/10萬人,嚴重威脅了人們的身體健康與生命安全[1]。據統計,全部肺癌病例類型中有將近80%為非小細胞肺癌(NSCLC)[2]。雖然目前臨床已發現多種肺癌分子標志物,如細胞角蛋白-19、組織蛋白酶D、谷胱甘肽S-轉移酶等在肺癌的發生、發展中具有重大影響,但是臨床治療療效仍需提高,迫切需要尋找新的分子標志物。細胞周期蛋白依賴性激酶活化激酶(CAK)是細胞生長、增殖事件中級聯反應的重要調節因子,可參與癌細胞形成。細胞周期蛋白依賴性激酶活化激酶組成因子1(MNAT1)對CAK起到“開關作用”[3-4]。已有研究表明,MNAT1可能參與了NSCLC的發生發展過程[5]。本研究探討早期NSCLC組織中MNAT1表達及其與臨床病理特征及患者預后的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 將南京市江寧醫院2018年1月至2020年10月收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者納入研究,男59例,女37例;年齡31～77歲,平均(50.34±7.12);29例發生淋巴結轉移;41例發生胸膜浸潤;38例發生氣道內擴散;腫瘤最大徑1.1～6.8 cm,平均(3.68±0.53)cm。納入標準:(1)經病理學檢查確診為NSCLC[6];(2)臨床分期I～ⅡB期;(3)符合手術切除指征,且實施該術式;(4)隨訪至少2年。排除標準:(1)手術切除前接受放化療等抗腫瘤治療者;(2)復發NSCLC患者或其他部位惡性腫瘤轉移至肺部者;(3)失訪者;(4)隨訪期間意外死亡者;(5)有精神障礙或診療依從性差者;(6)臨床資料不完整者。的臨床資料進行回顧性分析,見表1。本研究經本院倫理委員會審批通過。

表1 入選患者的基本資料

1.2方法

1.2.1取材與處理 所有患者均于手術中切取病變及其周圍組織,距癌組織邊緣≥2 cm的組織為癌旁組織。

1.2.2MNAT1蛋白表達檢測 采取免疫組化法對MNAT1蛋白表達檢測。標本首先4%甲醛溶液固定,經石蠟包埋后切片,微波抗原修復,抗體均由Lecia Novocastra公司提供,嚴格按照試劑說明書進行操作。添加鼠抗人單克隆抗體,4 ℃孵育過夜,沖洗,滴加兔抗鼠多克隆抗體,室溫孵育40 min,沖洗,滴入二氨基聯苯胺(DAB)顯色液(四川海諾威科技有限公司),復染、脫水、封片。MNAT1主要表達于細胞核,將淡棕色、棕色、棕褐色記為陽性染色,將陽性染色細胞≥20%記為蛋白陽性表達。

1.2.3隨訪 所有患者術后均隨訪2年。

1.3觀察指標 觀察癌組織MNAT1蛋白表達的變化,探討MNAT1蛋白陽性表達與不同臨床病理特征以及患者預后的關系。

2 結 果

2.1癌組織和癌旁組織中MNAT1蛋白陽性表達率的比較 癌組織MNAT1蛋白陽性表達率為51.04%(49/96),癌旁組織為10.42%(10/96),前者高于后者,差異有統計學意義(χ2=37.216,P<0.001,見圖1。

注:A為癌組織MNAT1蛋白陽性表達;B為癌旁組織MNAT1蛋白陰性表達。

2.2MNAT1蛋白陽性表達與患者臨床病理特征的關系 癌組織MNAT 蛋白陽性表達與臨床分期、淋巴結轉移、分化程度、胸膜浸潤和氣道內播散有關,而與患者性別、年齡、最大腫瘤直徑、病理類型、生長類型無關(P>0.05),見表2。

表2 不同臨床病理特征患者癌組織MNAT1蛋白陽性表達率對比結果[n(%)]

2.3癌組織MNAT1蛋白陽性表達與患者預后的關系 醫院收治的96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術后1年內有29例(30.21%)復發,2年內有76例(79.17%)復發。癌組織MNAT1蛋白陽性表達患者術后1年內和2年內復發率均高于癌組織MNAT1蛋白陰性表達患者(χ2=29.418、17.029,P<0.001)。

2.4癌組織MNAT1蛋白陽性表達與患者術后死亡的關系 96例患者中術后2年內共有11例死亡,病死率為11.46%。死亡患者癌組織MNAT1蛋白陽性表達率為100.00%(11/11),生存患者為44.71%(38/85),提示癌組織MNAT1蛋白陽性表達與患者術后2年生存有關(χ2=11.795,P=0.001),生存曲線見圖3。

圖3 癌組織MNAT1蛋白陽性與陰性表達患者Kaplan-Meier生存曲線

3 討 論

MNAT1是CAK的組配因子,也是CAK的重要組成部分,對CAK的活性起到重要作用,CAK可通過磷酸化調控機體細胞周期進程[8-9]。故MNAT1對細胞周期進展具有重大作用,推測很可能能夠影響惡性腫瘤的發生和發展。

本次研究旨在探討早期NSCLC癌組織中MNAT1的表達及其臨床意義,發現Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者手術切除的癌組織中存在MNAT1蛋白表達偏高。相關研究表明[10-11],CAK可通過磷酸化CDK上的殘基,進而控制機體細胞周期進程,對細胞的增殖、代謝、存活、轉錄調控等生物過程具有重要作用,也與腫瘤細胞的生長、增殖緊密相關。siRNA沉默肺癌細胞株A549的MNAT1表達,發現其增殖、遷移活性均下降,且Akt/p21信號傳導通路被抑制,推測MNAT1表達升高可能是通過激活Akt/p21通路促進肺癌的發展,增強腫瘤的浸潤與轉移能力的[12]。本研究中癌組織中MNAT1蛋白陽性表達率高,推測很可能是通過調控細胞生長、增殖等途徑參與NSCLC的發生。

另外,本研究還發現,96例Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術后1年復發率為30.21%、術后2年復發率為79.17%,證實Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術后存在極大復發風險;Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者癌組織MNAT蛋白陽性表達與臨床分期、淋巴結轉移、分化程度、胸膜浸潤、氣道內播散均有關,可知該蛋白陽性表達很可能參與NSCLC病情進展。MNAT1 蛋白陽性表達可通過增強細胞的增殖能力促進惡性腫瘤的發生和發展,與惡性腫瘤的部分臨床特征、預后緊密相關[13-14]。相關研究發現[9],在NSCLC患者的癌組織中MNAT1表達高于正常肺組織,MNAT1表達水平與淋巴結轉移成正相關。此外,本研究中癌組織MNAT1蛋白陽性表達與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術后1年復發有關,提示該蛋白陽性表達很可能能夠增加患者術后復發的風險。相關研究表明[15],低MNAT1表達可對細胞遷移產生抑制作用,高MNAT1表達可促進細胞的遷移,降低MNAT1表達可降低使癌細胞的增殖能力,使細胞周期處于G1期,高表達則出現相反情況,即MNAT1可通過對Akt磷酸化的促進,進而抑制p21表達,使細胞增殖加快,導致細胞周期進展加快,患者易復發。另外,本研究中癌組織MNAT1蛋白陽性表達與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者術后2年生存有關,與上述分析一致,這也印證了癌組織MNAT1蛋白陽性表達與Ⅰ～Ⅱ期NSCLC患者預后有關的結論。

綜上所述,在NSCLC癌組織中MNAT1蛋白陽性表達率高于癌旁組織,且癌組織MNAT1蛋白陽性表達與臨床分期、淋巴結轉移、分化程度、胸膜浸潤、氣道內播散、術后復發和術后2年生存均有關,與術后1年生存無關。MNAT1能否成為NSCLC防控的新靶點需要進一步研究。