小反芻獸疫和山羊痘活疫苗聯合免疫效果評價研究

張金學，董 偉*，王建軍，許開云，張劍霞，盧 瑛

（ 1. 武威市畜牧獸醫科學研究院，甘肅 武威 733000 ； 2. 武威普康養殖有限公司，甘肅 武威 733000 ）

小反芻獸疫和羊痘是國家規定的一類傳染病，均是由病毒引起的急性接觸性傳染病。目前生產中沒有治療此病的特效藥物，加之兩種病的發病率和死亡率很高，可對養羊業造成巨大的經濟損失，嚴重影響肉羊產業的健康發展[1-2]。因此，最有效、最經濟、最主要的防控小反芻獸疫和羊痘疫病發生的措施仍是疫苗免疫[3-4]。根據近幾年武威市動物疫病流行情況，生產中要求對小反芻獸疫、口蹄疫、布魯氏菌病、羊痘實行強制免疫。若按照傳統方式免疫，基層畜牧獸醫工作者的工作量和勞動強度很大，不僅增加勞動成本，降低工作效率，而且多次免疫注射會增加羊免疫應激，降低動物福利水平，還會影響羊肉品質，進而影響人類健康[5]。因此，為探索和創新肉羊疫苗綜合免疫優化程序，進一步提升防疫工作效率，本試驗特開展小反芻獸疫和羊痘疫苗的聯合免疫接種研究，為養殖場制定科學、合理、高效的疫苗免疫程序提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

本試驗在甘肅省武威市涼州區武威普康養殖有限公司進行。

1.2 試驗材料

1.2.1 試驗動物

試驗選取生長發育良好、無疾病、體重相近、未進行疫苗免疫、2 月齡斷奶2 周的健康湖羊90 只，斷奶體重均在16.2～17.7 kg。

1.2.2 試驗疫苗

山羊痘活疫苗（批號2021005-1）和小反芻獸疫活疫苗（批號2021035-2）均購自新疆天康生物制藥有限公司。試驗所用疫苗均在有效期內。

1.2.3 檢測試劑

小反芻獸疫病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，購自青島立見診斷技術發展中心；羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒，購自中國農業科學院蘭州獸醫研究所。

1.3 試驗方法

1.3.1 試驗設計

參試羊按體重分為3 組，每組30 只，各組體重差異無統計學意義（P＞0.05）。試驗組Ⅰ試驗羊僅免疫小反芻獸疫活疫苗，試驗組Ⅱ僅免疫山羊痘活疫苗，試驗組Ⅲ同時分點接種小反芻獸疫活疫苗和山羊痘活疫苗。各試驗組于疫苗免疫當日（0 d）頸靜脈采集血液樣本進行母源抗體檢測，檢測結果為陰性者方可作為試驗羊。疫苗免疫后第7、14、21、28、90、210 d頸靜脈采血，3 000 r/min離心2 min，送往實驗室進行血清抗體檢測，分析各疫苗免疫抗體水平以及兩種疫苗抗體間是否存在干擾以及干擾程度。

1.3.2 免疫方法（見表1）

表1 免疫方法Tab.1 Immune method

試驗組Ⅰ：小反芻獸疫活疫苗免疫按照說明書要求進行，滅菌生理鹽水稀釋為每頭份1.0 mL，頸部皮下注射。

試驗組Ⅱ：山羊痘活疫苗免疫按照說明書要求進行，滅菌生理鹽水稀釋為每頭份0.5 mL，尾根內側皮內注射。

試驗組Ⅲ：小反芻獸疫活疫苗和山羊痘活疫苗同時分點免疫注射，免疫途徑與劑量同試驗組Ⅰ和試驗組Ⅱ。

1.3.3 飼養管理

為減少環境、飼養管理等因素對試驗造成的影響，參試羊斷奶后全部轉入試驗羊舍，2 周后進行疫苗免疫。并由專人飼養管理，每天定時定量飼喂，自由飲水。

1.3.4 免疫副反應觀察

疫苗免疫后7 d 內，逐個觀察參試羊的免疫部位反應及精神狀態、體溫、活動、采食、飲水等情況，并進行詳細記錄，統計免疫副反應以測試使用疫苗的安全性能。一旦試驗羊出現不良反應，及時通知獸醫人員采取急救措施。

1.3.5 抗體檢測方法

1.3.5.1 小反芻獸疫抗體檢測

采用阻斷ELISA檢測小反芻獸疫病毒抗體，嚴格按照小反芻獸疫病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒說明書操作。檢測結果判定：陽性血清阻斷率（PIPC）＞60，陰性血清阻斷率（PINC）＜40，檢測結果有效，否則檢測結果無效；阻斷率（PIS）＞50，抗體陽性；PIS≤50，抗體陰性。

PIS=（100-樣本OD值/酶標抗體平均OD值）×100（1）

1.3.5.2 羊痘血清抗體檢測

采用間接ELISA檢測羊痘病毒抗體，嚴格按照羊痘間接ELISA抗體檢測試劑盒說明書操作。結果判定標準：陰性血清孔OD450nm值＜0.2，陽性血清孔OD450nm值＞0.6，檢測結果成立，否則檢測結果無效；OD450nm值≥0.25，抗體陽性；OD450nm值≤0.2，抗體陰性；0.25＞OD450nm值＞0.20，陽性可疑，重復檢測；若OD450nm值≥0.23，抗體陽性，OD450nm值≤0.23，抗體陰性。

1.4 數據統計與分析

試驗數據按照疫苗種類分類統計，結果均以抗體陽性率表示，采用SPSS 18.0 軟件單因子方差分析法進行差異性分析。P＜0.01 表示差異極顯著，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05表示差異不顯著。根據國家規定，群體免疫抗體合格率達70%以上判定為群體疫苗免疫合格。

2 結果與分析

2.1 疫苗安全性觀察結果（見表2）

表2 疫苗安全性觀察結果Tab.2 Vaccine safety observations 單位：只

由表2可知，免疫后7 d內，試驗組Ⅰ試驗羊未發現任何局部或全身不良反應。疫苗免疫后1～2 d，試驗組Ⅱ有7 只試驗羊的接種部位出現紅腫反應，于第3 d 消退；組內未出現發熱、停食、死亡現象。疫苗免疫后1～2 d，試驗組Ⅲ中4 只試驗羊的羊痘疫苗接種部位出現紅腫反應，于第3 d消退；2只參試羊有輕微發熱反應；組內未出現停食、死亡現象。

2.2 小反芻獸疫疫苗免疫抗體檢測結果（見圖1）

圖1 小反芻獸疫疫苗免疫抗體檢測結果Fig.1 Results of detection of antibody to PPR vaccine

由圖1可知，試驗羊在疫苗免疫后第7 d均產生抗體，單免（試驗組Ⅰ）小反芻獸疫疫苗抗體陽性率達56.7%，極顯著低于聯合免疫組（試驗組Ⅲ，小反芻獸疫疫苗抗體陽性率達83.3%）（P＜0.01）。免疫后第14、21、28 d，試驗組Ⅰ和試驗組Ⅲ的抗體陽性率分別為73.3%、90.0%、100.0%和93.3%、100.0%、100.0%，抗體水平整體呈上升趨勢；免疫后14 d 時試驗組Ⅲ試驗羊抗體水平極顯著高于試驗組Ⅰ（P＜0.01），21 d 時試驗組Ⅲ抗體水平顯著高于試驗組Ⅰ（P＜0.05），28 d 之后兩組小反芻獸疫疫苗抗體合格率差異不顯著（P＞0.05）。

試驗組Ⅰ抗體水平在第28 d 達到峰值（100%），試驗組Ⅲ在21 d 達到峰值（100%）；免疫后210 d 時，兩組抗體水平均有所下降，試驗組Ⅰ為90.0%，試驗組Ⅲ為93.3%，但均達到國家規定的疫苗免疫合格率（70%）標準。

2.3 羊痘疫苗免疫抗體檢測結果（見圖2）

圖2 羊痘疫苗免疫抗體檢測結果Fig.2 Results of antibody detection of sheep pox vaccine

由圖2可知，參試羊在疫苗免疫后第7 d均產生抗體，單免（試驗組Ⅱ）羊痘疫苗抗體陽性率達70%，極顯著高于聯合免疫（試驗組Ⅲ，羊痘疫苗抗體陽性率達30%）（P＜0.01）。免疫后第14、21、28 d，試驗組Ⅱ和試驗組Ⅲ的抗體陽性率分別為83.3%、100.0%、100.0% 和53.3%、76.7%、90.0%，表明抗體水平整體呈上升趨勢；第14 d 和21 d 時試驗組Ⅱ抗體水平極顯著高于試驗組Ⅲ（P＜0.01），28 d時試驗組Ⅱ抗體水平顯著高于試驗組Ⅲ（P＜0.05）。

試驗組Ⅱ抗體水平在第21 d達到峰值（100.0%），試驗組Ⅲ在28 d達到峰值（90.0%）；90 d時，兩組抗體水平均出現下降趨勢；到210 d 時試驗組Ⅱ羊痘疫苗抗體合格率為76.7%，達到國家規定的疫苗免疫合格率（70%）標準以上，試驗組Ⅲ為63.3%，未達到國家標準。

3 討論

疫苗免疫后，動物機體受到刺激會產生相應的免疫應答反應，其產物特異性抗體可抵抗細菌、病毒等病原微生物對機體造成的感染。實際肉羊生產中，常規免疫的疫苗種類有羊痘、小反芻獸疫、三聯四防、口蹄疫、布魯氏菌疫苗，羊群單獨免疫小反芻獸疫疫苗或羊痘疫苗以及兩種疫苗同時免疫所生產的抗體消長規律如何，兩種疫苗之間是拮抗作用還是促進作用尚無相關研究報道。

本研究選擇的試驗羊為2月齡斷奶2周且未進行任何疫苗免疫的健康羊群，且羊痘和小反芻獸疫抗體檢測均為陰性，避免了疫苗免疫抗體的干擾以及母源抗體的影響。研究結果表明，羊痘和小反芻獸疫疫苗單苗免疫和聯合分點免疫臨床癥狀無明顯差異，各組試驗羊均未出現發熱、厭食、死亡現象。各組試驗疫苗免疫試驗羊后均在第7 d產生抗體，21 d、28 d 左右抗體陽性率達到高峰，90 d 后出現不同程度的下降趨勢；兩種疫苗單獨免疫試驗羊后，疫苗抗體合格率到210 d 時均在75%以上，達到國家規定的疫苗免疫合格率70%以上的標準。吳婷等[6]研究結果顯示，湖羊進行羊痘疫苗免疫后第28 d 時，血清抗體陽性率達到高峰（99.1%），210 d時抗體陽性率為79.1%，抗體水平合格率達到國家規定的免疫合格標準。田海芹等[7]研究表明，小反芻獸疫疫苗免疫試驗羊28 d 時，抗體陽性率達100%，168 d時抗體陽性率為95.65%。上述研究結果與本研究結果一致。

本研究中，兩種疫苗聯合分點免疫參試羊后，小反芻獸疫疫苗免疫效果比單獨免疫效果好，免疫抗體陽性率在第7、14 d時極顯著高于單獨免疫，21 d時顯著高于單獨免疫；28 d之后兩組抗體水平差異不顯著，到210 d時抗體水平有所下降，但均達到國家規定的疫苗免疫合格率70%以上；而聯合分點免疫后的羊痘疫苗免疫效果比單獨免疫效果差，免疫抗體陽性率在第7、14、21 d 時極顯著低于單獨免疫，28 d 時顯著低于單獨免疫；免疫后90 d 時兩組抗體水平均出現下降趨勢，到210 d時，聯合免疫組試驗羊抗體合格率僅為63.3%，未達到國家標準。張海霞等[8]研究表明，小反芻獸疫、山羊痘二聯活疫苗對羊的免疫效果不理想，疫苗免疫后僅有小反芻獸疫抗體存在，羊痘抗體不存在。也有研究表明，小反芻獸疫疫苗和羊痘疫苗同時分點免疫羊后，羊痘疫苗的抗體陽性率比小反芻獸疫疫苗抗體陽性率低約15%[5,9-10]。上述研究結果與本研究結果顯示的兩種疫苗聯合分點免疫參試羊的免疫抗體消長趨勢一致。徐雅萍等[11]、張大俊[12]研究表明，小反芻獸疫疫苗和羊痘疫苗同時分點注射后7～210 d，兩種疫苗的抗體合格率均在75%以上，達到國家標準，與本研究結果不一致。

本研究結果表明，羊痘疫苗與小反芻獸疫疫苗聯合分點免疫，羊痘疫苗可促進小反芻獸疫疫苗的免疫效果，而小反芻獸疫疫苗卻抑制了羊痘疫苗的免疫效果，且在免疫后210 d時其抗體合格率未能達到國家標準。小反芻獸疫疫苗與山羊痘疫苗均屬于弱毒疫苗，當兩種病毒同時感染宿主時，病毒間可能存在相互干擾的作用，一種病毒可抑制另一種病毒復制；或病毒與宿主細胞之間產生相互影響，從而導致兩種弱毒疫苗同時免疫宿主時產生相互干擾的現象[13-14]。

4 結論

通過綜合分析，羊痘疫苗與小反芻獸疫疫苗聯合分點接種的免疫操作程序無法在實際生產中大范圍推廣，若養殖場（戶）剛發生小反芻獸疫疫情或受到小反芻獸疫疫情威脅時，可建議養殖場（戶）采用羊痘疫苗和小反芻獸疫疫苗聯合分點接種的免疫操作程序，以增強小反芻獸疫疫苗的免疫效果。本研究結果同時也為有效預防和控制武威市小反芻獸疫疫情發生，制定合理的肉羊疫苗免疫程序提供科學依據。