甲狀腺細針穿刺液基細胞學Ⅲ類患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗體檢測及其臨床意義

張曉惠，曹曉云，文鈺玲

西安寶石花長慶醫院病理科1、婦產科2，陜西 西安 710201

甲狀腺結節屬于諸多原因引發的臨床常見疾病，發生率為4%～7%。隨著影像學技術的推廣應用與體檢的普及，甲狀腺結節檢出率達到20%～76%，其中惡性結節占比5%～15%[1]。相關文獻顯示，因甲狀腺惡性腫瘤致死的人群在所有腫瘤死亡率中占比0.4%[2]。按照甲狀腺細胞病理學Bethesda 報告系統分類，液基細胞學Ⅲ類患者存在甲狀腺乳頭狀癌。相關文獻也顯示，經細胞學確診為Ⅲ類的病患在綜合評估之后有超過1/3被確診為甲狀腺乳頭狀癌。此類病患的處理方式大部分是細針重復穿刺及隨訪，這可能耽誤病情，進而使腫瘤轉移[3-4]。相比于傳統涂片，液基細胞學制片核結構清晰、背景干凈。雖然細胞學診斷進步較大，然而細胞學對Ⅲ類患者的確診仍然是細胞診斷中的重難點，因此，如何正確篩查出Ⅲ類患者中的惡性結節就非常重要[5]。近幾年，相關文獻顯示，細胞角蛋白19 (CK19)、半乳糖凝素-3 (Galectin-3)、間皮細胞(HBME-1)、甲狀腺過氧化物酶(TPO)等標志物能夠在甲狀腺良性病變與甲狀腺乳頭狀癌的鑒別診斷中發揮重要作用[6-8]。本研究主要探討甲狀腺細針穿刺液基細胞學Ⅲ類患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗體水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2019 年1 月至2020年12 月西安寶石花長慶醫院診治的100 例甲狀腺細針穿刺液基細胞學Ⅲ類患者的臨床資料。納入標準：(1)所有患者均經手術取得病理診斷結果；(2)選擇液基細胞保存液對標本進行處置；(3)臨床資料完整。排除標準：(1)伴有其他惡性腫瘤；(2)免疫調節性藥物長時間使用；(3)合并結締組織疾病；(4)合并風濕性疾病。依據病理診斷結果將患者分為良性組65 例和甲狀腺乳頭狀癌組35 例。良性組患者中男性21 例，女性44 例；年齡25～65 歲，平均(47.02±4.63)歲。甲狀腺乳頭狀癌組患者中男性15例，女性20例；年齡28～67歲，平均(47.50±4.46)歲。兩組患者的性別和年齡比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。本研究經醫院醫學倫理委員會批準。

1.2 方法 (1)CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO檢測：把甲狀腺穿刺液基細胞保存液置于試管中行梯度離心兩次，第一次置入5 mL梯度離心液，1 080 r/min保持10 min，將上清液吸去后，置入緩沖液5 mL，第二次2 000 r/min保持10 min，將上清液吸去后，置入緩沖液1 mL，同時于震蕩器上混合震蕩30 s，放置混合液于全自動沉降式液基薄層細胞制片機，用制片機完成沉降、轉移、巴氏染色、貼附等步驟，然后再制成細胞薄片(厚1.3 cm)。之后進行免疫組化檢測(EnVision二步法)。(2)判定標準：CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 陽性部位分別位于細胞質、細胞質/細胞核、細胞質、細胞質。按照染色強度及其得分對結果進行判讀染色強度：①0 分為無著色；②1 分為淡黃色；③2 分為棕黃色；④3 分為棕褐色；染色強度得分：①0 分為陰性；②1 分為弱陽性；③2 分為中度陽性；④3 分為強陽性。兩者得分的乘積≥1分就為陽性。

1.3 統計學方法 應用SPSS23.0 統計軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差(x-±s)表示，計數資料比較采用χ2檢驗。以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 抗體陽性率比較 甲狀腺乳頭狀癌組患者的CK19、Galectin-3、HBME-1 陽性率明顯高于良性組，TPO 陽性率明顯低于良性組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1、圖1～圖3。

圖1 Galectin-3陽性(10×/0.25)Figure 1 Galectin-3 positive(10×/0.25)

圖2 HBME-1陽性(10×/0.25)Figure 2 HBME-1 positive(10×/0.25)

圖3 CK19陽性(10×/0.25)Figure 3 CK19 positive(10×/0.25)

表1 兩組患者的CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO抗體陽性率比較[例(%)]Table 1 Comparison of positive rates of CK19,Galectin-3,HBME-1,and TPO antibodies between the two groups[n(%)]

2.2 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 對甲狀腺癌的診斷效能 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 及四者聯合診斷甲狀腺乳頭狀癌的準確性、敏感性、特異性、陰性預測值、陽性預測值比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO對甲狀腺乳頭狀癌的診斷效能比較(%)Table 2 Comparison on the diagnostic efficacy of CK19,Galectin-3,HBME-1,and TPO in thyroid papillary carcinoma(%)

3 討論

伴隨甲狀腺癌篩查工作的普及和影像技術的快速發展，甲狀腺乳頭狀癌的確診率不斷增加。加之甲狀腺解剖結構十分復雜，鄰近氣管頸部與喉下部，其附近神經、血管豐富，且有甲狀旁腺(內分泌器官)，若出現惡性腫瘤極易引發嚴重后果。雖然大部分甲狀腺乳頭狀癌有良好的預后，然而也存在甲狀腺腺外侵犯的風險，發生概率介于5%～34%[9]。所以及時診斷及干預更有利于預后。近幾年，液基細胞制片在甲狀腺穿刺涂片內被廣泛應用，相較于傳統涂片，能夠為細胞學診斷提供實質性的幫助。然而只是依據細胞學涂片進行診斷，存在一定局限性，若甲狀腺結節合并鈣化、纖維化或囊性變就會使穿刺標本內有診斷意義的細胞減少，使細胞不具備典型性，進而干擾診斷，且部分良性病變患者也會出現甲狀腺乳頭狀癌病患的核特征，在細胞形態方面，難以辨別腺瘤性結節與癌[10]。

按照Bethesda報告系統(甲狀腺細胞病理學)分類顯示，V與Ⅵ類患者存在手術指征，可以及時干預，但是Ⅲ類患者為意義不明確非典型病變，其屬于排除性診斷，且Ⅲ類患者的預期惡性率高于目前已知的病變率，針對這一類型的患者，醫囑多為隨訪且細針重復穿刺，這使臨床工作被動，同時隨訪期間的多次檢查會增加患者的經濟支出及時間耗費，同時加重其心理壓力，進而加劇病情。相關文獻顯示，細胞學確定為Ⅲ類的患者由于非典型性的核特征使漏診率提升，此類型惡性結節往往隱藏于不典型病變內，這使如何準確篩查Ⅲ類患者中的隱藏惡性結節顯得十分重要[11]。

CK19為低分子量細胞角蛋白之一，主要表達于單層上皮內，近年來，常被應用于甲狀腺乳頭狀癌診斷中。本研究顯示，CKl9在甲狀腺乳頭狀癌診斷中敏感性最高，同馮凌飛等[12]的研究結果一致，CK19在甲狀腺乳頭狀癌患者中的陽性率為97.14%，同時都屬于彌漫強陽性，在良性病變患者中的陽性率為6.15%，且均為局部陽性，其陰性預測值為98.49%，同樣為最高，所以相關文獻認為CK19陰性基本能排除甲狀腺乳頭狀癌[13]。

Galectin-3屬于同β-半乳糖苷聯合的一種內源性凝集素，在腫瘤組織中可廣泛表達，同時參與細胞黏附、凋亡、生長與血管的形成，在腫瘤的發展中發揮重要作用。Galectin-3 在甲狀腺乳頭狀癌內高表達，但是在良性病變內為弱陽性或陰性。所以，能夠輔助鑒別、診斷甲狀腺乳頭狀癌。本研究表明，Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌內多為陽性，在良性病變內為局部陽性或陰性，同溫琥玲等[14]的研究結果一致。Galectin-3在診斷甲狀腺乳頭狀癌中的敏感性為91.43%。相關文獻也顯示，Galectin-3 同CK19 一樣，為甲狀腺乳頭狀癌診斷較為敏感的一種標記物[15]。

HBME-1屬于單克隆抗體，為間皮細胞微絨毛表面極具特異性的一種標記物，在腫瘤的生長、形成、轉移方面作用顯著[16]。之前，被廣泛應用于診斷間皮來源腫瘤，然而，近幾年，常被用來診斷甲狀腺乳頭狀癌。本研究顯示，HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌患者中陽性率較高，在良性病變患者中為局部表達或不表達，其對甲狀腺乳頭狀癌的敏感性、特異性分別為85.71%、92.31%。

TPO為糖基化血紅素蛋白之一，主要表達在甲狀腺濾泡細胞游離面，在合成甲狀腺激素的通路中發揮重要作用，且可催化T4、T3 的合成[17]。本研究顯示，TPO 于正常甲狀腺組織內高表達，呈中等或強陽性，在甲狀腺乳頭狀癌內呈弱陽性或陰性。相關文獻顯示，TPO 陰性表達為診斷甲狀腺乳頭狀癌的可靠依據[18]。本研究中，TPO 在診斷甲狀腺癌的敏感性及陰性預測值分別為94.29%、97.01%，均較高。

綜上所述，甲狀腺細針穿刺液基細胞學Ⅲ類患者CK19、Galectin-3、HBME-1、TPO 抗體檢測可顯著提升細胞學診斷效能，有較大的臨床應用價值。