Annexin I、p53及PTEN在子宮內膜樣腺癌中的表達及其臨床意義

楊昕,高云,孫振柱

(新疆醫科大學,1.基礎醫學院病理教研室;2.附屬中醫醫院病理科;3.新疆維吾爾自治區人民醫院病理科,新疆 烏魯木齊 830000)

子宮內膜癌(endometrial adenocarcinoma,EC)是原發于子宮內膜上皮的惡性腫瘤。Bokhman[1]根據臨床和病理學差異將EC分為I型和II型,其中>70%為I型,即子宮內膜樣腺癌(EEC)。越來越多的研究發現鈣磷脂結合蛋白Ⅰ(annexin I,AX-I)的表達失調與腫瘤形成密切相關。p53基因參與調控細胞周期、誘導細胞凋亡,在維護基因組穩定性方面有重要作用。較多研究顯示,在子宮內膜癌中p53蛋白表達與子宮內膜癌的組織學類型、臨床分期和淋巴結轉移密切相關,可以作為獨立的預后指標。PTEN是第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因,可以通過拮抗磷酸激酶的活性從而干擾細胞有絲分裂、最終抑制細胞生長和誘導細胞凋亡。PTEN基因的突變可發生在多種腫瘤組織中,是目前發現的在子宮內膜樣腺癌中突變率最高的基因。本研究采用免疫組化方法結合臨床病理特征研究AX-I、p53及PTEN在子宮內膜良性增生、非典型增生和子宮內膜樣腺癌組織中的表達,探討三者在子宮內膜病變、EEC的發生發展及其在疾病鑒別診斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2009年1月至2012年10月新疆維吾爾自治區人民醫院存檔保存的122例子宮內膜活檢及手術標本。全部樣本均經過HE染色制片,且所有HE切片均由兩名病理學專家進行審查。根據2014年WHO[2]診斷標準,選取子宮內膜良性增生(BH組)27例、子宮內膜非典型增生(ATH組)42例及EEC組53例。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 通過Envision(DAKO)兩步法進行。PTEN抗體 (克隆號6H2.1)工作濃度為1∶100;p53(克隆號DO-7)工作濃度為1∶200,均購自DAKO公司。AX-I(ab88865,購自英國abcam)工作濃度為1∶300。BH被用作PTEN和AX-I的陽性對照,食管鱗狀細胞癌被用作p53的陽性對照。

1.2.2 免疫組化結果評判 (1)通過觀察細胞質和/或膜上AX-I的陽性染色。陽性強度為陰性0、淺黃色1、淺棕色2及深棕色3。陽性細胞的比例:<5%為0分,5%～25%為1分,26%～50%為2分,51%～75%為3分,>76%為4分。染色強度與陽性率的乘積分為3個級別:0～4分為(-)、5～8分為(+)和9～12分為(++)[3]。(2) p53陽性為細胞核呈淡黃色至深褐色。在高倍鏡下對1 000個細胞計數,陽性細胞數與總細胞數比值≥10%視為p53陽性表達[4]。(3)PTEN的陽性染色是細胞質染色。使用IRS指數=陽性程度×陽性細胞百分比評估。陽性程度:陰性(0)、淺黃色(1)、淺棕色(2)和淺棕色(3)。(4)陽性細胞的百分比根據整個切片中陽性細胞的比例分為5類:<1%(0級)、1%～10%(1級)、11%～50%(2級)、51%～80%(3級)及>80% (4級)。IRS范圍為0～12分,IRS<2分定義為PTEN表達缺失[5]。

1.3 觀察指標

(1)臨床病理特點;(2)AX-I、p53及PTEN在BH組、ATH組和EEC組的表達情況;(3)AX-I、p53及PTEN表達與EEC臨床病理特征的關系;(4)AX-I、p53及PTEN在EEC中的相關性。

1.4 統計學分析

采用SPSS 22.0軟件對數據進行分析與處理。計數資料以[n(%)]表示,組間比較采用獨立樣本χ2檢驗;相關性采用Spearman相關性分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 臨床病理特點

BH患者27例,年齡25～63歲。ATH患者42例,年齡24～59 歲。53例EEC患者為全子宮切除術和雙側附件切除術的標本,患者年齡24 ～ 79歲;絕經前25例,絕經后28例;G1級36例,G2級13例,G3級4例;<50%肌層浸潤35例,>50%肌層浸潤18例;血管侵犯16例,無血管侵犯37例;卵巢轉移兩例;切除盆腔淋巴結40例,其中淋巴結轉移9例,無轉移31例;臨床1～2期40例,3～4期13例。

2.2 AX-I、p53及PTEN在各組的表達情況比較

在ATH組細胞質或細胞膜上可觀察到AX-I陽性染色。在EEC組p53陽性染色顯示細胞核為淡黃色至深棕色。在BH組和EEC組中PTEN細胞質染色表達。AX-I在ATH組中的陽性表達率與EEC組或BH組比較,差異有統計學意義(P<0.05),BH組與EEC組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。p53在EEC組表達率與ATH組或BH組比較,差異有統計學意義(P<0.05),BH組與ATH組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。PTEN在BH組陰性表達率與EEC組或ATH組其他組比較,差異有統計學意義(P<0.05),ATH組與EEC組比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1-圖4及表1。

2.3 AX-I、p53及PTEN表達與EEC臨床病理特征的關系

各組間AX-I分布與年齡、組織學分級、肌層浸潤、臨床分期、血管侵犯及淋巴結轉移比較,差異均無統計學意義(P>0.05)。各組間p53在組織學分級中差異有統計學意義(P<0.05)。PTEN陰性表達在各組間的分布比較,差異無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表1 各組AX-I、p53及PTEN表達情況比較[n(%),例]

表2 AX-I、p53及PTEN表達與EEC臨床病理特征的關系(例)

2.4 AX-I和p53、PTEN在EEC中的相關性

相關性分析顯示,EEC中AX-I、p53及PTEN的表達不具有相關性(P>0.05);p53與PTEN表達缺失呈負相關(r=-0.270,P<0.05)。見表3及表4。

表3 AX-I和p53、PTEN在EEC中的相關性

表4 PTEN和p53在EEC中的相關性

3 討論

笪冀平等[6]研究顯示,AX-I在ATH組中表達更多,在EEC和BH組的表達減弱甚至消失。本研究中,AX-I在ATH組中高表達,與BH和EEC組差異有統計學意義(P<0.05),而在BH組與EEC組的比較,差異無統計學意義(P>0.05),表明AX-I在EEC發生早期起作用,癌變發生后表達減少。在EEC中的臨床病理特征,如年齡、組織學分級、臨床分期、肌層浸潤、血管侵襲和淋巴轉移差異無統計學意義(P>0.05),間接支持AX-I蛋白在EEC的發病初期發揮作用。因此,AX-I強表達在ATH和EEC鑒別診斷中具有一定價值,有助于早期診斷,并為隨訪提供理論基礎。

p53突變是腫瘤發生發展的高風險事件[7]。Sherman等[8]檢測p53在BH和ATH中均為陰性。Ohkouchi等[9]檢測到p53在EEC的表達率約為16.1%,并與臨床病理分期相關(P<0.05),為晚期事件 ,這也表明p53基因突變與EEC的不良預后相關,具有獨立的預后價值[10-11]。在本研究中,p53蛋白在BH及ATH組織中不表達或弱表達,在EEC組織中高表達,各組間比較,差異具有統計學意義(P<0.05)。此外,p53蛋白表達在組織學分級中差異有統計學意義(P<0.05),表明其表達與不良預后相關。

PTEN突變存在于多種腫瘤中[12],是子宮內膜樣腺癌中發現的突變率最高的基因[13]。前期研究[14]通過免疫組化檢測89份子宮內膜活檢標本發現,約75%的癌前病變和61%的EEC中PTEN表達缺失或減少,提示PTEN功能障礙是子宮內膜腫瘤的早期事件。在本研究中,PTEN蛋白表達缺失在BH、ATH和EEC組中逐漸增加。在BH組與ATH組或EEC組的差異有統計學意義(P<0.05),而ATH組與EEC組比較,差異無統計學意義(P>0.05),提示免疫組化檢測PTEN蛋白表達缺失是診斷EEC及其癌前病變的可靠指標。此外,有研究[15]發現,PTEN失表達的患者比正常表達的患者預后更好。在本研究中,PTEN蛋白失表達與EEC的年齡、組織學分級、臨床分期、肌層浸潤、血管侵犯、淋巴結轉移等各項因素無相關性(P>0.05),間接支持PTEN蛋白失表達可能是子宮內膜腺癌的早期事件,為早期診斷提供參考,與預后有較高的相關性。觀察BH、ATH和EEC的進展發現PTEN蛋白從ATH組的消失對應于AX-I蛋白的陽性表達,提示PTEN缺失和AX-I表達在腫瘤發生時就已出現。

綜上,AX-I表達和PTEN缺失可能是EEC發展的早期事件,可能有助于檢測子宮內膜病變和癌前病變。AX-I、p53及PTEN蛋白的聯合檢測對于ATH和EEC的診斷、鑒定和預測評估具有一定的參考價值。