子宮內膜癌PTEN基因968delA突變檢測技術平臺的構建及初步應用*

李賽,龔詠晴,向花花,董巍檑,馬艷,郭紫芬(南華大學衡陽醫學院 .附屬第一醫院婦產科,.藥學院藥物藥理研究所,湖南衡陽 421001)

子宮內膜癌(endometrial carcinoma,EC)是女性生殖道常見的婦科惡性腫瘤之一,近年來其發生率呈上升趨勢。第10號染色體同源丟失性磷酸酶-張力蛋白(The phosphate and tension homolog,PTEN)基因是繼p53基因后新發現的又1個抑癌基因。研究表明,在子宮內膜癌中PTEN基因突變比包括kras和p53在內的其他任何基因都更為普遍[1]。一項對國外子宮內膜癌患者進行PTEN基因缺失情況的研究顯示,PTEN基因突變率達50%,是子宮內膜癌相關基因中突變率最高的基因,又被稱為子宮內膜癌的管家基因[2]。通過在線查詢COSMIC-CGC數據庫及國外研究PTEN基因突變譜分析,證實第5外顯子與第8外顯子突變是其熱點突變區域[3-4],但國內目前尚未見針對第8外顯子968delA突變情況的報道。由于遺傳背景、種族差異、地域等的差異性很大程度影響到了多態性位點基因頻率的分布,因此,筆者擬運用本研究所前期研究中成功建立的分子開關技術[5],構建對PTEN基因968delA位點突變進行快速、準確檢測的技術平臺,并初步探討中國人群子宮內膜癌患者PTEN基因968delA位點突變情況,以期為國內子宮內膜癌的診治和早期篩查提供新的實驗依據。

1 材料與方法

1.1主要試劑及儀器 MD2000D微量紫外分光光度計(英國Biofuture公司),MyCycler普通PCR儀(美國Bio-Rad 公司) 。瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(DP209-02)、離心柱形質粒小提試劑盒(D6943-01)購自美國Omega公司,血液/細胞/組織基因組DNA提取試劑盒(DP304)、2×Pfu PCR Master Mix(KP201)、100 bp DNA Ladder(MD101-01)、溴化乙錠購自北京天根公司,瓊脂糖、EDTA、Tris(河北宏進化工公司)。……