LncRNA FOXD3-AS1靶向miR-127-3p對AngⅡ誘導的血管平滑肌細胞的影響

杜美玲 王曉元 李會賢 李方江 李飛星

(河北北方學院附屬第一醫院心血管內科,河北 張家口 075400)

長鏈非編碼RNA(LncRNA)是長度大于200 nt蛋白編碼能力缺失的RNA轉錄本,其通過表觀遺傳、轉錄或轉錄后水平調控基因表達在細胞增殖、分化,遷移和侵襲等生物學過程中具有重要功能,LncRNA的表達改變與心腦血管疾病、腫瘤的進展密切相關〔1,2〕。叉頭盒轉錄基因D3反義RNA1(FOXD3-AS1)是近年發現的LncRNA,研究發現FOXD3-AS1表達上調明顯促進糖氧剝奪的心肌細胞凋亡和缺血/再灌注損傷〔3〕。膠質瘤、乳腺癌中FOXD3-AS1表達上調,具有促增殖、促遷移作用〔4,5〕。血管平滑肌細胞(VSMCs)是動脈粥樣硬化等心血管疾病進展的重要步驟。但FOXD3-AS1在VSMCs中的表達和功能未見報道。生物信息學預測顯示miR-127-3p是FOXD3-AS1的候選靶基因之一。miR-127-3p骨肉瘤組織中表達下調,上調miR-127-3p表達抑制骨肉瘤細胞的增殖,遷移和侵襲〔6,7〕。然而,FOXD3-AS1是否miR-127-3p參與調控VSMCs增殖、遷移、侵襲和凋亡尚未可知。本研究以血管緊張素(Ang)Ⅱ誘導人主動脈VSMCs,探討FOXD3-AS1在VSMCs增殖、遷移、侵襲及凋亡中的作用和潛在機制。

1 材料與方法

1.1主要試劑 杜氏改良Eagle培養基(DMEM)和胰蛋白酶購于美國Gibco公司;AngⅡ購于美國Sigma公司;小干擾RNA(si-RNA)、過表達質粒(pcDNA3.1-RNA)、miRNA模擬物(miRNA mimics)、miRNA抑制物(anti-miRNA)、熒光素酶報告基因載體合成、構建和測序由上海吉瑪制藥公司完成;實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qPCR)試劑盒購于大量Takara公司;CCK-8、膜聯蛋白Ⅴ-異硫氰酸熒光素/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-FITC/PI)雙染細胞凋亡試劑盒購于北京索萊寶生物技術有限公司;Transwell小室和基質膠購于美國Corning公司;兔源磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)單克隆抗……