血清miR-195在宮頸鱗狀細胞癌診斷中的臨床意義

閆丹丹，高涵，王寧

1.中山大學附屬第七醫院婦產科，廣東深圳 518000；2.內蒙古民族大學附屬醫院婦產科，內蒙古通遼 028000；3.大連醫科大學附屬第二醫院婦科，遼寧大連 116000

MicroRNA（miRNAs）可干擾mRNA的轉錄、翻譯，并具有促進RNA降解的作用，在調節蛋白表達上具有重要作用[1-2]。miRNAs在細胞的凋亡、壞死，以及腫瘤細胞的增殖過程中具有顯著活性[3]。既往研究證實miR-195多種惡性腫瘤，如乳腺癌、消化系統腫瘤、泌尿系統腫瘤等均存在異常表達[4-5]，且在此類患者的的組織液中可檢測出穩定表達的miRNA。故miR-195的異常表達已經認為是多種腫瘤活化的標志物而應用于臨床[6-8]。本研究收集2016年9—11月中國醫科大學附屬盛京醫院中21例確診且初診為早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宮頸鱗狀細胞癌的患者血清標本為觀察組，同期健康志愿者22名為對照組，比較該病患者與正常人群血清miR-195水平的差異，以明確其是否可作為宮頸鱗狀細胞癌診斷的潛在標志物。現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集21例于本院確診且初診為早期（Ⅰa1～Ⅱa2期）宮頸鱗狀細胞癌的患者血清標本為觀察組，年齡41～68歲，平均（52.2±3.6）歲，宮頸癌臨床分期為Ⅰa期7例、Ⅰb期8例、Ⅱa期6例[臨床分期采用2009年國際婦產科聯盟（The International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO）的分期標準]。對照組為同期健康志愿者22名，年齡40～65歲，平均（51.9±2.7）歲。兩組一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經過本院醫學倫理委員會批準（倫理編號201608011），入組前患者或家屬簽署知情同意書。

1.2 納入與排除標準

納入標準：精神狀況正常；預計生存時間＞6個月；于本院規律就診；臨床資料完整。

排除標準：嚴重肝腎功能障礙者；腫瘤卡氏評分＜60分者；未明確診斷宮頸癌者；精神狀況異常者。

1.3 方法

取靶標志物血清RNA 10 μl，嚴格按照反轉錄試劑盒說明進行反轉錄，并在37℃ 60 min，85℃ 5 min條件下生成cDNA液。應用miR-195正向引物與管家基因（U6）（均由上海生工提供），同時配置等計量滅菌用水為空白對照組，隨后進行PCR擴增反應，反應體系劑量為25 μl，共計40個循環，設定每個實驗批次均有空白對照

1.4 觀察指標

比較兩組研究對象的血清miR-195的表達水平，測定方法采用實時熒光定量PCR法，分析血清miR-195在宮頸鱗狀細胞癌中的診斷效能。

1.5 統計方法

采用SPSS 21.0統計學軟件進行數據處理，符合正態分布的計量資料以（）表示，組間差異比較采用t檢驗；通過ROC曲線判斷血清miR-195在宮頸鱗狀細胞癌的診斷效能。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組研究對象miR-195表達水平比較

觀察組血清miR-195表達水平高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.001）。見表1。

表1 兩組研究對象miR-195表達水平比較()

表1 兩組研究對象miR-195表達水平比較()

images/BZ_135_1288_1816_1353_1848.pngimages/BZ_135_1918_1816_2037_1848.pngimages/BZ_135_1288_1868_1487_1900.pngimages/BZ_135_1897_1868_2059_1900.pngimages/BZ_135_1288_1920_1487_1952.pngimages/BZ_135_1897_1920_2059_1952.pngimages/BZ_135_1288_1972_1334_2004.pngimages/BZ_135_1941_1972_2014_2004.pngimages/BZ_135_1288_2024_1345_2056.pngimages/BZ_135_1933_2024_2022_2056.png

2.2 血清miR-195在宮頸鱗狀細胞癌中的診斷效能分析

血清miR-195診斷宮頸鱗狀細胞癌的ROC曲線下面積為0.675（95%CI：0.569～0.781，P=0.001），截斷值為29.86時的敏感性和特異性分別為71.43%、60.71%，見圖1。

圖1 血清miR-195在宮頸鱗狀細胞癌中的診斷效能分析

3 討論

宮頸癌具有多種發病機制，且屬于多基因聯合作用結果，其中預后最理想的為早期宮頸癌，其五年生存率超過90%[9-11]。隨著近年腫瘤學研究的深入，針對惡性腫瘤發生發展的基因與遺傳學研究成為目前研究的重點和熱點，其中非編碼區miRNA越來越受到廣大學者的關注。研究提示miRNA在惡性腫瘤細胞的增殖、分化過程中均具有非常關鍵的調控意義，另外其還影響到惡性腫瘤的轉移、復發，同時致病微生物感染過程中亦具有明顯作用[12-14]。

本團隊前期研究證實了miR-195參與了宮頸鱗狀細胞癌的發生，其在宮頸癌組織中表達下調，而且高表達的miR-195抑制Hela和SiHa細胞的增殖，提示miR-195可能是宮頸鱗癌相關的敏感性腫瘤標志物。本研究結果提示觀察組血清miR-195表達水平高于對照組（P＜0.05）。另外ROC曲線分析結果提示：血清miR-195診斷的曲線下面積為0.675，其敏感性接近60%，而特異性則超過60.0%，以上結果亦提示miR-195可能是宮頸鱗癌相關的敏感性腫瘤標志物。此結果與申晨歌[15]研究提示血清miR-195診斷宮頸鱗狀細胞癌的曲線下面積達到0.716的結果相近。雖然本研究結果提示miR-195作為腫瘤標志物診斷宮頸鱗狀細胞癌的ROC曲線下面積相對較低，但其敏感性和特異度具有一定臨床價值，究其原因可能是本研究所納入對象樣本量有限，產生一定偏倚有關。本研究因缺乏宮頸上皮內瘤變患者、宮頸腺癌以及晚期宮頸癌者，導致無法從多角度綜合探討血清miR-195對宮頸相關病變的診斷價值，此為本研究不足。本研究結果與曾晶晶等[16]研究提示宮頸癌miR-195相對表達量為（0.38±0.09），血清miR-195診斷宮頸鱗狀細胞癌的曲線下面積是0.715，敏感性和特異性均在60%左右的結論相一致。

綜上所述，miR-195是一種潛在的診斷宮頸鱗狀細胞癌的腫瘤標志物，對臨床早期診斷與篩查宮頸鱗癌變有一定指導意義，同時可為術后隨訪提供指導。