局部晚期宮頸癌患者血清雙腎上腺素樣激酶1、黏蛋白1的表達(dá)及與放療預(yù)后的關(guān)系

于曉，白睿華，李修煒，成慧君#

鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院/河南省腫瘤醫(yī)院1婦瘤科，2病理科，鄭州 450000 3周口市中心醫(yī)院放療科，河南 周口 466000

宮頸癌是發(fā)生在子宮頸的惡性腫瘤，在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中發(fā)病率最高，嚴(yán)重威脅女性健康[1]。宮頸癌起病隱匿，早期無特異性癥狀，多數(shù)患者就診時已處于中晚期，使得治療難度增加，患者易復(fù)發(fā)，預(yù)后較差。局部晚期宮頸癌具有腫瘤體積大、分化程度低、淋巴結(jié)易發(fā)生遠(yuǎn)處擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，放療是目前臨床治療局部晚期宮頸癌的常用方法[2-3]。放療可有效降低宮頸癌局部復(fù)發(fā)率和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率，但放療預(yù)后受到多種因素影響，因此尋找可有效預(yù)測患者預(yù)后的指標(biāo)對于臨床治療方案的選擇和預(yù)后改善具有重要意義[4-5]。雙腎上腺素樣激酶1（doublecortin like kinase 1，DCLK1）可參與調(diào)控神經(jīng)元形成和遷移，可與胰腺上皮內(nèi)瘤變特異性標(biāo)志物協(xié)同表達(dá)增加胰腺癌發(fā)病風(fēng)險，具有原癌基因作用[6]。黏蛋白1（mucin 1，MUC1）是一種高分子蛋白，存在于多種器官上皮細(xì)胞中，可參與細(xì)胞間信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，但在腫瘤中呈異常表達(dá)，可以使蛋白出現(xiàn)糖基化不全或畸形糖基化，是一種腫瘤特異性抗原[7]。目前，有關(guān)DCLK1、MUC1 表達(dá)水平與局部晚期宮頸癌患者放療預(yù)后的研究較少。基于此，本研究探討局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平及其與臨床特征和放療預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床治療局部晚期宮頸癌提供參考依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2017年1月至2019年4月于鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院就診的局部晚期宮頸癌患者的臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為宮頸癌；②確診宮頸癌前未進(jìn)行手術(shù)治療及放化療；③生存時間﹥3 個月；④年齡28～70 歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并子宮內(nèi)膜異位癥、黏膜下子宮肌瘤等子宮疾病；③合并肝、腎功能障礙及免疫系統(tǒng)嚴(yán)重疾病；④接受過激素藥物治療；⑤精神或神經(jīng)疾病，存在認(rèn)知功能障礙。根據(jù)納入、排除標(biāo)準(zhǔn)，共納入102 例局部晚期宮頸癌患者，年齡28～70歲，平均（48.36±4.24）歲；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移57 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移45 例；臨床分期：Ⅱ期55 例，Ⅲ期47 例；分化程度：低分化36 例，中分化29 例，高分化37 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，所有患者均知情同意。

1.2 研究方法

收集并記錄患者臨床資料，包括年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、分化程度、病理類型。采集患者空腹靜脈血8 ml，將樣本保存在抗凝管中，以10 cm 離心半徑3500 r/min 離心15 min，取上清液保存在-80 ℃環(huán)境中。采用酶聯(lián)免疫吸附法按照試劑盒說明書測定血清DCLK1、MUC1 水平。采用雙抗體夾心法，向100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品中加入人DCLK1、MUC1 抗體，反應(yīng)90 min 后棄掉孔內(nèi)液體，再向孔內(nèi)滴加100 μl 生物素化抗體工作液，反應(yīng)60 min，洗滌3次后，滴加100 μl辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）結(jié)合物工作液，反應(yīng)30 min，再滴加底物液和終止液，應(yīng)用全自動酶標(biāo)儀在450 nm 波長下測量光密度值以獲取血清DCLK1、MUC1水平，檢測均在37 ℃環(huán)境下進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

①分析化療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平與臨床特征的關(guān)系。②比較放療前后局部晚期宮頸癌患者的DCLK1、MUC1 表達(dá)水平。③分析化療前DCLK1、MUC1表達(dá)水平與臨床療效的關(guān)系。臨床療效判定標(biāo)準(zhǔn)：病灶和臨床癥狀完全消失為完全緩解；病灶基本消失，臨床癥狀基本緩解為部分緩解；病灶穩(wěn)定，臨床癥狀基本改善為疾病穩(wěn)定；病灶無明顯改善甚至出現(xiàn)新病灶，臨床癥狀無改善甚至加重為疾病進(jìn)展。④分析化療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平與局部晚期宮頸癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用F檢驗(yàn)，兩組比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料以例數(shù)表示；以P﹤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同臨床特征局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

不同年齡、病理類型局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；不同腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和分化程度局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

2.2 放療前后DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

放療后，局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平均明顯低于放療前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表2）

表2 放療前后局部晚期宮頸癌患者DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

表2 放療前后局部晚期宮頸癌患者DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

時間放療前（n=102）放療后（n=102）t值P值DCLK1（ng/ml）3.60±1.57 2.76±1.43 3.99<0.01 MUC1（U/ml）25.35±3.12 21.71±2.76 8.825<0.01

2.3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01），且放療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均隨著疾病發(fā)展逐漸升高。（表3）

表3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

表3 不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

?

2.4 不同預(yù)后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

3年生存局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均明顯低于1年生存患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01）。（表4）

表4 不同預(yù)后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

表4 不同預(yù)后局部晚期宮頸癌患者放療前DCLK1、MUC1 表達(dá)水平的比較

?

3 討論

宮頸癌是危害女性生命健康的惡性腫瘤之一，在35～40 歲和60～64 歲女性中發(fā)病率較高，主要與人乳頭瘤病毒（human papilloma virus，HPV）感染和不良生活習(xí)慣有關(guān)，近年來隨著生活方式的改變，宮頸癌的發(fā)病率逐漸升高且有年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅女性生命健康[8-9]。宮頸癌發(fā)病隱匿、早期無特異性癥狀，有50%以上的患者就診時已處于局部晚期，患者常因復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移導(dǎo)致生活質(zhì)量較差[10-11]。目前，臨床治療局部晚期宮頸癌患者常應(yīng)用手術(shù)與放療結(jié)合的方式，但治療效果受到放療敏感性、耐藥性等因素的影響[12-13]。因此，尋找可以有效預(yù)測放療預(yù)后的指標(biāo)，對于臨床治療方案選擇和預(yù)后改善具有重要意義。

有研究顯示，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤相關(guān)基因的異常表達(dá)相關(guān)[14]。DCLK1 可參與骨架形成并調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動，在胃癌、直腸癌組織中呈異常高表達(dá)[15-16]。MUC1 是一種跨膜蛋白，在多種組織器官中均有表達(dá)[17]。MUC1 表達(dá)水平在腫瘤細(xì)胞中明顯升高，可有效調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖。此外，MUC1還可參與腫瘤免疫逃逸過程，目前以MUC1 為靶點(diǎn)的腫瘤治療已成為研究熱點(diǎn)[18]。本研究結(jié)果顯示，不同年齡、病理類型局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P﹥0.05）；不同腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和分化程度局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。表明血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平與局部晚期宮頸癌患者腫瘤發(fā)生發(fā)展具有密切聯(lián)系，DCLK1、MUC1 高表達(dá)可提示腫瘤惡性程度較高。放療后局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平均明顯低于放療前，表明放療可有效控制腫瘤進(jìn)展，患者血清DCLK1、MUC1 水平降低，通過監(jiān)測患者DCLK1、MUC1 水平可以判斷疾病轉(zhuǎn)歸，為臨床治療提供參考。對患者放療效果和血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，不同臨床療效局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.01），且放療前局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均隨著疾病發(fā)展逐漸升高。提示DCLK1、MUC1 高表達(dá)可能與患者的不良預(yù)后有關(guān)。可能是因?yàn)镈CLK1、MUC1 表達(dá)水平與放療敏感性密切相關(guān)[19-20]。放療可對腫瘤細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制作用，抑制腫瘤細(xì)胞向周圍侵襲，放療前DCLK1、MUC1 水平較低，患者對放療的敏感性較好，臨床治療效果也較好，可取得較好預(yù)后。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示，3年生存局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 水平均明顯低于1年生存患者，表明DCLK1、MUC1 水平與患者預(yù)后有關(guān)，可作為預(yù)測患者預(yù)后的生物標(biāo)志物。通過對放療前后患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平進(jìn)行檢測，可以有效評估放療效果從而改進(jìn)治療方案，有效改善患者預(yù)后。

綜上所述，局部晚期宮頸癌患者血清DCLK1、MUC1 表達(dá)水平與腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期和分化程度有關(guān)，放療前血清DCLK1、MUC1 水平與患者臨床療效和預(yù)后密切相關(guān)，可作為判斷腫瘤轉(zhuǎn)歸和評估放療預(yù)后的重要指標(biāo)。