非酒精性脂肪性肝病患者血清IL-32、IL-6與TNF-α的水平及意義

朱書霞 孫旭彤 孔玲玲 張躍華 陳格 趙紅

(1 青島大學附屬青島市中心醫院消化內科,山東 青島 266042; 2 青島大學醫學部)

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)已經成為全世界最常見的慢性肝病,全世界成人患病率大約為25%[1］。目前常用的無創定量評估肝臟脂肪含量的指標是受控衰減參數(CAP)[2］,可有效評估肝臟脂肪變性的程度,而不受肝纖維化或肝硬化的影響[3-4］。NAFLD的發病機制尚未完全闡明,研究發現,炎癥在其進展中發揮重要的作用。慢性炎癥和胰島素抵抗誘導脂肪組織釋放游離脂肪酸,促進肝細胞脂肪堆積,同時炎癥因子又促進了肝星狀細胞(HSC)的增殖、活化,加速了疾病進展[5-7］。鑒于炎癥在NAFLD發病機制中的重要作用,炎癥因子對NAFLD可能具有一定的診斷價值,使用炎癥因子及其受體拮抗劑治療以延緩NAFLD的進展或可成為今后臨床研究的熱點。國外有研究顯示,NAFLD患者肝臟組織中IL-32的表達水平顯著升高[8-9］,但目前國內尚未見相關報道。本研究通過檢測不同程度NAFLD患者血清IL-32、IL-6和TNF-α水平,并進行差異比較,分析其與NAFLD嚴重程度的相關性,探討IL-32、IL-6和TNF-α在NAFLD發生、發展中的作用。

1 對象與方法

1.1 研究對象

收集2021年7月—2022年5月青島大學附屬青島市中心醫院就診的NAFLD患者87例作為觀察組。納入標準:①所有患者符合中華醫學會肝臟病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組2018年修訂的《非酒精性脂肪性肝病防治指南》中的診斷標準[10］;②無飲酒史或無過量飲酒史(男性飲酒量折合乙醇量每天<30 g,女性每天<20 g);③2個月內未服用降脂藥物及其他肝損害藥物;④年齡18～50歲。排除標準:①患有病毒性肝炎、藥物性肝病、全胃腸外營養、肝豆狀核變性、自身免疫性肝病及其他可知的引起肝功能異常疾病者,②患有惡性腫瘤、內分泌疾病、嚴重感染、血液系統疾病以及心、腦、腎疾病或者免疫功能異常者;③近6個月內有重大手術外傷者。根據CAP值將觀察組分為輕度組15例,中度組28例,重度組44例;另收集同期18～50歲體檢健康者23例作為對照組。

1.2 方法

①采用自行設計的問卷進行調查,問卷內容包括年齡、性別、既往疾病史、煙酒嗜好、飲食習慣等,為研究對象納入和排除的依據。②收集所有研究對象的身高、體質量和空腹血清丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GT)等指標的資料及肝臟CAP值,計算體質量指數(BMI)。③采用酶聯免疫法檢測所有研究對象空腹血清IL-32、IL-6、TNF-α水平,試劑盒購自上海研啟生物科技有限公司。

1.3 統計學方法

2 結 果

2.1 各組研究對象一般資料比較

4組研究對象的性別、BMI比較差異有顯著性(χ2=8.45,F=18.68,P<0.05);重度組與對照組、輕度組、中度組以及輕度組、中度組與對照組BMI比較差異有顯著性(tLSD=2.71～7.35,P<0.05),輕度組與中度組BMI比較差異無顯著性(P>0.05);重度組與對照組性別比較差異有顯著性(χ2=8.34,P<0.05),余各組性別比較差異無顯著意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組研究對象一般資料比較

2.2 各組研究對象血清ALT、AST和γ-GT水平比較

4組血清ALT、AST、γ-GT水平比較差異有顯著性(H=27.58～45.93,P<0.05),其中重度組與對照組、輕度組、中度組相比以及中度組與對照組相比血清ALT水平差異均有顯著性(Z=-53.66～26.83,P<0.05);對照組、中度組與重度組相比血清AST水平差異有顯著性(Z=-38.92、-28.32,P<0.05);中度組、重度組與對照組相比血清γ-GT水平差異具有顯著性(Z=29.54、-45.65,P<0.05)。見表2。

2.3 各組研究對象血清IL-32、IL-6和TNF-α水平比較

4組血清IL-32、IL-6、TNF-α比較差異有顯著性(F=13.91～16.61,P<0.05),其中對照組、輕度組、中度組與重度組相比血清IL-32、IL-6、TNF-α水平差異有顯著性(tLSD=3.44～6.71,P<0.05),中度組與對照組血清IL-32、TNF-α水平比較差異有顯著性(tLSD=-3.44、2.64,P<0.05)。見表3。

表3 各組研究對象血清IL-32、IL-6、TNF-α水平比較

2.4 所有研究對象CAP值與各指標的相關性分析

對所有的研究對象CAP值與各項指標進行Spearman相關性分析顯示,CAP值與BMI及血清ALT、AST、γ-GT、IL-32、IL-6、TNF-α水平均呈正相關(r=0.51～0.66,P<0.05)。

3 討 論

NAFLD是指排除酒精和其他明確的肝損傷因素所致的,以彌漫性肝細胞大泡性脂肪變為主要特征的臨床病理綜合征[10］。若不及時診治,可進展至肝纖維化、肝硬化甚至肝癌,還會導致各種肝外并發癥的發生,如2型糖尿病、心血管疾病、慢性腎病以及某些肝外腫瘤(如結直腸癌),其中心血管疾病是NAFLD的主要死亡原因[11-12］。NAFLD的發病機制目前尚不明確,但越來越多的證據表明,炎癥在NAFLD進展中起著關鍵作用[13-15］。

本研究顯示,NAFLD發病率存在性別差異,其男性占比明顯高于女性,可能與女性高雌激素水平有關。皮下脂肪細胞具有雌激素受體,高雌激素水平促進皮下脂肪堆積,而減少內臟脂肪產生,并且雌激素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡作用,對肝臟起保護作用[16-17］。既往研究結果也表明,NAFLD在男性中的患病率比女性更高[18-19］。后續應擴大樣本量,對年齡分層后進一步探討性別對NAFLD影響。

本研究結果顯示,與對照組相比,NAFLD患者血清ALT、AST、γ-GT、IL-32、IL-6和TNF-α的表達水平升高,且與NAFLD嚴重程度呈正相關,重度組NAFLD患者與對照組相比差異有顯著性。這表明炎癥因子不僅參與了NAFLD發生,還促進其發展,炎癥因子水平越高其介導作用越強,肝細胞受損越嚴重。在NAFLD發生、發展中,脂質在肝細胞的細胞質中積累和儲存導致肝脂肪變性,胞質過量蓄積的脂肪酸發生脂質過氧化,產生大量活性氧,引起氧化應激反應,對肝細胞造成毒害作用,誘導細胞凋亡[20］。凋亡的肝細胞會分泌細胞外囊泡(由外泌體、微囊泡和凋亡小體組成),HSC和庫普弗細胞吞噬凋亡小體,通過病原體相關分子模式和損傷相關分子模式激活其模式識別受體,導致TNF-α和IL-6等細胞因子的分泌[20-21］。此外,肝實質細胞及免疫細胞分泌的細胞因子,如IL-1β、IL-6和TNF-α,可誘導肝胰島素抵抗以及肝細胞內脂質積聚,促進其他免疫細胞的募集,形成惡性循環,進一步誘導肝細胞損傷以及HSC的過度增殖、活化,產生細胞外基質(ECM)導致肝纖維化[21］。

IL-32最初被命名為自然殺傷細胞轉錄物4,是一種促炎細胞因子,已被證明能激活關鍵的促炎細胞信號通路,并且可以誘導多種炎癥細胞因子的分泌[22-23］。目前研究發現,IL-32是感染性疾病、自身免疫性疾病和腫瘤等眾多疾病的致病炎性因子之一,并且已被證實和疾病的嚴重程度呈正相關[24-28］。IL-32在體內主要發揮促進炎癥因子的釋放和免疫調節的作用。有研究發現,IL-32在NAFLD患者肝臟組織中高表達,是嚴重NAFLD患者肝組織中上調最顯著的轉錄物,與肝脂肪變性和肝損傷相關,且在血清中可檢測到,與NAFLD的存在和嚴重程度獨立相關[9,29］,本研究結果與上述研究基本一致。

IL-32作為其他促炎細胞因子的調控因子,通過激活核轉錄因子NF-κB和有絲分裂原激活蛋白激酶MAPK-p38通路誘導多種促炎細胞因子的產生,包括TNF-α、IL-1β、IL-8和IL-6,導致肝臟炎癥和損傷[8,30］,還可通過促進ECM重塑基因的轉錄導致肝臟纖維化[29］。TNF-α也可能在各種病理情況下通過激活絲氨酶/丙氨酸激酶(AKT)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)信號通路誘導IL-32產生,表明IL-32和TNF-α間存在維持炎癥的正反饋回路,然后通過誘導IL-1β、IL-6以及IL-10的分泌來驅動儲脂器官的炎癥反應[8,31］。當IL-32沉默時,促炎細胞因子(IL-6和TNF-α)顯著減少[32］,抑制AKT和JNK途徑,同時也可以抑制IL-32的釋放至接近基礎水平[33］,進一步驗證了炎癥因子之間的正反饋環機制。

綜上所述,血清IL-32、IL-6和TNF-α水平在NAFLD患者中顯著升高,并與NAFLD的嚴重程度呈正相關,血清中IL-32、IL-6、TNF-α的升高與NAFLD患者肝臟炎癥及肝功能損害程度相關,聯合檢測血清IL-32、IL-6和TNF-α水平可以更好地評估NAFLD患者嚴重程度,監測患者的疾病進展情況。由于樣本量的限制,仍需要進一步的研究來評估IL-32、IL-6和TNF-α與NAFLD發病機制間可能的因果關系以及炎癥因子之間的相互作用。

倫理批準和知情同意：本研究涉及的所有試驗均已通過青島大學附屬青島市中心醫院倫理委員會的審核批準(文件號KY202104902)。所有試驗過程均遵照《涉及人的生物醫學研究倫理審查辦法》(2016)的條例進行。受試對象或其親屬已經簽署知情同意書。

作者聲明：趙紅、朱書霞、孫旭彤參與了研究設計;朱書霞、孔玲玲、張躍華、陳格參與了論文的寫作和修改。所有作者均閱讀并同意發表該論文。所有作者均聲明不存在利益沖突。