酸堿滴定法測定山楂炭中枸櫞酸的含量

王小永，馬 麗，周維維，張 征，趙麗娜

（1.承德市食品藥品檢驗檢測中心，河北承德 067000；2.承德醫學院附屬醫院，河北承德 067000）

山楂為薔薇科植物山里紅（Crataegus pinnatifidaBge. var.majorN. E. Br.）或山楂（Crataegus pinnatifidaBge.）的干燥成熟果實，主產于山東、河北、河南等省份。

山楂炭的炮制方法：取山楂飲片，炒至外表面焦黑色，內部棕褐色，取出，放涼，除去碎屑。山楂炭炮制完成后，呈類圓形，皺縮不平，直徑1～2.5 cm，厚0.2～0.4 cm。山楂炭外表面焦黑色，具皺紋，有的片上可見短且細的果柄。果肉呈焦褐色至焦黑色，中部橫切片有5粒淺黃色果核，多脫落而中空，氣焦香，味酸、澀。

中藥制炭是一種傳統的炮制技術，在我國約有兩千年的歷史[1]，《濟陰綱目》記載了“血見黑則止”的說法。清代以來，《醫宗說約》《溫病條辨》《傅青主女科》中均有山楂炒黑的描述。而山楂炭的記載出現在清代《外科證治全生集》《筆花醫鏡》《吳鞠通醫案》《校注醫醇剩義》《百一選方》及《得配本草》等文獻中，《外科證治全生集》中記載山楂炭的炮制方法及功效：“浸透去凈其核，日干炒炭。除產后惡血，消肉積，積滯宿食”；山楂炭作為保和丸的君藥，收載于《筆花醫鏡》中；《百一選方》中記載：“炒炭，治腸風下血”；《得配本草》中記載：“童便浸、姜汁炒炭，去積血甚效”。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

XS105DU型電子分析天平（梅特勒托利多公司）；PB-10型酸度計（賽多利斯公司）；202-OAB型電熱恒溫干燥箱（天津泰斯特儀器有限公司）；HY-5型回旋式振蕩器（常州金壇區中大儀器廠）；超純水儀（哈爾濱優方凈水科技有限公司）；多功能粉碎機（上海樹立儀器儀表有限公司）。

酚酞（批號：20181106），天津市河東區紅巖試劑廠；氫氧化鈉滴定液（0.1 mol·L-1，批號：20220806），天津歐博凱化工有限公司；枸櫞酸（純度為99.5%，批號：C10545742），麥克林公司。

山楂炭樣品購自安國藥材市場。

1.2 實驗方法

1.2.1 水分測定

取山楂炭樣品，用粉碎機粉碎成細粉，精密稱取2.5 g，放置于水分稱量瓶中，將稱量瓶放置在電熱恒溫干燥箱中，溫度調至105 ℃，干燥至恒重，待稱量瓶溫度降至室溫后稱重，計算山楂炭樣品的水分。

1.2.2 溶液的配制

（1）滴定曲線溶液的配制。精密稱取枸櫞酸1.92 g，置于100 mL容量瓶中，用水溶解且稀釋到刻度，混勻；準確吸取10 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻；準確吸取50 mL，置于100 mL三角瓶中，所得枸櫞酸溶液的濃度為0.01 mol·L-1。

（2）待測樣品溶液的配制。取山楂炭樣品細粉約1 g，精密稱定，放置于250 mL帶塞三角瓶中，準確加水100 mL，放置于回旋式振蕩器中振蕩，經過4 h后取出，濾過。準確吸取濾液25 mL，加水50 mL，加酚酞指示液2滴。

（3）樣品空白溶液的配制。取250 mL帶塞三角瓶，不加山楂炭細粉樣品，按照待測樣品溶液的配制方法配制成樣品空白溶液。

（4）回收率溶液的配制。稱取枸櫞酸4.0167 g、4.8155 g、5.6074 g，分別置于100 mL容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，混勻，分別制成39.96 mg·mL-1、47.91 mg·mL-1、55.79 mg·mL-1的低、中、高3個濃度的回收率溶液。

1.2.3 枸櫞酸的含量測定

用氫氧化鈉滴定液（0.1 mol·L-1）滴定至溶液由無色變為紅色，放置30 s不褪色即為滴定終點。同時滴定樣品空白溶液，記錄消耗氫氧化鈉滴定液的體積，每1 mL氫氧化鈉滴定液（0.1 mol·L-1）相當于6.404 mg的枸櫞酸。枸櫞酸的含量計算為

式中：ω為枸櫞酸的含量，%；V為消耗氫氧化鈉滴定液的體積，mL；V0為樣品空白消耗氫氧化鈉滴定液的體積，mL；T為6.404 mg·mL-1；N為氫氧化鈉滴定液的實際濃度，mol·L-1；D為稀釋倍數；m為山楂炭樣品的稱樣量，g；F為0.1，mol·L-1；ω0為水分，%。

2 結果與分析

2.1 滴定指示液優化

用0.1 mol·L-1的氫氧化鈉滴定液滴定0.01 mol·L-1的枸櫞酸溶液，并用酸度計測定pH值，以消耗0.1 mol·L-1的氫氧化鈉滴定液的體積（mL）值為橫坐標，pH值為縱坐標繪制滴定曲線，結果顯示滴定突躍范圍為pH 7.2～11.2，因此在選擇指示液時應考慮變色在pH 7.2～11.2。經查閱文獻[2]，可選擇兒茶酚紫指示液，變色范圍pH 6.0～9.0（黃→紫→紫紅）；甲酚紅指示液，變色范圍pH 7.2～8.8（黃→紅）；酚酞指示液，變色范圍pH 8.3～10.0（無色→紅），通過比較，酚酞指示液由無色變為微紅色更容易觀察，因此指示液選擇酚酞指示液。滴定曲線見圖1。

圖1 氫氧化鈉滴定枸櫞酸溶液滴定曲線圖

2.2 方法學驗證

2.2.1 精密度實驗

精密量取濃度為47.91 mg·mL-1的回收率溶液0.25 mL，置于250 mL三角瓶中，加水50 mL，混勻，滴加酚酞指示液2滴。按照上述方法進行滴定，記錄消耗氫氧化鈉滴定液的體積，重復操作6次，平均消耗體積為1.86 mL，RSD為1.10%。表1結果表明，本方法的精密度良好。

表1 枸櫞酸酸堿滴定精密度試驗結果表

2.2.2 重復性實驗

取同一批次的山楂炭樣品細粉，配制6份待測樣品溶液，測定枸櫞酸的含量，測得平均含量為6.32%，RSD為1.50%。表2結果表明，本方法的重復性良好。

表2 山楂炭滴定重復性試驗結果表

2.2.3 穩定性實驗

取同一批次的山楂炭樣品細粉，配制6份待測樣品溶液，分別放置0 h、4 h、8 h、12 h、18 h和24 h，測定枸櫞酸的含量，測得平均含量為6.32%，RSD為1.22%。表3結果表明，待測樣品溶液在0～24 h內穩定性良好。

表3 山楂炭滴定穩定性試驗結果表

2.2.4 回收率實驗

取枸櫞酸含量為6.33%的山楂炭樣品粉末，經計算，每1 g山楂炭樣品中所含枸櫞酸為63.3 mg，精密稱取9份1 g的樣品，每3份為1組，分別精密加入低、中、高3個濃度的回收率溶液1 mL，配制待測樣品溶液，測定枸櫞酸的含量，結果以mg計，計算回收率。表4結果表明，平均回收率為96.9%，RSD為0.93%，方法準確良好。

表4 山楂炭滴定回收率試驗結果表

2.3 樣品的測定與結果

取6個不同批號的山楂炭粉末樣品配制成待測樣品溶液，測定枸櫞酸的含量，結果見表5。

表5 山楂炭樣品測定結果表

3 結論

枸櫞酸又名檸檬酸，是一種在常溫下易溶于水的有機酸，因此可以采用常溫水提的方式進行樣品提取。其測定的方法較多，有高效液相色譜法[3]、電位滴定法[4]、離子色譜法[5]。《中華人民共和國藥典（2020年版）》一部收載了山楂藥材的枸櫞酸含量測定方法，即利用酸堿滴定的方法測定枸櫞酸含量。酸堿滴定的方法根據酸堿中和反應，利用已知濃度的滴定液滴定待測樣品溶液，根據消耗滴定液的體積計算待測樣品中目標成分的含量，該方法具有操作簡單、節省時間、試劑用量少以及結果直觀等優點。