淡水魚中多獸藥殘留狀況及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

劉衛(wèi)娟，管 理，賈潤(rùn)芳，楊幸子，王靜靜

（咸陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，陜西咸陽(yáng) 713200）

磺胺類和喹諾酮類藥物是一類人工合成的抗菌藥，因其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、抗菌譜廣主要用于預(yù)防和治療泌尿生殖系統(tǒng)和呼吸道細(xì)菌感染等疾病[1]。目前水產(chǎn)養(yǎng)殖常在飼料中添加藥物，但過(guò)量使用藥物會(huì)造成嚴(yán)重的獸藥殘留問(wèn)題[2]。該類藥物會(huì)給人體健康帶來(lái)巨大的風(fēng)險(xiǎn)，因此開(kāi)展獸藥殘留檢測(cè)和健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)工作十分必要[3]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品與試劑

采集黑魚、草魚、鯽魚、鯉魚、江團(tuán)共計(jì)100 份，取其皮和肉進(jìn)行均質(zhì)，冷凍保存；甲醇、乙腈、甲酸、正己烷（色譜純，德國(guó)Merck 公司）；超純水系統(tǒng)（德國(guó)Millipore公司）；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑、磺胺二甲異噁唑、磺胺甲噻二唑、磺胺二甲基嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、磺胺鄰二甲氧嘧啶-D3、磺胺間二甲氧嘧啶-D6、恩諾沙星-D5和環(huán)丙沙星-D8（美國(guó)CATO 公司）。

1.1.2 儀器與設(shè)備

1290 Infinity II-6470B 型高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent 公司）；Poroshell 120 EC-C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.7 μm，美國(guó)Agilent 公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品提取與凈化

樣品解凍恢復(fù)至室溫，稱取試樣5.0 g 于50 mL離心管中，準(zhǔn)確加入50 μL 1 μg·mL-1的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液，渦旋混合并避光放置10 min。加入10 g無(wú)水硫酸渦旋混勻，再加入20 mL 1%甲酸乙腈渦旋混合1 min，超聲波提取10 min。10 000 r·min-1冷凍離心5 min，取上清液于50 mL 梨形瓶中。用20 mL 1%甲酸乙腈重復(fù)提取一次，合并提取液，于40 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。加入1.0 mL 20%甲醇溶液溶解殘留物，再加入2.0 mL 正己烷除脂凈化，取下層清液過(guò)0.2 μm 濾膜，按照《水產(chǎn)品中17 種磺胺類及15 種喹諾酮類藥物殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（農(nóng)業(yè)部1077 號(hào)公告-1-2008）進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制。用甲醇溶解各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制100 μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇溶解各內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)配制100 μg·mL-1混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于冰箱冷凍避光保存，有效期6 個(gè)月。

（2）混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線配制。用甲醇逐級(jí)稀釋儲(chǔ)備液制備1 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液和混合標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)標(biāo)工作液，用甲醇稀釋成濃度分別為0.01 μg·mL-1、0.02 μg·mL-1、0.05 μg·mL-1、0.10 μg·mL-1、0.15 μg·mL-1、0.20 μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，內(nèi)標(biāo)濃度為0.05 μg·mL-1，臨用現(xiàn)配。

1.2.3 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》（GB 31650—2019）[4]的相關(guān)規(guī)定，魚中磺胺類藥物（獸藥原型之和）的最大殘留限量為100 μg·kg-1，恩諾沙星（恩諾沙星和環(huán)丙沙星之和）的最大殘留限量為100 μg·kg-1。

對(duì)于未檢出的樣品，依據(jù)《國(guó)家食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告》對(duì)獸藥檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行處理時(shí)，若有≤60%的檢測(cè)結(jié)果實(shí)測(cè)值低于方法LOD，評(píng)估時(shí)均賦予1/2 LOD；若有≥60%的檢測(cè)結(jié)果實(shí)測(cè)值低于方法LOD，評(píng)估時(shí)賦予LOD 值[5-6]。

1.2.4 膳食暴露評(píng)估

膳食暴露評(píng)估是衡量由動(dòng)物源食品引入獸藥殘留量所帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)的有效方法之一。本文采用食品安全指數(shù)法對(duì)磺胺類和恩諾沙星的殘留量進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，計(jì)算公式為

式中：EDI為每日化合物的累計(jì)暴露量，μg·（kg bw）-1；Ci為樣品中化合物的殘留水平，μg·kg-1；X為日均攝入量，g·d-1；bw為人群平均體重，kg；ADI為日允許攝入量，μg·kg-1；IFS為化合物的食品安全指數(shù)。

《中國(guó)居民膳食指南（2022）》[7]建議每天攝入 魚 肉120 ～200 g，式（1）中X以200 g·d-1計(jì)；查 詢GB 31650—2019， 恩 諾 沙 星 的ADI 值 為6.2 μg·（kg bw）-1， 磺 胺 類 藥 物 的ADI 值 為50 μg·（kg bw）-1；成人平均體重按60 kg 計(jì)算。IFS數(shù)值越低表示食品安全風(fēng)險(xiǎn)越低，當(dāng)IFS ＜1 時(shí)，表示化合物對(duì)食品安全沒(méi)有影響；當(dāng)IFS=1 時(shí)，表示化合物對(duì)食品安全的影響可以接受；當(dāng)IFS ＞1 時(shí)，表示化合物對(duì)食品安全的影響不可接受。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍、定量限、回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

將配制的混合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線溶液進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，以化合物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值為縱坐標(biāo)，化合物與內(nèi)標(biāo)物的濃度比值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以10 倍信噪比作為方法的定量限（LOQ）。稱取陰性試 樣，添加2.0 μg·kg-1、20.0 μg·kg-1、100.0 μg·kg-13 個(gè)水平標(biāo)準(zhǔn)溶液，冷藏過(guò)夜，提取凈化，重復(fù)測(cè)定7 次，進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各化合物線性方程、定量限、平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

由表1 可知，各化合物在0.01 ～0.20 μg·mL-1線性良好，相關(guān)系數(shù)均≥0.998，LOQ 為0.05 ～2.00 μg·kg-1，平均加標(biāo)回收率為75.3%～107.7%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.2%～9.9%，滿足獸藥殘留檢測(cè)要求。

2.2 總體檢測(cè)情況

本研究檢測(cè)的100 份魚中，共檢出3 種化合物，分別為磺胺二甲異噁唑、恩諾沙星和環(huán)丙沙星，其他磺胺類化合物均未檢出。共有54 份樣品檢出了磺胺類、恩諾沙星藥物殘留，總檢出率為54%；有3 份樣品同時(shí)檢出恩諾沙星（恩諾沙星與環(huán)丙沙星，以下簡(jiǎn)稱恩諾沙星）和磺胺類藥物，占總體檢出率的5.6%。其中共檢出恩諾沙星53 份，超出最大殘留限量1 份；共檢出磺胺類4 份，均未超出最大殘留限量，檢出率分別為53%和4%，超標(biāo)率分別為1%和0%。從檢出的殘留水平來(lái)看磺胺類的檢出濃度在0 ～28 μg·kg-1，平均值為2.85 μg·kg-1；恩諾沙星的檢出濃度在0 ～588 μg·kg-1，平均值為13.0 μg·kg-1。

檢測(cè)結(jié)果顯示，淡水魚中恩諾沙星的使用率較高，個(gè)別樣品的檢出含量超出最大殘留限量，其余樣品檢出含量在限量范圍內(nèi)。養(yǎng)殖戶為了追求經(jīng)濟(jì)利益，在未達(dá)到休藥期就開(kāi)始銷售，導(dǎo)致恩諾沙星的超標(biāo)問(wèn)題突出，故恩諾沙星是需要重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的對(duì)象。

2.3 獸藥殘留健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

市售淡水魚中磺胺類和恩諾沙星食品安全指數(shù)結(jié)果見(jiàn)表2。每日攝入量的平均值和最大值均小于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制定的ADI。市售淡水魚中磺胺類和恩諾沙星IFS 均＜1，說(shuō)明磺胺類藥物和恩諾沙星的暴露量均為可接受。

表2 咸陽(yáng)市市售淡水魚獸藥食品安全指數(shù)

3 討論

檢測(cè)結(jié)果顯示，磺胺類化合物除磺胺二甲異噁唑有檢出外，其他磺胺類化合物均未檢出，檢出率僅為4%且都未超過(guò)限量，其IFS 遠(yuǎn)小于1。恩諾沙星的檢出率為53%，檢出率偏高。每日攝入量的平均值和最大值為0.043 μg·（kg bw）-1和1.96 μg·（kg bw）-1，小于GB 31650—2019 中制定的ADI，IFS 也小于1。說(shuō)明咸陽(yáng)市居民淡水魚類膳食中磺胺類和恩諾沙星的暴露量總體安全，即使偶爾單次淡水魚的攝入量有所增加，仍屬于安全范圍。

喹諾酮類藥物是濃度依賴性抗生素，恩諾沙星和環(huán)丙沙星由于很好的吸收率和穩(wěn)定性，其停藥期較長(zhǎng)。而養(yǎng)殖戶為了治療水生動(dòng)物的疾病、促進(jìn)魚的日增量和飼料轉(zhuǎn)化率濫用獸藥，未達(dá)到休藥期提前售賣，導(dǎo)致個(gè)別樣品超標(biāo)的現(xiàn)象存在。這些獸藥會(huì)通過(guò)食物鏈進(jìn)入人體，對(duì)人體健康產(chǎn)生危害，增加人體耐藥性和抗藥性。為保證飲食安全，建議人們選購(gòu)飼養(yǎng)周期短、體內(nèi)有毒有害物質(zhì)蓄積少的魚類；此外，要加強(qiáng)養(yǎng)殖戶規(guī)范合理使用獸藥的意識(shí)，監(jiān)管部門及時(shí)監(jiān)督追溯。