QuEChERS 結(jié)合UHPLC-MS/MS 測定豬肉中20 種高毒性農(nóng)藥殘留

王乾麗，簡銀池，周人材，扶 勝，宋光林

（1.貴州省檢測技術(shù)研究應(yīng)用中心，貴州 貴陽 550000；2.食品安全與營養(yǎng)（貴州） 信息科技有限公司，貴州 貴陽 550008；3.貴州省分析測試研究院，貴州 貴陽 550000））

豬在飼養(yǎng)過程中直接食用噴灑過農(nóng)藥的農(nóng)作物、農(nóng)藥濫用導(dǎo)致環(huán)境、水、空氣、土壤污染等直接或間接原因?qū)⑹罐r(nóng)藥進入動物身體[1-2]，長期食用農(nóng)藥殘留的食物會損害人體的血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等，從而引發(fā)多種疾病[3]。因此，動物源食品中農(nóng)藥殘留備受監(jiān)管部門關(guān)注，《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》 （GB 2763—2021）中制定了嚴(yán)格的農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)。因此建立準(zhǔn)確、可靠、高通量豬肉中農(nóng)藥殘留檢測方法有重要意義。

目前，食品中農(nóng)藥殘留的檢測方法主要有液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[4]、氣相色譜法[5]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]等、但極性強和熱穩(wěn)定性差的農(nóng)藥不宜用氣相色譜法[7]，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法具有滿足不同極性化合物高通量檢測及定性定量的特點，EMR-lipid作為QuEChERS 法的一種凈化材料，對脂類含量特別高的樣品除脂效果較好，能減少基質(zhì)干擾，從而增強靈敏度和準(zhǔn)確度[8-9]。

QuEChERS 法結(jié)合超高效液相色譜- 串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中農(nóng)藥殘留適用于大批量檢測，可靠準(zhǔn)確[10]。以期為豬肉中農(nóng)藥殘留的風(fēng)險評估和監(jiān)測提供科學(xué)依據(jù)，有助于完善豬肉中最大殘留限量的農(nóng)藥參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

標(biāo)準(zhǔn)品：克百威、嘧菌酯、涕滅威亞砜、滅多威、甲萘威、氧樂果、嘧霉胺、噠螨靈、氯唑磷、異丙威、樂果、丙環(huán)唑、氯吡脲、殺蟲脒、氟甲腈、3-羥基克百威、氟蟲腈砜、吡蚜酮（1 000.0 μg/mL）、甲霜靈、多菌靈（100.0 μg/mL），天津阿爾塔科技有限公司提供。

主要試劑：乙腈、丙酮、十八烷基鍵合硅膠C18吸附劑、乙二胺-N- 丙基硅烷（Primary secondary amine，PSA）、石墨化碳黑（Graphitizing of carbon black，GCB） dSPE EMR-Lipid 凈化管，上海安普實驗科技股份有限公司提供；多壁碳納米管（MWCNTs），中國科學(xué)院成都有機化學(xué)公司提供。

1.2 主要儀器設(shè)備

6470 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有ESI 源）、1290 型超高效液相色譜儀，美國Agilent 公司產(chǎn)品；LT2002 型電子天平，常熟市天量儀器有限公司產(chǎn)品。

1.3 試驗方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

用移液管準(zhǔn)確移取計算體積的20 種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL 的棕色容量瓶中，乙腈定容，分別配置濃度為10.0 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液和質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液備用；經(jīng)提取、凈化后獲得基質(zhì)溶液稀釋1.0 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，配成0.25，0.50，1.00，2.00，4.00，8.00，10.00，25.00 ng/mL 空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.3.2 樣品前處理

稱取2.00 g 已制樣的樣品（精確至0.01 g） 于50 mL 離心管中，加入10.0 mL 乙腈振蕩提取10 min后離心；然后取5.0 mL 上層澄清液到EMR-Lipid dSPE 管中振搖渦旋2 min 后離心，取出上清液到離心管中，加入QuEChERS 鹽析包后混勻離心；移取2 mL 上層溶液至試管中，40 ℃下氮吹干，乙腈水溶液定容至1.0 mL，然后倒入2.0 mL 離心管中，以轉(zhuǎn)速15 000 r/min 離心5 min，取上層液檢測。

1.3.3 色譜條件

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus-C18反相色譜柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm，美國Agilent 公司）；流動相A：0.1%甲酸水（含2 mmol/L 乙酸銨） 溶液，B：乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：40 ℃；進樣體積：2.0 μL，梯度洗脫。

1.3.4 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源（ESI），正負離子掃描；多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；毛細管電壓4.5 kV；干燥氣溫度300 ℃；鞘氣流速6 L/min；鞘氣溫度300 ℃。

質(zhì)譜分析參數(shù)見表1。

表1 質(zhì)譜分析參數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 提取試劑的優(yōu)化

提取溶劑選擇需要綜合考慮對目標(biāo)化合物提取效果和對油脂的溶解性，經(jīng)試驗對比，乙腈的提取效果最佳，因降低提取溶劑pH 值能破壞樣品的組織結(jié)構(gòu)，使目標(biāo)物從組織中游離出來，加快提取效率。試驗考查了乙腈、0.1%甲酸乙腈、1%甲酸乙腈和丙酮的提取效果。

不同提取溶劑對20 種農(nóng)藥殘留的提取效果見圖1。

圖1 不同提取溶劑對20 種農(nóng)藥殘留的提取效果

0.1 %甲酸乙腈、1%甲酸乙腈和丙酮對多菌靈、異丙威、氯吡脲、 丙環(huán)唑、噠螨靈的回收效果不理想（回收率＜70%），其中丙酮對殺蟲瞇、噠螨靈、氟蟲腈砜的回收效果較差（回收率＜60%），0.1%甲酸乙腈對噠螨靈、氟蟲腈砜的回收率為17%和48%，1%甲酸乙腈對噠螨靈、丙環(huán)唑的回收率為55%和60%，乙腈對20 種目標(biāo)化合物的提取效果最佳（回收率為81%~107%），因此，選擇乙腈為試驗的提取溶劑。

2.2 QuEChERS 法優(yōu)化

根據(jù)提取化合物的性質(zhì)和基質(zhì)特點，選擇最優(yōu)的凈化劑，對于減少基質(zhì)效應(yīng)、提高被測化合物靈敏度和回收率及其重要。試驗中考查了QuEChERS方法常用凈化材料C18、PSA、MWCNT、EMR-Lipid的不同組合和用量，以期提高目標(biāo)化合物提取效率同時減少基質(zhì)效應(yīng)的影響。

凈化材料C18、PSA 對回收率的影響見圖2，MWCNT、EMR-Lipid 對回收率的影響見圖3。

圖2 凈化材料C18、PSA 對回收率的影響

圖3 MWCNT、EMR-Lipid 對回收率的影響

試驗數(shù)據(jù)顯示，選用PSA 作為凈化劑時，大部分目標(biāo)化合物的回收效果較好（回收率為76%~121%），但噠螨靈的回收率較差為33%，氟甲腈受到基質(zhì)增強效應(yīng)影響回收率為131%；選用C18為凈化劑時，部分目標(biāo)化合物受到基質(zhì)增強效應(yīng)影響較大，其中氯唑磷回收率為168%，噠螨靈回收率為165%，嘧菌酯回收率為137%；選用二者混合作為凈化劑時4 個目標(biāo)化合物的回收率不理想，克百威回收率為143%，氯唑磷回收率為194%，丙環(huán)唑回收率為163%，嘧菌酯回收率為155%；MWCNTs 和PSA 的凈化效果顯示，MWCNTs 及MWCNTs 和PSA組合對目標(biāo)化合物多菌靈（回收率為0）、嘧霉胺（回收率＜10%）、甲萘威（回收率＜60%）、3 -羥基克百威（回收率＜35%）、氯吡脲（回收率為0） 的回收效果差。

2.3 方法學(xué)評價

2.3.1 方法的線性范圍、檢出限

試驗采用基質(zhì)曲線來消除基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果表明，20 種目標(biāo)化合物在0.25~25.00 μg/L 的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（R2） 在0.995 以上，適用于定量分析。通過向陰性樣品中添加目標(biāo)物來考查方法的檢出限（LOD，S/N=3），最終確定方法的檢出限（LOD） 為0.2 μg/kg，定量限（LOQ）為0.7 μg/kg，該方法有較好的靈敏度。

20 種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R2）、檢出限（LOD）、回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） （n=6） 見表2。

表2 20 種農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)（R2）、檢出限（LOD）、回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） （n=6）

2.3.2 回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）

在2.5，5.0，10.0 μg/kg 三水平考查加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。由表2 可知，回收率為82.3%~109.5%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD） 為1.9%~8.2%，該方法的準(zhǔn)確度和精密度能滿足豬肉中農(nóng)藥殘留檢測的要求。

3 結(jié)論

試驗的樣品前處理步驟簡單省時，具有易用性和較高分析效率，該方法回收率高、檢出限低、靈敏度和重現(xiàn)性好，14 min 內(nèi)完成豬肉中20 種高毒性農(nóng)藥的檢測，能夠滿足豬肉中20 種高毒性痕量農(nóng)藥殘留的快速、準(zhǔn)確、大批量檢測要求。