高內(nèi)涵分析系統(tǒng)聯(lián)合激光掃描共聚焦顯微鏡觀察細胞間隧道納米管*

潘鵬宇 趙秋宇 王英 王建波 李想 劉春英 王淳**

（1）遼寧中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結(jié)合學院，沈陽 110847；2）遼寧中醫(yī)藥大學中醫(yī)臟象理論及應用教育部重點實驗室，沈陽 110847；3）珀金埃爾默企業(yè)管理（上海）有限公司，上海 201203）

隧道納米管（tunneling nanotubes，TNTs）是存在于細胞間的細長膜管狀結(jié)構(gòu)，又稱膜納米管，主要由肌動蛋白、微絲和微管組成，直徑大多在50 nm至幾微米，長度約幾十到數(shù)百微米［1-2］。TNTs作為一種新的細胞間相互作用方式，可將不同細胞的質(zhì)膜和胞質(zhì)連接在一起，實現(xiàn)不同細胞成分的遠距離直接轉(zhuǎn)運，完成生物信息交換［3］。TNTs可轉(zhuǎn)運物質(zhì)多樣，包括如Ca2+、線粒體、高爾基囊泡、溶酶體、病毒、外泌體、蛋白質(zhì)、microRNA和siRNA等［4-8］。TNTs直接且精準的轉(zhuǎn)運功能使其在信號轉(zhuǎn)導、免疫應答、凋亡、納米與微米顆粒轉(zhuǎn)運、胚胎形成與發(fā)育、細胞分化、代謝重編程、病原體傳播、神經(jīng)退行性病變、腫瘤發(fā)生與發(fā)展等生理、病理過程中發(fā)揮重要作用［9-10］。對于腫瘤細胞而言，TNTs可提高其增殖和侵襲、遷移能力，促進腫瘤細胞存活，并可通過線粒體的轉(zhuǎn)運增加腫瘤細胞的氧化磷酸化和ATP生成以應對不利的環(huán)境壓力［11］。此外，對于腫瘤血管生成、放化療耐藥，TNTs也發(fā)揮了重要作用［12］。其中，在肺腺癌的以往研究發(fā)現(xiàn)，利用轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡可探明TNTs內(nèi)轉(zhuǎn)運物質(zhì)包括囊泡、蛋白質(zhì)和線粒體，可測量TNTs長度及直徑（長度：大于70 μm；直徑：400~1 500 nm），該結(jié)果與本研究相一致［13-14］。

目前，可以利用激光掃描共聚焦顯微鏡（laser scanning confocal microscope，LSCM）、掃描電子顯微鏡（scanning electron microscope，SEM）測量TNTs長度、觀察TNTs表面結(jié)構(gòu)，也可以利用透射電子顯……