菊花珍品梨香菊離體快繁技術研究

邵會會

摘要以梨香菊的幼嫩葉片為外植體，MS為基本培養基，研究了不同植物生長調節劑及基本培養基對其愈傷組織誘導、增殖、分化及叢生芽增殖和生根的影響，旨在建立離體快繁體系。結果表明：用MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L作為培養基可以較快地建立間接再生體系，誘導愈傷組織；愈傷組織增殖的最佳培養基為MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L；MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L為最佳的分化培養基，分化的芽數較多，芽體健壯飽滿；MS+6-BA 1.0 mg/L最適合叢生芽增殖，增殖系數高，芽體粗壯、質量好；1/2MS+NAA 1.0 mg/L培養基中梨香菊生根最好。

關鍵詞梨香菊；組培；增殖；分化

中圖分類號S682.1文獻標識碼A

文章編號0517-6611（2023）11-0070-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.11.016開放科學（資源服務）標識碼（OSID）：

Study on the Technique of in vitro Rapid Propagation of Chrysanthemum curiosa Lixiangju

SHAO Hui-hui（Garden Institute of Tangshan，Tangshan，Hebei 063000）

AbstractThe leaves of Lixiangju were used as explant， plant growth regulators and basic mediums were studied on callus induction， multiplication， differentiation and shoot multiplication，rooting and growth.The results showed that use MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L as culture medium to establish indirect regeneration system and induce callus more faster and better. MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L was the best culture medium for callus multiplication. MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L was the best culture medium for callus differentiation，the number of buds was more than some other treats，buds stronger and fuller.The vigor of buds was best. When used MS+6-BA 1.0 mg/L as culture medium for shoot multiplication and growth， multiplication coefficient higher，the length of buds longer significantly than other treats. The best rooting medium was 1/2MS+NAA 1.0 mg/L.

Key wordsLixiangju;Tissue culture;Multiplication;Differentiation

梨香菊又名白梨香，花色潔白、素雅，因具有酷似鴨梨的香味而得名。輕輕晃動花頭就有酷似鴨梨的香氣撲鼻而來，更有“盈手生香”的說法，中花期前香味較濃，后隨花朵綻放程度的提高香味逐漸變淡，栽培歷史達數百年，是目前中國數千個菊花品種中唯一一個具有特殊香味的菊花品種［1］。梨香菊的花和莖中含有高濃度的揮發油，是普通藥用菊花的3～10倍，其綠原素和黃酮類成分含量也較高，是目前我國藥用菊花中黃酮類成分含量最高的菊花品種之一。因此，其具有較高的保健、藥用作用及經濟價值。植物組織培養的研究歷史可以追溯到19世紀中期，其發展的理論基礎是植物細胞全能性及植物生長調節劑的應用［2］。采用組織培養的方法對植物進行離體培養，不僅繁殖系數高、繁殖速度快，而且還可以進行品種的脫毒復壯、種質資源的離體保存等研究。長期以來，梨香菊均由扦插和分株的方式進行繁殖，品種特性有不同程度的退化，而目前國內外關于梨香菊的相關研究尚鮮見報道。筆者選用梨香菊幼嫩葉片為外植體材料，旨在建立一套梨香菊的高效再生體系，為今后其脫毒育苗、育種及其他方面的研究工作提供理論和實踐依據。

1材料與方法

1.1試驗材料梨香菊幼嫩葉片。

1.2試驗方法

1.2.1無菌體系的建立。選取梨香菊健壯的幼嫩葉片，流水沖洗20 min，在無菌條件下用75%乙醇消毒30 s，再用無菌水沖洗2次，然后用1.0% NaClO溶液消毒5 min，最后用無菌水沖洗4～5次，將消毒后的葉片于接種盤內切去四周后，再切成0.5 cm×0.5 cm的小塊，接種在愈傷組織誘導培養基上。

1.2.2愈傷組織增殖、分化培養。將獲得的梨香菊愈傷組織切成1.0 cm×1.0 cm的小塊，接種于愈傷組織增殖、分化培養基中，25 d后統計增殖、分化系數，實時觀察其生長狀況并記錄。

1.2.3叢生苗增殖培養。將分化培養獲得的無菌苗切成單株，分別接種于增殖培養基中，觀察側芽長勢，20 d后統計增殖系數。

1.2.4試管苗生根培養。將增殖培養獲得的無菌苗接種于生根培養基中，觀察根系生長情況，20 d后統計生根率。

1.3試驗條件以上試驗均以MS為基本培養基［3］，添加瓊脂7 g/L、蔗糖30 g/L，pH 5.8，每處理接種10瓶，每瓶接種3塊（株），光照強度2 000 lx，光周期12 h/8 h，溫度（25±1） ℃。

1.4數據分析采用Excel進行數據計算整理，SPASS 16.0進行方差分析，LSD進行多重比較（P＜0.05）。

增殖系數=增殖后的愈傷組織重量（側芽數）/接種時愈傷組織重量（芽數）

再生率=再生出不定芽的愈傷組織數/接種愈傷組織數×100%

生根率=生根芽數/接種芽數×100%

2結果與分析

2.1無菌體系的建立將梨香菊葉片消毒后接種在MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L的培養基上，發現接種5 d后葉片明顯膨起、變大，顏色淺綠，7 d時葉片表面有透明凸起和絲狀體，葉片邊緣有愈傷組織出現，20 d時整塊葉片分化形成較大的愈傷組織（圖1）。

2.2不同植物生長調節劑對梨香菊愈傷組織增殖的影響由表1可知，低濃度6-BA搭配高濃度的NAA對梨香菊愈傷組織增殖具有顯著的促進作用，6-BA與NAA的濃度比值為1∶2時增殖系數明顯增高，濃度比為1∶1時增殖系數明顯降低。當6-BA 1.0 mg/L、NAA 2.0 mg/L時愈傷組織增殖系數為4.5，但愈傷組織顏色暗黃，有褐化跡象，活性較差，當6-BA 0.5 mg/L、NAA 1.0 mg/L時，愈傷組織增殖系數為4.7，顯著高于其他處理，且愈傷組織黃綠色、質地松脆，表面有小顆粒狀凸起（圖2），活性好。因此，該處理為梨香菊愈傷組織增殖最佳植物生長調節劑配比組合。

2.3不同植物生長調節劑對梨香菊愈傷組織分化的影響由表2可知，當NAA濃度一定時，不同濃度6-BA對梨香菊愈傷組織分化有明顯的影響，隨著6-BA濃度的增加，再生率不斷提高，分化的芽數增加，側芽長勢逐漸變好，當6-BA濃度為4.0 mg/L時，愈傷組織分化情況顯著高于其他處理，但不定芽矮小、細弱，部分芽發生了玻璃化，整體分化情況較差。此外，添加低濃度的NAA對愈傷組織分化有顯著的促進作用，不定芽葉色鮮綠，生長健壯（圖3）。因此，梨香菊愈傷組織分化的最優培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L。

2.4不同植物生長調節劑對梨香菊叢生芽增殖的影響由表3可知，添加NAA對梨香菊側芽的增殖具有一定的抑制作用，不同濃度6-BA對梨香菊的增殖有明顯的影響，隨著6-BA濃度的增大，增殖系數和側芽長勢均出現不同程度的先增加后降低的跡象，6-BA為2.0 mg/L、NAA為0時，增殖系數最高，達9.5，但芽的長勢不強，當6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA為0時，雖然增殖系數有所降低，但叢生芽健壯飽滿，葉色鮮綠，葉片較寬，側芽長度顯著大于其他處理（圖4）。因此，梨香菊叢生芽增殖的最佳培養基為MS+6-BA 1.0 mg/L。

2.5不同濃度NAA和基本培養基對梨香菊試管苗生根的影響培養5 d時觀察到試管苗基部有根系發出，后隨培養時間的增加根系不斷伸長、長粗。由表4可知，隨MS培養基中無機含量的逐漸降低，梨香菊的生根效果先升高后降低，1/2MS培養基中生根效果最好。隨著NAA濃度的升高，生根效果先增加后降低，1/2MS+NAA 1.0 mg/L培養基中梨香菊生根率100%，平均根數為7.1，平均根長7.36 cm，根系粗壯，植株生長健壯（圖5），顯著優于其他處理，生根效果最好。

3結論與討論

植物組織培養的理論基礎是植物細胞全能性，這種全能性是植物細胞的基本屬性，但也只是一種可能性，把這種全能性表現出來植物細胞需經歷2個過程［4］，一是脫分化，即離體培養條件下生長的細胞、組織或器官經過細胞分裂或不分裂，逐漸失去原來的結構和功能而恢復分生狀態，形成無組織結構的細胞團或愈傷組織或未分化細胞特性的細胞的過程［2］；二是再分化，即已經脫分化的細胞在特定條件的刺激下，經過器官發生或胚狀體途徑形成完整植株的過程［5］。該研究以梨香菊葉片為外植體，探索了梨香菊細胞脫分化、再分化的培養條件，建立了梨香菊間接再生體系。

目前，關于菊花組培方面的研究較多，馬麗華［6］研究認為，菊花“晚熟紅”在1/2MS+NAA 0.1 mg/L培養基中產生的須根數量多且根系比較粗壯；周楊［7］研究認為，“中國紅”葉片最適分化培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L；周洲等［3］研究認為，小黃菊不定芽誘導的最佳培養基為MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L；張紅［8］研究認為，MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L最適合綠牡丹的增殖生長。該研究得出的結論與前人的研究略有不同；汪曉沙等［9］研究認為，在6-BA 1.0 mg/L培養基中添加0.1 mg/L NAA菊花叢生苗增殖效果最好，而該研究發現，一定濃度的6-BA培養基中添加NAA對梨香菊叢生苗的增殖具有一定的抑制作用；岳圓圓等［10］研究認為，菊花在3/4MS培養基中生根效果最好，在1/2MS培養基中試管苗地上和地下部分長勢均較弱，該研究發現，梨香菊試管苗在含一定濃度NAA的1/2MS培養基中生根效果最好。

參考文獻

［1］ 鄭志華，朱曉華.淺談“梨香菊”的栽培要點［J］.中國園林，1994，10（2）：16.

［2］ 鞏振輝，申書興.植物組織培養［M］.北京：化學工業出版社，2007.

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［4］ WHITE P R.A handbook of plant tissue culture［J］.Soil science，1943，56（2）：151.

［5］ 程越.菊花腦再生體系建立的研究［D］.南京：南京農業大學，2014.

［6］ 馬麗華.菊花高效不定芽再生體系建立及品種間RAPD分析［D］.太原：山西大學，2010.

［7］ 周楊.菊花再生及遺傳轉化體系的建立［D］.沈陽：沈陽農業大學，2016.

［8］ 張紅.菊花珍品綠牡丹的組培技術研究［J］.北方園藝，2008（3）：195-196.

［9］ 汪曉沙，曾麗，彭勇政，等.不同菊花品種的組培擴繁技術［J］.上海交通大學學報（農業科學版），2013，31（2）：19-23，29.

［10］ 岳圓圓，陳慧，全英杰，等.菊花“紅粉”ד延紅”雜交種組培快繁技術［J］.延邊大學農學學報，2019，41（1）：47-50.