活化激酶C受體1、四個半LIM結構域蛋白1在食管鱗狀細胞癌中的表達及與患者預后的關系△

喬濱，劉孝民，肖中岳，孫佳春

河南科技大學第一附屬醫院腫瘤外科，河南 洛陽 471003

食管癌是臨床上較為常見的消化系統疾病，多好發于中老年人群。食管癌以食管鱗狀細胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）最為常見，約占全部食管癌類型的90%[1]。ESCC 發生發展與腫瘤相關基因的異常表達密切相關。化療是目前臨床治療ESCC 的重要方法之一，但部分患者對化療反應存在一定異質性，預后亦有很大差異[2]。因此，尋找有效的分子標志物對ESCC 患者對化療的反應進行預測有重要作用，可為ESCC 的個體化治療提供指導意見。活化激酶C 受體1（receptor for activated C kinase 1，RACK1）屬于細胞質內錨定蛋白，已有研究證實，RACK1 參與了多種腫瘤的發生發展，與臨床分期、淋巴結轉移等密切相關[3]。四個半LIM 結構域蛋白1（four and a half LIM domains 1，FHL1）則是一種腫瘤抑制因子，可有效抑制腫瘤的發生發展[4]。但目前關于RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 療效評估及預后預測中的價值仍存在爭議。鑒于此，本研究通過回顧性分析局部晚期ESCC 患者的臨床資料，探討RACK1及FHL1 的表達對局部晚期ESCC 化療療效及預后的評估價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2015年2月至2021年3月河南科技大學第一附屬醫院收治的局部晚期ESCC 患者的臨床資料。納入標準：①經手術切除、穿刺活檢或穿刺細胞學檢查等確診為ESCC；②年齡﹥18 歲；③既往未接受放療、化療；④臨床資料完整。排除標準：①過敏體質；②存在意識障礙或精神類疾病；③合并全身感染性疾病。依據納入和排除標準，本研究共納入122 例ESCC 患者，其中男68 例，女54 例；年齡41～71 歲，平均（57.23±5.47）歲；臨床分期：Ⅲ期64 例，Ⅳ期58 例；腫瘤部位：頸段20 例，胸上段34 例，胸中段53 例，胸下段15 例。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意。

1.2 化療方法

所有患者均采用紫杉醇聯合順鉑同步化療：第1、8 天，紫杉醇80 mg/m2靜脈滴注，第1～3 天，順鉑40 mg/m2靜脈滴注，21 天為一個周期，共化療4 個周期。

1.3 免疫組化法檢測RACK1、FHL1 的表達情況

取122 例ESCC 患者的ESCC 組織及距瘤體5 cm 以上的癌旁組織，制成石蠟切片。組織標本脫水，10%甲醛固定，二甲苯透明，常規石蠟包埋，5 μm 連續切片。采用免疫組化法檢測RACK1、FHL1 的表達情況。采用RACK1、FHL1 兔抗人單克隆抗體，詳細步驟嚴格遵循說明書，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作為陰性對照。

結果判定[5]：RACK1、FHL1 主要定位于細胞核，呈棕色染色判定為陽性。依據染色強度和陽性細胞所占比例進行評分。無著色計0 分，淡黃色染色計1 分，棕黃色染色計2 分，黃褐色染色計3分；無陽性細胞計0 分，陽性細胞所占比例﹤10%計1 分，陽性細胞所占比例10%～50%計2 分，陽性細胞所占比例51%～75%計3 分，陽性細胞所占比例﹥75%計4 分。染色強度評分和陽性細胞所占比例評分相乘，﹤3分判定為陰性，≥3分判定為陽性。

1.4 觀察指標和評價標準

①比較ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 的表達情況。②依據實體瘤療效評價標準評估兩組患者的臨床療效[6]，包括完全緩解（complete response，CR）、部分緩解（partial response，PR）、疾病穩定（stable disease，SD）、疾病進展（progressive disease，PD），將CR+PR+SD判定為有效，PD判定為無效，比較不同臨床療效ESCC患者ESCC組織中RACK1、FHL1 的表達情況。③對所有患者進行為期1年的隨訪，隨訪時間截至2022年3月。

1.5 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；局部晚期ESCC 患者預后的影響因素采用多元Logistic 回歸分析。以P﹤0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 表達情況的比較

ESCC 組織中RACK1、FHL1 蛋白陽性表達率均明顯低于癌旁組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 ESCC 組織和癌旁組織中RACK1、FHL1 表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床療效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達情況的比較

依據實體瘤療效評價標準，有效87 例，無效35例，有效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 陽性表達率均高于無效患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同臨床療效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達情況的比較[n（%）]

2.3 局部晚期ESCC 患者預后的影響因素分析

至隨訪結束，122 例ESCC 患者中，死亡26 例，占比21.31%。單因素分析結果顯示，年齡、性別、吸煙情況、病變部位均可能與局部晚期ESCC 患者的預后無關（P﹥0.05）；淋巴結轉移情況、分化程度、腫瘤直徑、RACK1 表達情況、FHL1 表達情況均可能與局部晚期ESCC 患者的預后有關（P﹤0.05）。多因素分析結果顯示，淋巴結轉移、分化程度為低分化、腫瘤直徑≥5 cm、RACK1 陰性表達、FHL1 陰性表達均是局部晚期ESCC 患者預后死亡的獨立危險因素（P﹤0.01）。（表3）

表3 局部晚期ESCC 患者預后的影響因素分析

3 討論

局部晚期ESCC 的惡性程度較高，相關資料顯示，局部晚期ESCC 經手術治療后復發率較高，5年生存率較低[7]。新輔助化療是在術前進行全身化療，目的是為早期殺滅微小轉移灶并縮小腫瘤體積，從而降低術后復發轉移風險。但惡性腫瘤是不斷演進與異質化的，相同臨床分期給予同樣的治療可能導致預后不一致。故如何準確評估腫瘤生物學行為并據此選擇治療方案，進行療效及預后評估有重要意義。

組織學和病理學檢查是評估診斷腫瘤最客觀、最常用的方法，但獲取腫瘤組織需要活檢，屬于有創檢查。隨著分子生物學的不斷進展，已有研究證實，RACK1、FHL1 等分子標志物在ESCC 發生發展中有重要作用[8-9]。RACK1 是定位于人5 號染色體的支架蛋白，屬于RACK 家族人員之一，可通過與細胞中多種信號分子結合，參與細胞內多個信號通路的轉導。研究顯示，RACK1 可影響細胞周期進程、調節腫瘤細胞的增殖能力[10]。研究指出，RACK1 在口腔鱗狀細胞癌、肺腺癌等惡性腫瘤中持續高表達，是影響患者預后的不良因素[11]。本研究發現，RACK1 在局部晚期ESCC 患者ESCC 組織中的陽性表達率明顯低于癌旁組織，表明RACK1在局部晚期ESCC 中可能發揮抑癌基因的作用，推測RACK1 表達及作用可能具有組織特異性，其在不同腫瘤中可能發揮不同的生物學作用，這可能與RACK1 參與調節多種信號通路有關。

FHL1是FHL家族成員之一，定位于Xq26.3，長度2524 bp，由7 個外顯子和6 個內含子組成。既往已有研究顯示，FHL1 在肺癌、胃癌等多種惡性腫瘤中低表達，參與細胞信號轉導及基因轉錄調控[12]。本研究中，FHL1在局部晚期ESCC患者ESCC組織中的陽性表達率明顯低于癌旁組織，與王哲彥等[13]的研究結果相符。提示FHL1 可能是一種保護性蛋白，其表達下調可能抑制腫瘤細胞增殖。

本研究比較不同臨床療效局部晚期ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 表達情況發現，有效ESCC 患者ESCC 組織中RACK1、FHL1 陽性表達率均高于無效患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。既往研究發現，淋巴結轉移、腫瘤分化程度等均是影響腫瘤患者預后的危險因素[14]。本研究多因素分析結果顯示，淋巴結轉移、分化程度為低分化、腫瘤直徑≥5 cm、RACK1 陰性表達、FHL1 陰性表達均是局部晚期ESCC 患者預后死亡的獨立危險因素（P﹤0.01），但這些因素缺乏特異性。相關報道認為，RACK1、FHL1 表達下調可能促進腫瘤細胞增殖，影響患者的預后[15]。本研究中，RACK1 陰性表達、FHL1 陰性表達均是影響ESCC患者預后的獨立危險因素，表明RACK1、FHL1 可作為評估局部晚期ESCC 患者化療療效的輔助指標之一，同時提示RACK1、FHL1 表達與局部晚期ESCC 患者預后有關，陰性表達患者預后不良的可能性更高。

綜上所述，RACK1、FHL1 在局部晚期ESCC 組織中陽性表達率較低，可作為評估紫杉醇聯合順鉑化療療效、患者預后的可靠指標。本研究不足之處在于樣本量較少、隨訪時間較短，仍需進一步擴大樣本量進行深入研究。