豬細小病毒VP2蛋白重組桿狀病毒的構建表達與鑒定

丁國偉 李甜甜 徐萍 潘晨 王設市 魏榮榮 榮雪路 范娟

摘? 要：為構建一種能夠用于開發豬細小病毒病毒樣顆粒疫苗的豬細小病毒VP2蛋白的重組桿狀病毒。根據GeneBank數據庫中的豬細小病毒全基因組序列設計并合成了１對能擴增VP2基因的引物，采用PCR擴增豬細小病毒BJ-2株的VP2基因，并將其克隆到桿狀病毒轉移載體pFastBacH TA中，獲得陽性質粒pFastBac-PPV VP2；測序后將該質粒轉化到大腸桿菌DH10Bac感受態細胞中，獲得含有VP2基因的重組桿狀病毒質粒Bacmid-PPV VP2；最后將獲得的重組桿狀病毒質粒Bacmid-PPV VP2轉染Sf9昆蟲細胞，并成功拯救了能穩定表達豬細小病毒VP2蛋白的重組桿狀病毒Bacmid-PPV VP2。結果發現，該重組病毒可用于穩定表達豬細小病毒VP2蛋白，并且表達的VP2蛋白可在體外自我組裝形成病毒樣顆粒，電鏡觀測其顆粒大小與豬細小病毒全病毒大小類似，且形成的病毒樣顆粒與全病毒一樣具有豚鼠紅細胞凝集作用，凝集效價可達1∶2 048。故構建的表達豬細小病毒VP2蛋白的重組桿狀病毒為研制豬細小病毒的基因工程亞單位疫苗奠定了基礎。

關鍵詞：豬細小病毒；VP2基因；重組桿狀病毒；病毒樣顆粒

豬細小病毒（porcine parvovirus，PPV）能導致初產母豬及血清學陰性的經產母豬發生流產、不孕以及產死胎、木乃伊胎和弱仔等[1]。斷奶仔豬多系統衰竭綜合征（porcine post weaning multisystemic wasting syndrome，PMWS）的主要發病原因是仔豬混合感染PPV與豬圓環病毒2型所致[2-3]。PPV具有極強的感染性和傳播性，一旦豬群中的某一頭豬感染PPV，豬群中其他豬在3個月內都可能會感染。另外，PPV難以被清除，尤其是在該病毒流行的豬場，由其引發的母豬繁殖障礙能持續幾年甚至十幾年之久[4]。……