靶向敲降Linc00673對胃癌細胞增殖、凋亡的影響及其機制

郭紅艷 徐亞茹 李耕慧 孫曉杰 趙正林 吳琦 劉波

(齊齊哈爾醫學院 1生化教研室,黑龍江 齊齊哈爾 161006;2附屬第一醫院檢驗科;3齊齊哈爾市第一醫院老年科;齊齊哈爾醫學院 4臨床生化教研室;5附屬第二醫院辦公室)

目前,胃癌占我國消化道腫瘤的第一位,對身體健康危害嚴重,且在我國的發病率呈逐年遞增的趨勢。近年來多項研究結果顯示,長鏈非編碼RNA(LncRNA)與胃癌的發生、發展密切相關〔1～3〕。Linc00673是2015年被鑒定的胰腺癌易感基因,參與非小細胞肺癌、肝癌、直腸癌和乳腺癌等多種腫瘤的侵襲轉移,在胃癌組織中的表達與該病的淋巴轉移、遠處轉移和TNM分期相關〔4〕,但其在胃癌中的生物學作用尚不完全清楚,對其作用機制也鮮有報道。本研究構建靶向敲降Linc00673重組慢病毒載體,并將其轉染至胃癌MGC-803細胞系,觀察Linc00673敲降后胃癌細胞增殖和凋亡等生物學行為的變化,并探討其作用的分子機制。

1 材料與方法

1.1主要材料與試劑 腎上皮細胞293T、胃癌細胞系MGC-803由本課題組凍存,慢病毒重組質粒Linc00673-sh1～3由上海捷瑞生物工程有限公司構建并測序鑒定,對照空載體質粒PSIH1和慢病毒包裝質粒pMD2.G、psPAX2由中國醫學科學院腫瘤醫院黃常志教授惠贈;DMEM、胎牛血清(FBS)和胰酶購自Gibco公司;嘌呤霉素、噻唑藍(MTT)和碘化丙啶(PI)購自Sigma-Aldrich公司;qPCR試劑盒購自Yeasen生物公司;細胞凋亡檢測試劑盒為北京四正柏公司產品;蛋白提取和含量測定試劑盒購自Beyotime生物公司,所用抗體均為Cst公司產品。

1.2方法

1.2.1qPCR檢測Linc00673敲降效率 分別用Linc00673-sh1～3慢病毒和對照空載體……