重慶大學城區域高危型人乳頭瘤病毒感染與陰道微生態失衡的關系研究*

王曉亮,李可欣,蒲小露,薛建江,李美玲

1.重慶醫科大學附屬大學城醫院醫學科學研究中心,重慶 401331;2.重慶醫科大學附屬大學城醫院醫學檢驗科,重慶 401331;3.浙江醫院醫學檢驗科,浙江杭州 310030

宮頸癌的發生是一個由多因素共同參與調控的復雜病變過程,全球每年有超過50萬例女性被診斷患有宮頸癌,有27萬多例患者因該病死亡[1]。高危型人乳頭瘤病毒(HPV)是誘發宮頸癌前病變的關鍵因素,對于高危型HPV感染的早期篩查是預防宮頸癌變的重要手段。大多數HPV引起的是無癥狀感染,多數患者依靠自身免疫作用可自行清除[2]。高危型HPV持續感染、陰道菌群失調和宮頸微環境免疫功能下降的共同作用是宮頸疾病發生、發展的重要原因[3]。正常陰道內有多種微生物存在,但這些微生物與宿主之間相互依賴和制約,達到動態的生態平衡。正常情況下,陰道內的乳酸桿菌可分解上皮細胞中的糖原為乳酸,使陰道維持在pH<4.5的正常酸性環境[4]。另外,乳酸桿菌還可分泌其他抗微生物因子抑制或殺滅致病微生物,并通過競爭阻止陰道上皮細胞上致病微生物的黏附,維持陰道微生態的平衡[5]。近年來,研究發現HPV感染后的轉歸與陰道微生態系統可能互相影響,維持陰道微生態平衡及宮頸正常微環境免疫功能對HPV感染的防治可能具有重要的作用[6]。本研究以同時進行HPV和陰道微生態檢測的787例女性為研究對象,分析重慶大學城區域高危型HPV感染患者陰道微生態改變情況,為了解高危型HPV感染與陰道微生態環境變化的關系提供依據,同時為HPV感染及宮頸疾病的防治提供新的治療靶點和防治策略。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2021年1月至2022年8月于重慶醫科大學附屬大學城醫院同時進行HPV和陰道微生態檢測的787例女性為研究對象,被檢者年齡為19～69歲,平均(39.57±8.52)歲。納入標準:既往有性生活史;檢測前1 d無性生活,且未進行陰道沖洗;檢測前3 d未進行陰道內用藥;1個月內未進行抗病毒治療及免疫治療。排除標準:月經期、妊娠期和哺乳期女性;既往有宮頸HPV感染史者;曾進行宮頸及陰道相關疾病治療的患者。本研究經重慶醫科大學附屬大學城醫院醫學倫理委員會審批通過(LL-202150號)。

1.2儀器與試劑 HPV基因分型檢測試劑盒購自上海之江生物科技股份有限公司;實時熒光定量PCR儀購自上海宏石醫療科技有限公司;陰道炎聯合檢測試劑盒和檢測工作儀購自江蘇碩世生物科技股份有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集 HPV檢測標本采集:婦科醫生采用專用的宮頸刷在宮頸口獲取宮頸脫落上皮細胞,放入裝有專用細胞保存液的取樣管中立即送檢。陰道微生態檢測標本采集:用2根無菌棉簽拭子于陰道中段側壁或陰道穹窿處旋轉留取陰道分泌物。一根棉簽置于裝有生理鹽水的無菌試管中進行常規顯微鏡檢查,另一根棉簽拭子置于無菌試管中進行功能學指標檢測。

1.3.2宮頸HPV分型 本研究使用的HPV分型檢測試劑盒可檢測17種HPV亞型,其中高危亞型15種,低危亞型2種。按照HPV基因分型檢測試劑盒說明書要求提取宮頸細胞DNA并通過實時熒光定量PCR進行HPV分型檢測。按照是否檢測到高危型HPV感染將研究對象分成高危型HPV陽性組和高危型HPV陰性組。

1.3.3陰道微生態檢測 形態學檢測:將一支陰道分泌物棉簽拭子在裝有生理鹽水的無菌試管中充分擠壓、混勻,隨后吸取標本直接在顯微鏡下觀察分泌物菌群密集度、優勢菌、白細胞、上皮細胞和病原微生物等形態學指標。功能學檢測:應用陰道微生態檢測工作儀檢測陰道分泌物pH值以及厭氧菌、真菌、需氧菌、滴蟲、白細胞等的代謝產物及酶的活性變化。

1.3.4結果判斷 檢測結果中當任何一種HPV亞型出現陽性即提示存在HPV感染。當2種低危亞型中任意一種出現陽性即為低危型HPV感染,任意一種高危亞型HPV出現陽性或存在高危亞型和低危亞型同時感染的情況時則統計為高危亞型感染[7]。當陰道分泌物pH值為3.8～4.5、優勢菌為乳酸桿菌、過氧化氫酶和白細胞酯酶陰性時提示陰道微生態正常,上述指標任何一項出現異常時即為陰道微生態失調。當鏡檢中發現滴蟲則可診斷為滴蟲性陰道炎(TV);發現假絲酵母菌的芽生孢子或假菌絲時可診斷為外陰陰道假絲酵母菌病(VVC);當Nugent>4.5分時診斷為細菌性陰道病(BV)[8]。

2 結 果

2.1HPV整體感染和亞型分布情況 高危型HPV陽性組111例,平均(40.97 ±10.33)歲;高危型HPV陰性組676例,平均(39.32 ±8.19)歲。兩組年齡比較,差異無統計學意義(P>0.05)。對787例就診者的陰道分泌物HPV分型檢測結果進行分析,共檢出HPV感染者112例,感染率為14.23%。在所有HPV 感染者中:單一低危型感染者1例,感染率為0.13%,低危型與高危型混合感染1例,低危型HPV總感染率為0.25%;高危亞型感染者111例,感染率為14.10%。單一高危型感染者78例,感染率為9.91%。單一高危型感染者中以HPV16、18、52和58亞型為主,發生頻次由高到低依次為HPV52(27例,3.43%)、HPV16(10例,1.27%)、HPV58(8例,1.02%)和HPV18(7例,0.89%),見表1。

表1 HPV單一感染分型檢測結果比較

2.2高危型HPV多重亞型感染情況 本研究對象高危型HPV感染以單一型別為主,共檢出78例,感染率為9.91%。同時還檢出感染多重高危型HPV亞型33例,感染率為4.19%。其中雙重高危型HPV亞型感染者人數最多,共25例,感染率為3.18%;同時合并2種以上高危型HPV亞型感染者共8例,感染率為1.01%。

2.3高危型HPV感染者陰道微生態失衡狀況 陰道微生態檢測結果中,高危型HPV陽性組中乳酸桿菌含量異常率(54.05%)、pH值異常率(44.14%)、過氧化氫酶陽性率(36.04%)和BV陽性率(32.43%)高于高危型HPV陰性組,組間差異均有統計學意義(P<0.05)。β-葡萄糖醛酸苷酶陽性和TV在兩組中均未檢出陽性,而高危型HPV陽性組的清潔度(Ⅲ～Ⅳ度)異常率(38.74%)、唾液酸苷酶陽性率(15.32%)、白細胞酯酶陽性(31.53%)、VVC陽性率(6.31%)與高危型HPV陰性組相比,差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 高危型HPV感染陰道微生態失衡分析[n(%)]

2.4高危型HPV感染的多因素分析 以是否發生高危型HPV感染為因變量,以乳酸桿菌含量、pH值、過氧化氫酶及BV為自變量,進行Logistic回歸分析。結果顯示,乳酸桿菌含量異常、pH值異常、過氧化氫酶陽性以及BV陽性是高危型HPV感染的獨立危險因素(OR=2.070、1.766、1.601、1.613,P<0.05),見表3。

表3 高危型HPV感染的危險因素分析

3 討 論

大量研究表明持續的HPV感染是女性發生宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌的主要危險因素[9-11]。在99.7%宮頸癌病例中均可發現HPV感染的存在,吸煙、免疫狀態、性伴侶數量和宮頸細胞學異常與HPV易感性有關[10]。盡管接種九價HPV疫苗能夠預防約90%的HPV相關的癌癥或其他疾病,但HPV篩查仍然是一個重要的疾病預防工具[11]。本文分析了于重慶醫科大學附屬大學城醫院就診的787例女性HPV和陰道微生態的檢查結果,發現HPV總感染率為14.23%,低危型HPV總感染率為0.25%,高危型HPV總感染率為14.10%。高危型HPV感染以單一型別感染為主,與其他地區文獻報道一致[12-13]。多重感染以雙重感染為主,總體感染率為4.19%,其中雙重感染率為3.18%,合并2種以上高危型HPV亞型感染率為1.01%,多重感染中最多感染6種型別。研究顯示,成功進行HPV免疫規劃、創新篩查方法、加強癌前病變和侵襲性宮頸癌的治療,可在2050年前減少40%以上的宮頸癌新病例和500萬相關死亡病例[11]。

近年研究發現,HPV感染后的轉歸與宮頸局部微生態體系密切相關,然而不同地區的研究得出的結論不完全相同[14-16]。本研究進一步對787例陰道微生態指標檢測結果進行分析,顯示高危型HPV感染組乳酸桿菌含量異常、pH值異常、過氧化氫酶陽性和BV陽性是高危型HPV感染的獨立危險因素,提示陰道微生態與高危型HPV 感染有關。本研究中TV在兩組中均未檢出陽性,VVC陽性率在兩組中相比,差異無統計學意義(P>0.05)。已有研究發現,乳酸桿菌含量異常、過氧化氫酶陽性和BV陽性是HPV 感染的危險因素[17-18],與本研究結果一致。也有研究結果顯示在高危型HPV陽性組和高危型HPV陰性組中陰道pH值差異不明顯[19]。乳酸桿菌是一種具有抗菌特性的細菌,在健康的陰道微生物群中占主導地位[20]。研究發現,高危型HPV感染在BV患者中的患病率較高,加德納菌和普雷沃菌可能在HPV感染進展到宮頸病變中起著重要作用[21]。BV導致陰道上皮細胞的免疫力下降和病毒清除能力下降,可能有助于HPV 感染,但BV是否有利于HPV感染的持續仍存在爭議[22-23]。關于VVC、TV 與HPV 感染是否相關也存在爭議[24]。以上關于陰道微生態失衡與高危型HPV感染的相關性研究結論不盡相同,可能與研究樣本量、研究對象的地區差異及檢測方法等因素有關。

綜上所述,重慶大學城區域女性HPV感染主要以單一高危型感染為主,乳酸桿菌含量異常、pH值異常、過氧化氫酶陽性以及BV陽性是高危型HPV感染的獨立危險因素。陰道微生態失衡與高危型HPV的易感性可能密切相關,改善陰道微生態穩態環境可能有助于降低高危型HPV 感染的發生率。陰道微生態與HPV感染的關系研究在HPV感染的預后判斷、療效監測等方面具有重要意義。