黎藥牛耳楓研究進展

彭政忠 張麗艷 唐靖雯 潘梅 盧禮平 楊桃

【摘 要】 從黎藥牛耳楓化學成分、藥理活性、質量評價、制劑產品開發等方面進行歸納總結，綜述了黎藥牛耳楓的化學物質基礎，抗炎、抗膽堿、抗腫瘤等藥理活性，總黃酮類成分、多指標成分、指紋圖譜等質量控制方法，以及已上市制劑產品情況，為進一步開發利用提供參考。

【關鍵詞】 牛耳楓；化學成分；藥理活性；質量評價

【中圖分類號】R285?? 【文獻標志碼】 A??? 【文章編號】1007-8517（2023）01-0053-05

Research Progress of Li Medicine Daphniphyllum Calycinum Benth

PENG Zhengzhong1，2 ZHANG Liyan2 TANG Jingwen1* PAN Mei1 LU Liping1 YANG Tao1

1.Guizhou Warmen Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guiyang 550018，China;

2.School of Pharmacy，Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：The chemical composition， pharmacological activity， quality evaluation， as well as pharmaceutical product development of Daphniphyllum calycinum Benth. were summarized in this paper. The chemical basis， anti-inflammatory， anticholine， antitumor and other pharmacological activities， total flavonoids， multi-index components， fingerprint and other quality control methods， as well as the development of the preparation were reviewed， providing reference for further development and utilization.

Keywords：Daphniphyllum Calycinum Benth.; Chemical Composition; Pharmacologi-cal Activities

牛耳楓為虎皮楠科植物牛耳楓Daphniphyllum calycinum Benth.的干燥地上部分，收載于《貴州省中藥材民族藥材質量標準（2019年版 第一冊）》，具有清熱解毒、活血散瘀、祛風止痛的功效［1］。牛耳楓是黎族民間常用藥，在黎族地區用其治療外傷和炎癥［2］。在《中華本草》［3］《全國中草藥匯編》［4］及《福建藥物志》［5］《廣西民族藥簡編》［6］、《海南植物志》［7］等均有記載，具有很高的藥用價值和開發前景。由牛耳楓和辣蓼組成的復方牛耳楓片，具有理氣健胃、除濕化滯等功效，治療急慢性腸胃炎，臨床療效佳［3］。筆者綜述了牛耳楓化學成分、藥理活性、質量評價、制劑產品開發等方面，為黎藥牛耳楓進一步研究及綜合利用提供參考。黎藥牛耳楓研究進展思維導圖如圖1所示。

1 化學成分

牛耳楓化學成分主要包括生物堿類化合物和黃酮類化合物，還含有少量的三萜類、甾醇類、胡蘿卜苷類和酚酸類等其它化合物，其中槲皮素、蘆丁、山奈酚、木犀草素、5，7-二羥基色原酮等均為常見的黃酮類化合物［8］。目前，在對牛耳楓化合物及其成分含量方面研究相對較多。

王永麗等［9］從牛耳楓乙酸乙酯部位和正丁醇部位分離、鑒定出7 個化合物，其中5-oxymaltol、2，6-dimethyl-3-hydroxychromone為首次從該植物中分離獲得。李晶晶等［10］采用柱層析和重結晶等分離技術，從牛耳楓果實甲醇提取物的乙酸乙酯萃取物中分離、鑒定出10個化合物，其中5，7-二羥基色原酮、對羥基苯甲酸、5，7，4-三羥基-3-甲基黃酮等9個化合物首次從該植物的果實中分離得到。張小坡等［11］采用多種柱色譜方法從牛耳楓枝葉乙醇提取物中分離、鑒定出8個化合物，其中羽扇豆酮首次從交讓木屬植物中分離得到，以及胡蘿卜苷、槲皮素、蘆丁為首次從該植物中分離得到。朱文糧等［12］采用各種色譜方法從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中分離、鑒定出8個生物堿。李晶晶等［13］采用柱層析分離技術和重結晶等方法從牛耳楓葉的乙酸乙酯層分離、鑒定出3個化合物，其中反式對甲氧基肉桂酸、木樨草素為首次從該屬植物中分離得到。沈壽茂等［14］從牛耳楓的莖和葉中分離得到4個新的水飛薊生物堿，即水飛薊素A - D。近年來從牛耳楓中分離、鑒定的化合物見表1。

2 藥理活性

2.1 抗炎作用 宋青等［15］進行了牛耳楓80%乙醇提取物的體內外抗炎作用及其機制研究，通過建立 LPS 誘導的小鼠巨噬細胞ＲAW264.7 體外炎癥模型，結果顯示，牛耳楓提取物抑制了TNF-α、IL-10、IL-1β的分泌，并呈現劑量依賴性。通過 LPS 誘導建立了小鼠內毒素血癥模型，結果顯示，牛耳楓提取物對小鼠血清細胞因子和炎性細胞因子有抑制作用；牛耳楓提取物呈劑量依賴性抑制了肝臟中iNOS 和 TNF-α蛋白的表達，對小鼠內毒素血癥產生較好的預防和治療作用。任守忠等［16］以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼提取物，分析其抗炎機制，研究表明楓蓼提取物23.4、46.8g/kg均能明顯抑制小鼠耳腫脹，楓蓼提取物16.2 g/kg、32.4 g/kg均能顯著抑制角叉菜膠致大鼠足跖腫脹，且均能不同程度地降低炎足組織中TNF-α、IL-1β、PGE2和MDA的含量，但對NO無明顯影響。結果表明，楓蓼提取物可降低小鼠腹腔毛細血管通透性、減少滲出，減輕小鼠耳腫脹和大鼠足腫脹，具有良好的抗炎作用。劉洪梅等［17］以牛耳楓和辣蓼為原料制備楓蓼發酵提取液，探究其鎮痛、抗炎、抗胃潰瘍作用，研究表明，楓蓼發酵提取液顯著抑制乙酸致小鼠扭體反應，在一定程度上能抑制乙酸致小鼠毛細血管通透性的升高，還能顯著抑制二甲苯致耳腫脹和蛋清致足腫脹，減弱乙醇對胃黏膜的損傷以及減少血清中IL-1α、IL-1β的水平，同時抑制組織中HIS滲出，對 PED2滲出也有一定抑制作用。結果表明，楓蓼發酵提取液質量穩定可控，具有良好的抗炎、鎮痛、抗胃潰瘍作用。

2.2 抗膽堿酯酶活性 王永麗等［9］從牛耳楓中得到的deoxycalyciphylline B、deoxyisocalyciphylline B具有抗乙酰膽堿酯酶（AChE）活性，secodaphniphylline、deoxyisocalyciphylline B 具有較強的抗丁酰膽堿酯酶（BChE）活性。見表2。

吳裕紅等［18］以牛耳楓和辣蓼為原料分別制備楓蓼提取物，在乙酰膽堿引起的家兔小腸平滑肌痙攣模型中，對空腸而言，乙酰膽堿使小腸平滑肌收縮活動加強，給予楓蓼水提物、醇提物各劑量（0.125 g/mL、 0.25g/mL、0.5 g/mL）均可使平滑肌收縮張力下降，進而抑制乙酰膽堿引起的小腸平滑肌痙攣；對于回腸平滑肌，楓蓼醇提物各劑量對乙酰膽堿引起的痙攣均有明顯的頡頏作用，最低有效濃度為 0. 125 g /mL，而水提物的最低有效濃度為 0. 5 g /mL。見表3。該抑制作用可能是通過阻斷乙酰膽堿與 M 受體的結合，降低細胞中鈣離子濃度，從而降低小腸平滑肌的興奮度。

2.3 抗腫瘤活性 王永麗［19］從牛耳楓中提取16種生物堿進行體外抗腫瘤活性篩選，結果顯示，2-hydroxyyunnandaphnine D在體外具有較強的抗腫瘤活性，其對人宮頸癌細胞（HeLa）、人肺腺癌細胞（A-549）、人乳腺癌細胞（MCF-7）、人肝癌細胞（HePG-2）和人神經膠質瘤（U-251）等5種腫瘤細胞株均有一定的抑制作用，其中對HePG-2細胞的抑制增殖作用最強，且具有量效和時效關系。曹志然等［20］從牛耳楓的莖葉乙醇浸提物中采用正相硅膠，反相材料（C18，MCI）以及凝膠（Sephadex LH-20，Toyopearl HW-40C）分離得到牛耳楓生物堿F21，并進行了該成分對HePG-2細胞的抑制作用及機制研究，結果表明，牛耳楓生物堿F21在體外對HepG-2細胞具有顯著的抑制作用，其作用機制并非通過激活胱天蛋白酶途徑而誘導腫瘤細胞的凋亡。王蓓等［21］進行了牛耳楓生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D體外抗腫瘤活性及作用機制研究，結果顯示，該生物堿在體外對HepG-2細胞、MCFh7細胞及HeLa細胞3種腫瘤細胞株均有明顯的抑制作用，且具有明顯的時-效和量-效關系依賴性；FDA/PI雙染色熒光顯微鏡觀察顯示，該生物堿組中死亡細胞數較正常對照組細胞死亡數量增加，且隨著劑量的加大細胞死亡數量增加，表明該生物堿在體外具有明顯的抑制腫瘤細胞增殖的作用。劉帥等［22］ 從牛耳楓的莖中分離出一種新的牛耳楓Daphnezomine L型生物堿，對HeLa細胞具有中等的細胞毒活性，IC50為16.0μg / mL。

3 質量評價

唐靖雯等［23］對牛耳楓進行了質量標準研究，建立了以指標成分蘆丁、牛耳楓對照藥材為對照的薄層鑒別（TLC）方法，以及以指標成分蘆丁為含量的高效液相色譜（HPLC）法，結果顯示，TLC斑點清晰，重復性好；蘆丁在0.200～1.403μg范圍內線性關系良好，平均加樣回收率為101.65%，RSD為 2.42%。何遠景［24］建立了牛耳楓中山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的HPLC法，結果顯示，山奈酚-3-O-蕓香糖苷濃度在6.92～69.2 μg/mL之間，且其峰面積呈良好的線性關系。梁穎等［25］建立了同時測定牛耳楓中沒食子酸、原兒茶酸、蘆丁、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、木犀草素、芹菜素、山柰酚等8種成分含量的高效液相色譜串聯三重四級桿質譜（HPLC-MS/MS）法，并結合 TOPSIS 分析法，對不同產地（廣西桂林、海南瓊中、海南海口）牛耳楓樣品的8種成分含量進行對比分析及綜合評價，結果顯示，8種成分在相應的濃度范圍內線性關系良好，且海南海口的藥材綜合質量較好。杜迎翔等［26］建立了牛耳楓的HPLC指紋圖譜方法，標定了11個共有峰，指認了2個峰（蘆丁、槲皮素），各指紋圖譜的相似度均達到 0.85以上；利用系統聚類分析，確定同一地區牛耳楓藥材化學成分的穩定性，說明藥材質量與采集、干燥、運輸及貯存過程有關；利用主成分分析提取了3個主要成分，確定牛耳楓中對第一主成分的影響較大的是蘆丁、槲皮素以及其他 3個未知成分。李海龍等［27］建立了測定牛耳楓藥材中總黃酮的含量方法，總黃酮在7.84～47.04 μg/mL范圍內線性關系良好。

4 制劑產品開發

近年來，各制藥企業利用牛耳楓藥用資源，開發的中藥復方制劑產品楓蓼腸胃康分散片，是以牛耳楓、辣蓼兩味藥材經加工制成的分散片，具有理氣健胃、除濕化滯功能，用于中運不健、氣滯濕困而致的急性胃腸炎及其所引起的腹脹、腹痛和腹瀉等消化不良癥［28］；在急性胃腸炎治療中，有效改善臨床癥狀［29］。此外，以牛耳楓、辣蓼兩味藥材組合開發的中藥復方制劑產品有楓蓼腸胃康顆粒、楓蓼腸胃康口服液、楓蓼腸胃康膠囊、楓蓼腸胃康軟膠囊、楓蓼腸胃康滴丸等，在臨床上有一定的應用。黃騰等［30］采用隨機、雙盲、陽性藥平行對照，多中心、非劣效試驗設計，收集6個月至5歲患兒240例評價楓蓼腸胃康顆粒治療小兒急性腹瀉（濕熱瀉）的臨床有效性和安全性，結果表明，楓蓼腸胃康顆粒對6個月至5歲小兒急性腹瀉（濕熱瀉）止瀉率與兒瀉停顆粒療效相當且起效較快，臨床應用安全。吳珮毓等［31］觀察楓蓼腸胃康口服液聯合思密達治療老年慢性腹瀉的臨床療效，結果表明，觀察組總有效率為94.29%，高于對照組的74.29%，差異有統計學意義（P<0.05）；觀察組治療有效時間為（5.27±2.25）d，短于對照組的（8.58±2.80）d，差異有統計學意義（P<0.05）；兩組不良反應發生率比較，差異無統計學意義（P>0.05）。李燕君［32］研究楓蓼腸胃康膠囊聯合常規三聯（克拉霉素片、奧美拉唑腸溶膠囊和阿莫西林膠囊）治療慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生的效果，結果表明，試驗組幽門螺桿菌（Hp）根除率為82.00%，高于對照組的60.00%，差異有統計學意義（P<0.05）；試驗組不良反應發生率為6.00%，低于對照組的20.00%，差異有統計學意義（P<0.05）。

5 展望

目前，對牛耳楓在化學成分和生物活性方面研究較多，但其藥用成分和藥用機理研究相對較少，嚴重制約著相關產品的開發［8］。采用現代的分離鑒定技術從牛耳楓中獲得的新生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D在體外對HepG-2細胞具有較強的抑制作用，且抑制作用具有較好的時效和量效關系［21］，但其作用機制研究較少且尚不清楚。牛耳楓提物研究發現具有抗炎作用［15］，以及在體外具有顯著的抗AChE 及抗BChE活性［9］，但對于藥理藥效等方面的關注較少。牛耳楓的復方制劑產品楓蓼腸胃康顆粒可調節幼齡大鼠的胃液分泌，對幼齡大/小鼠具有一定的抗炎、鎮痛、保護胃黏膜及解痙作用，表明其對幼齡動物的急性胃炎具有一定療效［33］，但對治療兒科急性胃炎的臨床應用還需進一步研究。牛耳楓的中藥復方制劑產品開發方面主要與辣蓼組合，與其他中藥組合開發的制劑產品較少。因此，下一步對牛耳楓的研究可將化學成分、藥理作用機制、臨床應用三者緊密結合，開發更多以牛耳楓為原料的復方制劑產品。

參考文獻

［1］貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材民族藥材質量標準［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2019：20-21.

［2］劉明生.黎藥學概論［M］.北京：人民衛生出版社，2008：41-42.

［3］國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草［M］.第十二卷.上海：科技出版社，1999：865-867.

［4］全國中草藥匯編編寫組編.全國中草藥匯編［M］.下冊.北京：人民衛生出版社，1978：154-155.

［5］福建省中醫研究所編.福建藥物志［M］.第2冊.福州：福建科學技術出版社，1983：4，162.

［6］黃燮才.廣西民族藥簡編［M］.南寧：廣西壯族自治區衛生局藥品檢驗所，1980：112.

［7］陳煥鏞.中國科學院華南植物研究所編輯.海南植物志（第2卷）［M］.北京：科學出版社，1965：187-188.

［8］陳媚，韓麗娜，劉以道，等.牛耳楓研究進展［J］.熱帶農業科學，2016，36（1）：21-24，29.

［9］王永麗，劉偉，尉小慧，等.牛耳楓的化學成分及抗膽堿酯酶活性分析［J］.中國實驗方劑學雜志，2016，22（20）：53-57.

［10］李晶晶，曾東強.牛耳楓果實中抑菌活性成分的初步分離［J］.農藥學學報，2013，15（3）：261-266.

［11］張小坡，張俊清，裴月湖，等.黎藥牛耳楓化學成分研究［J］.中國現代藥，2011，13（10）：26-29.

［12］朱文糧，羅都強，劉召陽.牛耳楓中生物堿的研究［J］.天然產物研究與開發，2010，22（6）：1024-1027.

［13］李晶晶，曾東強.牛耳楓葉甲醇粗提物的生物活性及化學成分研究［J］.廣西大學學報（自然科學版），2013，38（3）：559-568.

［14］SHEN S M，LI H，WANG G R，et al. Further new complex daphniphyllum alkaloids from the stems and leaves of Daphniphyllum calycinum： structure and stereochemistry［J］. Tetrahedron，2020，76（49）：131616.

［15］宋青，朱粉霞，李冬玉，等.牛耳楓提取物的抗炎作用［J］.中成藥，2017，39（9）：1771-1776.

［16］任守忠，蘇文琴，陳君，等.楓蓼提取物的抗炎作用及機制研究［J］.中藥藥理與臨床，2016，32（1）：160-163.

［17］劉洪梅，陳玉婷，何立美，等.楓蓼發酵提取液總黃酮含量測定及藥效［J］.中國獸醫學報，2016，36（6）：1001-1007，1014.

［18］吳裕紅，彭新宇，張嘉慧，等.楓蓼提取物成分分析及其主要成分黃酮對腸平滑肌的藥效學研究［J］.黑龍江畜牧獸醫，2021（2）：128-136.

［19］王永麗.牛耳楓生物堿體外抗腫瘤活性成分篩選及作用機制研究［D］.保定：河北大學，2012.

［20］曹志然，王永麗，戎瑞雪，等.牛耳楓生物堿F21對HepG-2細胞的抑制作用及機制［J］.中國藥理學與毒理學雜志，2012，26（1）：63-67.

［21］王蓓，戎瑞雪，鄭聰毅，等.牛耳楓生物堿2-hydroxyyunnandaphnine D體外抗腫瘤活性及作用機制［J］. 河北大學學報（自然科學版），2013，33（4）：401-407.

［22］LIU S，ZHANG J H，DI Y T，et al. Daphniphyllum alkaloids with cytotoxic activity from Daphniphyllum angustifolium.［J］.Natural product research，2017，32（18）：2165-2170.

［23］唐靖雯，彭政忠，潘梅，等.牛耳楓質量標準提升研究［J］.中國民族民間藥，2021，30（13）：69-74.

［24］何遠景.HPLC法測定牛耳楓中山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量［J］.四川中醫，2017，35（2）：57-59.

［25］梁穎，許文佳，符策奕，等.HPLC-MS/MS法同時測定牛耳楓中的8種成分［J］.中藥材，2018，41（11）：2615-2618.

［26］杜迎翔，李冬玉，陳家全，等.牛耳楓的高效液相色譜指紋圖譜研究［J］.中藥材，2016，39（12）：2789-2793.

［27］李海龍，劉明生，張俊清，等.牛耳楓藥材中總黃酮含量測定［J］.海南醫學，2012，23（15）：106-108.

［28］王玉鵬，趙麗華，黃順旺.楓蓼腸胃康分散片的質量研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（20）：109-111.

［29］薛微.楓蓼腸胃康分散片對急性胃腸炎的治療作用研究［J］.臨床醫藥文獻電子雜志，2019，6（80）：158-159.

［30］黃騰，王孟清，杜幼蕊，等.楓蓼腸胃康顆粒治療小兒急性腹瀉（濕熱瀉）120例隨機雙盲多中心臨床研究［J］.中醫雜志，2021，62（4）：318-323.

［31］吳珮毓，穆小松.楓蓼腸胃康口服液聯合思密達治療老年慢性腹瀉的療效觀察［J］.檢驗醫學與臨床，2020，17（20）：3016-3017.

［32］李燕君.楓蓼腸胃康膠囊聯合常規三聯治療慢性萎縮性胃炎伴腸上皮化生的效果［J］.中國醫學創新，2020，17（19）：149-153.

［33］茹麗，劉靜，張志蘭，等.黎藥楓蓼腸胃康顆粒對幼齡大/小鼠的抗炎、鎮痛、保護胃黏膜及解痙作用研究［J］.中國藥房，2017，28（1）：67-71.

（收稿日期：2022-04-28 編輯：陶希睿）