分散固相萃取法-氣相色譜-質譜法測定含葉綠素較多蔬菜中148種農殘化合物

摘 要：本實驗采用分散固相萃取方法對含葉綠素較多的綠色蔬菜進行前處理，并利用氣相色譜-質譜法同時測定148種農藥化合物。結果表明，148種農藥化合物在5～200 ng·mL-1濃度下線性關系良好，相關系數在0.988 5～0.999 6，回收率在60.7%～129.1%，相對標準偏差為2.1%～12.8%。

關鍵詞：分散固相萃取法；農藥化合物；回收率；菠菜

Abstract： In this study， dispersive solid phase extraction was used to pretreat green vegetables with high chlorophyll content， and 148 pesticide compounds were determined by gas chromatography-mass spectrometry. The results showed that 148 pesticide compounds had good linear relationships at 5～200 ng·mL-1 concentrations， the correlation coefficients were 0.988 5～0.999 6， the recoveries were 60.7%～129.1%， and the relative?standard deviations were 2.1%～12.8%.

Keywords： dispersed solid phase extraction; pesticide residues; rate of recovery; spinach

農藥殘留是評價食品安全與否的重要指標，但農藥的使用也是保證農業增產增收的重要手段[1]。農作物的病害蟲害多樣而復雜，這就需要使用不同功效的農藥進行防治。而為了降低種植過程中農藥的噴施成本，現代農藥多采用復配技術，通過一次噴灑來實現防治多種病蟲害的效果[2-3]。為確保食品安全，需要對農藥殘留檢測方法提出更高的要求[4]。氣相色譜-質譜法因靈敏度高、分離選擇性效果好而被廣泛應用于農藥殘留檢驗中[5]。但由于復配農藥成分復雜，在同時檢測多組分農藥殘留時，還要去除基質干擾，確保多種化合物同時滿足其標準曲線現行要求及準確性的要求，所以前處理方法的選擇顯得尤為重要[6]。在上機檢測前，需要通過前處理手段對試樣進行提取、凈化等前處理，然后再上機檢測[7]。分散固相萃取法由于具有對農藥化合物回溶性好、不需要活化處理、操作簡單等優點，被廣泛用于前處理過程中[8-9]。為考察分散固相萃取法對消除樣品基質干擾的有效性，本實驗選取葉綠素含量較高的菠菜作為空白基質，采用QuEChERS前處理方法，通過加標回收實驗，對擬除蟲菊酯、有機磷、氨基甲酸酯、有機氯等148種農藥殘留檢測結果的線性相關性、回收率和準確度進行研究。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

菠菜，市售。

提取鹽（4 g MgSO4、1 g檸檬酸鈉、1 g NaCl、0.5 g檸檬酸氫二鈉）；凈化試劑（900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠）；乙腈（色譜純）；乙酸乙酯（色譜純）；0.22 μm尼龍濾膜。

1.2 儀器設備

島津GCMS-TQ8050氣相色譜串聯質譜儀，日本島津公司；BSA124S-CW分析天平（感量0.000 1 g），德國賽多利斯；N1型氮吹儀，屹堯科技；Heraeus Multifuge X1R離心機，賽默飛世爾科技有限公司；A11型勻漿器，德國IKA。

1.3 標準溶液配制

1.3.1 混合標準中間液（1.0 μg·mL-1）

準確吸取10 μg·mL-1的混合標準溶液0.50 mL于5 mL容量瓶，加入乙酸乙酯溶解，稀釋至刻線處，配制成濃度為1.0 μg·mL-1的農藥化合物混合標準中間液。

1.3.2 內標溶液的配制

（1）環氧七氯內標標準貯備液（1.0 mg·mL-1）。準確稱取環氧七氯10.00 mg標準品于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解，稀釋至刻度，配制成濃度為1.0 mg·mL-1的環氧七氯內標標準貯備液。

（2）環氧七氯內標使用液（5.0 μg·mL-1）。準確移取1.0 mg·mL-1環氧七氯內標標準貯備液0.050 mL于10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，配制成濃度為5.0 μg·mL-1的環氧七氯內標使用液。

1.3.3 混合標準曲線溶液的制備

準確移取0.05 mL、0.10 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL的混合標準中間液（1.0 μg·mL-1），用乙酸乙酯定容至10 mL的容量瓶中，配成5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的混合標準系列工作液。

1.3.4 基質標準曲線的制備

準確移取以上各濃度標準系列工作液1 mL，添加至經提取、凈化、氮氣吹干步驟處理的5份空白樣品殘渣中，再加入濃度為5.0 μg·mL-1的環氧七氯內標使用液20 μL，渦旋均勻，制得濃度分別為5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的系列基質標準溶液。

以經內標物定量離子峰面積校正過的化合物定量離子峰面積為縱坐標、混合標準溶液質量濃度和內標物質量濃度的比值為橫坐標，繪制標準曲線。

1.4 前處理（QuEChERS法）

稱取10 g均質后試樣于50 mL塑料離心管中（精確至0.01 g），加入10 mL乙腈、4 g MgSO4、1 g檸檬酸鈉、1 g NaCl、0.5 g檸檬酸氫二鈉及1顆陶瓷均質子，劇烈振蕩1 min，4 200 r·min-1離心5 min。取上清液6 mL，加到內含900 mg MgSO4、150 mg D18C、150 mg乙二胺-N-丙基硅烷化硅膠的離心管中。渦旋1 min，4 200 r·min離心5 min，準確吸取1 mL上清液于試管中，40 ℃下水浴氮吹至近干。加入20 μL濃度為5 μg·mL-1的環氧七氯內標使用液，1 mL乙酸乙酯復溶，渦旋，過微孔濾膜，用于測定。

1.5 儀器條件

1.5.1 色譜條件

色譜柱：SH-Rtx-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；柱溫：40 ℃保持1 min；以40 ℃·min-1升溫至120 ℃，保持0 min；以5 ℃·min-1升溫至240 ℃，保持0 min；以12 ℃·min-1升溫至300 ℃，保持10 min；進樣口溫度：280 ℃；載氣速率（高純氦氣）：36.1 cm·s-1恒線速。

1.5.2 質譜條件

接口溫度：280 ℃；離子源溫度：230 ℃；離子源：EI源；掃描方式MRM[10]；進樣量：1 μL。

1.6 回收率及精密度實驗方法

準確稱取5.000 g樣品6份，分別加入混合標準中間液（1.0 μg·mL-1）0.10 mL，經過提取、QuEChERS凈化過程，同樣品處理，進樣，測定回收率，計算RSD值。

2 結果與分析

148種化合物標準曲線、線性相關性、加標回收率及RSD值結果見表1。

由表1可知，標準曲線線性相關性均滿足實驗要求，148種化合物的曲線方程的相關系數均達到0.98的要求。其中，141種化合物曲線方程的相關系數≥0.995 0；8種化合物的相關系數在0.988 5～0.994 7。

148種化合物的加標回收率在60.7%～129.1%，其中8種化合物的加標回收率在60.7%～78.7%，占比較少，回收率最低值為60.7%；97種化合物的回收率在81.9～110%，回收效果好；31種化合物的回收率在110.1%～119.5%，回收率處在高水平，可以考慮為萃取成分帶來的干擾和影響所致；12種化合物的回收率超過了120%，超出回收率誤差范圍，會給實驗結果準確性帶來影響，這12種化合物中（二溴磷、對氧磷、抑霉唑、地胺磷、硫環磷、苯草醚、三氟硝草醚、苯硫磷、噠嗪硫磷、氟丙菊酯、速滅磷和脫葉磷），有7種為有機磷化合物，可見該前處理法對部分磷基化合物的回收率有偏高影響。

148種化合物的精密度在2.1%～12.8%，RSD值較小，結果重現性好。

3 結論

通過結果分析發現，分散固相萃取前處理方法在提取方面克服了固相萃取法的強吸附、不易洗脫的缺點；但對少部分有機磷成分存在一定的干擾性。結合《實驗室質量控制規范 食品理化檢測》（GB 27404—2008）要求，該前處理方法適用于蔬菜中多農藥殘留化合物檢驗。

參考文獻

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基金項目：遼寧省檢驗檢測認證中心青年人才創新創業項目（SC20190117）。